LSD1在結腸癌中的表達及其對結腸癌LoVo細胞遷移侵襲的影響

陳 江，陳 榮，黃家亞，李雪松，王子衛

（七星關區人民醫院普通外科，貴州 畢節 551700）

研究資料顯示，LSD1具有以下作用：（1）抑制結腸癌的轉移；（2）抑制結腸癌的侵襲。現階段來看，賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1會對結腸癌產生相關影響[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月～2017年3月我院收治的結腸癌石蠟組織標本61例（35例癌旁組織），所有標本均經病理學確診為結腸癌者。61例結腸癌石蠟組織標本中有38例男性患者標本、23例女性患者標本；患者年齡在53.3～81.2歲，平均年齡為（67.25±10.15）歲，平均腫瘤直徑為（5.25±2.26）cm；疾病類型：30例左半結腸及直腸、31例右半結腸；按照Duke分期中有10例A期、20例B期、15例C期、16例D期。

1.2 方法

1.2.1 細胞與主要試劑

結腸癌LoVo細胞主要來源于中國科學院細胞庫，LSD1兔抗人多克隆抗體來源于AXHNN公司，全蛋白提取試劑盒購自南京凱基公司，LSD1-shR-NA質粒由上海制藥技術有限公司提供。

1.2.2 免疫組化

切片后，脫蠟水化組織切片，修復抗原后 ，滴入LSD1兔抗體（抗體稀釋度為1:200），室溫下孵育25min。LSD1細胞核內出現棕黃色顆粒為陽性（隨機選擇3個高倍視野，計數300～900個細胞，）染色強度中0分為無染色、1分為淺黃色、2分為棕黃色、3分為棕褐色。陽性細胞計數中1個視野內著色細胞1分為10%以下、2分為10～50%、3分為50～75%、4分為75%以上、0分為陰性。免疫組化結果半定量評分法=染色強度評分×陽性細胞率評分。陰性（-）為0～2分，弱陽性（+）為3分，陽性（++）為4分，（+++）強陽性大于5分。將處于生長期的LoVo細胞接種6孔板，進行瞬時轉染，培養3h～5h后更換雙抗完全培養基，2d后熒光倒置顯微鏡觀察表達情況。Tanswell遷移（未加入基質膠）和侵襲（未加入基質膠）實驗，分為對照組和轉染則，培養1d后，拍照細胞計數，每組各選8個視野。

1.3 統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行統計學分析，數值用中位數（M）和間距（Q）表示，計量資料用（±s）表示，結腸癌組織的賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1表達和臨床病理采用x2檢驗，P＜0.05時為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 LSD1在結腸癌組織的陽性表達率

LSD1在結腸癌組織的陽性表達率為68.85%（42/61），35例癌旁組織陽性表達率為40.00%（14/35），數據比較差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 下調LSD1表達對轉染癌LoVo細胞遷移和侵襲影響

LSD1轉染組細胞遷移數、侵襲數與對照組細胞遷移數、侵襲數比較有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 下調LSD1表達對轉染癌LoVo細胞遷移和侵襲影響（±s）

表1 下調LSD1表達對轉染癌LoVo細胞遷移和侵襲影響（±s）

項目 n 細胞遷移數 細胞侵襲數轉染組 12 40.587±2.002 33.662±1.841對照組 12 222.14±6.63 222.80±6.30 t 10.26555 18.88888 P＜0.05 ＜0.05

3 討 論

LSD1屬于胺氧化酶家族中的一員，研究資料顯示，不同腫瘤細胞的LSD1表達差異所發揮的作用也不相同[2]。本文研究結果顯示LSD1轉染組細胞遷移數、侵襲數與對照組細胞遷移數、侵襲數比較有統計學意義（P＜0.05），LSD1在結腸癌組織的陽性表達率為68.85%（42/61），35例癌旁組織陽性表達率為40.00%（14/35）。下調賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1表達會在一定程度上抑制LoVo細胞侵襲和遷移能力，賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1在結腸癌組織中呈現高表達，在癌旁組織中呈現低表達[3]。賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1在結腸癌轉移中通過轉染結腸癌LoVo細胞數量，而使其細胞呈現減少趨勢.

[1]張元元,付 曉,汪曉鶯,等.結腸癌組織LSD1表達對結腸癌LoVo細胞轉移潛能影響研究[J].中華腫瘤防治雜志,2014,21(18):1435-1439.

[2]丁 杰,廖國慶,張忠民,等.LSD1、E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白在結腸癌中的表達及其意義[J].中國普通外科雜志,2014,23(4):462-467.

[3]吳 哲,黃永亮,徐 凱,等.肝再生磷酸酶-3激活核因子-κB信號通路調控結腸癌LoVo細胞血管內皮生長因子的表達[J].中華實驗外科雜志,2016,33(8):1993-1995.