196例抗核抗體譜檢測(cè)對(duì)自身免疫病的診斷意義

劉及生 ，譚福燕 ，焦安君 ，馮曉晶 ，譚立明 ，劉文華 ，胡志輝 ，張 嶸

自身抗體是自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)的重要標(biāo)志[1]，患者血液中存在高效價(jià)自身抗體是AID的特點(diǎn)之一，也是臨床確診AID的重要依據(jù)[2]。AID多為慢性病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus，SLE）、 干燥綜合征(Sjogren Syndrome，SS)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）等。任何性別、年齡均可發(fā)病，以女性為多見；常累及多器官、多系統(tǒng)、反復(fù)發(fā)作、慢性遷延[3]。AID的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一是檢測(cè)出疾病特異性或相關(guān)性自身抗體，這些自身抗體是AID的重要標(biāo)志，每種AID都伴有特征性的自身抗體譜。現(xiàn)對(duì)196例患者血清進(jìn)行了抗核抗體 （ANA）譜檢測(cè)，對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 自2011年1月至2017年1月在江西省宜春市宜豐縣中醫(yī)院檢測(cè)抗核抗體譜的患者196例，年齡7月12d～80歲，平均51歲。其中男性74例，女性122例。男女比例為0.61：1。其中SLE 20例，男 2例，女 18例，年齡 9～73歲，平均41歲。SS 9例，男1例，女8例，年齡33～80歲，平均57歲。硬皮病 (Progressive Systemic Sclerosis，PSS)8例，男 1例，女 7例，年齡 23～65歲，平均45.1歲。RA 5例，男2例，女3例，年齡14～80歲，平均55.76歲。多發(fā)性肌炎/皮肌炎(Polymyositis/dermatomyositis，PM/DM）7 例，男 1 例，女 6 例，年齡9～76歲，平均49.7歲。60例健康體檢者為對(duì)照組，男性22例，女性38例，年齡18～56歲，平均28歲。所有入選者自愿接受實(shí)驗(yàn)并簽署知情同意書。

1.1.1 診斷依據(jù) ⑴SLE按1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)并成為國(guó)際通用的診斷SLE的標(biāo)準(zhǔn)[4]。⑵SS按2012年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)發(fā)表的SS診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。⑶RA按2015年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)/歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟痛風(fēng)分類標(biāo)準(zhǔn)[6]。⑷PM/DM的診斷依據(jù)：90%患者有肌電圖異常；尿肌酸排出量增多，尿肌酐排量明顯減少；肌活檢90%異常，表現(xiàn)為肌纖維或空泡性壞死，肌纖維粗細(xì)不一，有再生現(xiàn)象，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化。⑸PSS的診斷依據(jù)：掌指關(guān)節(jié)近端的硬皮變化，可累及整個(gè)肢體、面部、全身及軀干；雙肺基底纖維化；手指間有凹陷性瘢痕和指墊消失。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴自愿參與且進(jìn)行ANA譜檢測(cè)者；⑵符合診斷標(biāo)準(zhǔn)且有完整臨床、影像學(xué)、組織學(xué)病理資料；⑶健康對(duì)照同時(shí)滿足以下條件：①無自身免疫疾病；②心、肝、腎功能基本正常。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；⑵檢測(cè)期間發(fā)燒、女性月經(jīng)和妊娠期等；⑶合并嚴(yán)重心、肝、肺、腎臟等系統(tǒng)疾病、甲狀腺疾病者；⑷健康對(duì)照組者血常規(guī)、乙肝、血壓、血糖血脂、肝腎功能、胸片、肝膽胰檢查出現(xiàn)異常。

1.2方法

1.2.1 標(biāo)本處理 采集受檢者靜脈血3.0ml左右，1028g/15min離心后分離血清備用。

1.2.2 儀器與方法 ⑴儀器和試劑：EUROBlotMasterⅡ免疫印跡儀、ANA譜（IgG）檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自德國(guó)歐盟公司。⑵方法：線性免疫印跡法（LIA）檢測(cè)抗核抗體譜，檢驗(yàn)方法[7]：檢測(cè)結(jié)果的解釋：在ANA譜檢測(cè)膜條徹底干燥后，根據(jù)膜條上抗原帶著色深淺來判定結(jié)果。ANA譜檢測(cè)抗AMA M2、抗AnuA、抗 Histon、抗 Jo-1、抗 CENP、抗 PCNA、抗dsDNA、抗 PM-Scl、抗 Rib P、抗 Ro-52、抗 SS-A、抗 SS-B、抗 Scl-70、抗 Sm、抗 RNP/Sm 抗體，只要有一種抗體陽(yáng)性，即視為ANA-LIA檢測(cè)陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分布資料陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗核抗體譜分布情況及性別差異情況 在196例ANA譜檢測(cè)結(jié)果中，抗SS-A抗體陽(yáng)性率最高為15.3%，抗J0-1抗體陽(yáng)性率最低為1.0%，15種自身抗體中除抗J0-1、抗PCNA抗體外，其余抗體陽(yáng)性率在男女性別上存在明顯差異。見表1。

表1 196例ANA譜不同性別陽(yáng)性率分布表[n（%）]

2.2 ANA譜陽(yáng)性檢出情況 在196例標(biāo)本中共檢出ANA譜陽(yáng)性61例，陽(yáng)性率為31.1%。其中兩個(gè)及以上抗體同時(shí)陽(yáng)性的患者明顯高于單項(xiàng)抗體陽(yáng)性患者。見表2。

表2 61例ANA譜陽(yáng)性患者中部分臨床診斷結(jié)果[n（%）]

