α-羥丁酸脫氫酶與乳酸脫氫酶比值在發現α-羥丁酸脫氫酶和轉氨酶底物耗盡中的應用研究

萬祥輝 ，楊細媚 ，銀天嬌 ，文燦

在動力學法檢測的生化反應中，由于標本酶含量過高，導致反應體系中酶的底物短時間內消耗殆盡，使得從開始讀數點之前至反應終點的吸光度反應曲線的一段或整段為一平坦曲線，導致結果偏低甚至為“0”或負值，與實際值不符的現象稱為底物耗盡。底物耗盡是生化實驗室日常工作中常遇到的情況，丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、α-羥丁酸脫氫酶（HBDH）是最常見底物耗盡的酶類項目。本實驗室生化試劑為河北艾歐路生物有限公司提供，按照說明書上參數設置乳酸脫氫酶（LDH）檢測上限可以達到 10000U/L，肌酸激酶（CK）、堿性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰轉移酶（GGT）和淀粉酶（AMY）檢測上限可以達到3000U/L以上，這幾種酶線性范圍寬臨床上不易出現底物耗盡；而HBDH、ALT、AST線性范圍上限只能達到1000U/L，容易出現底物耗盡。當結果為負值或兩個相關項目結果相差過大時的底物耗盡容易被發現，但當結果為正常值或相關項目結果沒有明顯沖突時則不易被發現[1]。雖然可以通過設置儀器參數對底物耗盡報警提示[2-4]，但當實驗室信息系統（LIS）不具備接收儀器報警信息功能時，底物耗盡結果存在誤審的可能性。筆者在實際工作實踐中發現，利用HBDH/LDH的比值可以用于發現HBDH和轉氨酶的底物耗盡，尤其是有利于發現容易被忽略的轉氨酶底物耗盡情況。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集我院240例肝功能、腎功能、心功能指標均正常的參考人群的LDH、HBDH結果，男女比例1：1。同時收集了2017年7月至10月生化實驗室日常工作中遇到的HBDH和轉氨酶底物耗盡29個案例。

1.2 儀器與試劑 日立7600（210）全自動生化分析儀，ALT、AST、LDH、HBDH 生化分析試劑盒 （河北艾歐路生物有限公司），校準品（英國朗道），質控品（英國朗道）。

1.3 儀器參數設置及質量控制 試劑參數均按照試劑說明書設置。四個項目的室內質控變異系數（CV）控制在WS/T403-2012規定的室內質控偏倚范圍內[5]，室間質評合格。

1.4 HBDH/LDH比值在發現底物耗盡中的應用用SPSS18軟件分析240例參考人群的HBDH/LDH比值的95%的置信區間。評價比值在實際工作中發現HBDH和轉氨酶底物耗盡的應用價值。

2 結果

240例參考人群年齡分布為10歲至83歲，平均年齡52歲。參考人群的HBDH/LDH比值的95%的置信區間為 0.80～0.82，均值為 0.81，性別差異無統計學意義（t=0.583，P＞0.05）。 以 0.80 為判斷閾值，HBDH/LDH小于0.8，LDH升高其組織來源主要為肝臟、紅細胞或多種組織器官混合型；HBDH/LDH大于0.80，LDH升高其組織來源主要為心肌。HBDH線性范圍上限可以做到1000U/L，因此當LDH測量值大于1250U/L且HBDH/LDH比值小于0.8時，LDH升高可能為肝臟損傷引起，需要同時查看HBDH、AST和ALT反應曲線，確認是否存在底物耗盡；當LDH測量值大于1250U/L且HBDH/LDH比值大于0.8時，LDH升高可能為心肌損傷引起，需要同時查看HBDH和AST反應曲線，確認是否存在底物耗盡。

我們將上述規則作為發現底物耗盡的一個篩查指標。實踐證明2017年7月至10月發生的29例HBDH、ALT、AST底物耗盡案例均可通過HBDH/LDH比值關系推斷發現，敏感性達100%，并且發現了多例容易被忽略的轉氨酶底物耗盡情況。表1為容易被忽略的轉氨酶底物耗盡5個案例。

表1 通過HBDH/LDH發現容易被忽略的轉氨酶底物耗盡案例

3 討論

當人體肝臟、心臟等器官發生嚴重損傷時，ALT、AST、HBDH等酶的大量釋放使血中濃度急劇升高，有時超過正常水平的幾百倍甚至幾千倍[6]，若此時底物耗盡未能及時被工作人員發現，采取稀釋重測的糾正程序，則可能最終報出與實際酶活性相差甚遠的假結果[7]。因此，對檢驗人員來說發現底物耗盡是一項非常重要的工作。表1 5個案例中ALT、AST稀釋前的結果未出現負值，兩者的趨勢也未出現不符合臨床的可疑情況，儀器雖然有字符報警”W”，但LIS不具備接收儀器字符報警的功能，此時若只查看HBDH的反應曲線，則ALT、AST的底物耗盡不能被發現，容易出現誤審，影響患者的診療。

LDH幾乎存在于所有組織中，以心肌、骨胳肌、腎臟和肝臟最為豐富，紅細胞中也含量豐富。LDH包含5種同工酶，根據電泳遷移率快慢，依次為 LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5，心肌和紅細胞含量以LDH1、LDH2為主，肝臟以LDH5為主，HBDH反應的是LDH1和LDH2的活性[8]。因此當心肌損傷為主時，HBDH活性顯著增高，HBDH/LDH比值大于0.8；當肝臟損傷或多器官組織損傷為主時，HBDH/LDH比值小于0.8。根據HBDH線性范圍及HBDH/LDH比值發現HBDH底物耗盡不難，但容易忽視可能同時存在的AST、ALT底物耗盡。

HBDH、LDH作為傳統心肌酶已經被新的心肌損傷標志物取代[9，10]，也有人認為沒有必要聯合檢測HBDH和LDH[11]。本文29例底物耗盡案例顯示，當心肌、肝臟或多組織器官嚴重損傷時，HB-DH、LDH活性會顯著性增高，雖沒有新心肌損傷標志物的敏感性高、特異性強，但依然可以成為臨床協助診斷和療效監測指標。此外研究顯示HBDH、LDH還可以應用于多種疾病的輔助診斷，例如妊娠肝內膽汁淤積癥[12]、白血病[13]、淋巴瘤骨髓侵犯[14]、精神分裂癥[15]等。

有研究認為HBDH/LDH與精子活力和精液質量密切相關[16]，但未見HBDH/LDH用于發現底物耗盡方面的報道。本文給出的HBDH和轉氨酶底物耗盡篩查規則實踐證明可以發現HBDH和轉氨酶的底物耗盡，防止HBDH和轉氨酶底物耗盡的誤審，不失為HBDH和LDH的新用途。