2.3 不同AID中抗核抗體陽(yáng)性率分布 在51例AID中，15種抗核抗體在不同疾病中陽(yáng)性率有差別，在SLE中抗SS-A抗體陽(yáng)性率最高，達(dá)70.0%，在PM/DM中，抗Ro-52抗體陽(yáng)性率最高，達(dá)42.9%。見表3。

3 討論

AID是指機(jī)體的免疫效應(yīng)或免疫效應(yīng)分子，針對(duì)自身組織或細(xì)胞產(chǎn)生的一系列病理性免疫應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致自身組織器官損傷的一大類自身抗體多樣化，譜型范圍廣的疾病[8]。ANA譜廣泛應(yīng)用于各種AID的臨床診斷[9]，其中抗Sm抗體和抗dsDNA抗體陽(yáng)性可作為診斷SLE的特異性指標(biāo)[10]。SS是一種侵犯外分泌腺體的慢性自身免疫性疾病。抗SS-B抗體和抗SS-A抗體，抗Ro-52抗體陽(yáng)性與 SS有很大的相關(guān)性[11，12]。 RA，是一種慢性、系統(tǒng)性的AID，以對(duì)稱的多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)[13]，自身抗體與RA的發(fā)生發(fā)展存在密切關(guān)聯(lián)[14]。PM/DM是以橫紋肌受損為主的系統(tǒng)性炎性肌病，抗Jo-1抗體是臨床診斷PM和DM比較特異性的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)[15]。

筆者回顧分析196例ANA譜檢測(cè)結(jié)果，ANA譜陽(yáng)性率達(dá)31.1%，與國(guó)內(nèi)報(bào)道[16]基本一致，15種特異性抗體的陽(yáng)性率在人群中存在明顯差異，其中抗SS-A抗體的陽(yáng)性率最高，為15.3%，是目前ANA譜分布最廣，最常見的一種抗體，其與各種AID相關(guān)，最常見于SS。抗Ro-52抗體的陽(yáng)性率次之，為13.3%，此抗體沒有疾病特異性，在PM/DM，PSS和其他風(fēng)濕性疾病中均可出現(xiàn)陽(yáng)性。抗Jo-1抗體陽(yáng)性率為1.0%，抗Jo-1抗體是PM/DM的標(biāo)志性抗體。各抗核抗體（除抗Jo-1抗體、抗PM-Scl抗體和抗PCNA抗體外）在性別上存在顯著差異，女性陽(yáng)性率最高的前兩項(xiàng)依次為：抗SS-A抗體、抗Ro-52抗體，陽(yáng)性率分別為：41.0%，36.1%。男性陽(yáng)性率最高的前兩項(xiàng)依次為：抗SS-A抗體、抗Ro-52，陽(yáng)性率分別為：8.2%，6.6%。自身抗體女性陽(yáng)性率明顯高于男性，這在很大程度上與性激素水平有關(guān)，有研究認(rèn)為，人類易患性與年齡，性別，激素水平均有一定的關(guān)系，一般來說，雌激素的作用是增強(qiáng)免疫功能，可以影響抗體類別轉(zhuǎn)換，而睪酮的作用是降低免疫功能。性激素影響B(tài)淋巴系統(tǒng)產(chǎn)生Ig的量，女性比男性能分泌更多的循環(huán)抗體量，尤其當(dāng)女性患AID時(shí)，會(huì)產(chǎn)生更高滴度的自身抗體[17]。由此可見，與抗核抗體相關(guān)的疾病好發(fā)于女性人群。

表3 51例AID抗體血清IGg檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

在61例ANA譜陽(yáng)性抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果中，單項(xiàng)抗體陽(yáng)性占47.5%，兩個(gè)及兩個(gè)以上抗體同時(shí)陽(yáng)性占52.5%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），由此說明各特異性抗體常聯(lián)合出現(xiàn)在人體，這與研究報(bào)道[18]相符，抗SS-A抗體和抗SS-B抗體共同陽(yáng)性占13.1%，抗SS-A抗體和抗R0-52抗體共同陽(yáng)性占34.4%，抗Sm抗體和抗dsDNA抗體共同抗體陽(yáng)性占4.9%，抗ds-DNA單項(xiàng)、抗ds-DNA+nRNP/Sm+Sm平行聯(lián)合對(duì)SLE的診斷具有最好的診斷效率[19]。51例AID患者ANA譜的檢測(cè)結(jié)果顯示，抗 SS-A 抗體在 SLE、PM/DM、RA、PSS、SS中的陽(yáng)性率普遍較高。抗SS-A抗體與各類AID有關(guān)，最常見于干燥綜合征，也見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡和原發(fā)性膽汁性肝硬化中，在SLE中，各種自身抗體的陽(yáng)性率普遍較高，說明SLE中存在多種自身抗體，抗SS-A抗體、抗Sm抗體、抗dsDNA抗體、抗Ro-52抗體、抗RNP/Sm抗體均是SLE的標(biāo)志性抗體[20]，其陽(yáng)性率分別為：70.0%、25.0%、45.0%、55.0%。抗dsDNA抗體不僅可以作為SLE患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)還對(duì)其活動(dòng)性的評(píng)估有著指導(dǎo)作用[21]。抗Jo-1抗體在PM/DM中的陽(yáng)性率最高，達(dá)28.6%，而其在RA、PSS、SS及健康對(duì)照組中的陽(yáng)性率為0.0%，由此說明某些抗體只特定存在于某些疾病中，Jo-1抗體是診斷PM/DM的特異性抗體。在RA中各抗核抗體陽(yáng)性率均較低，其與ANA譜無明顯相關(guān)性。在PSS中，抗Scl-70的陽(yáng)性率最高，達(dá)62.5%，這與文獻(xiàn)報(bào)道相符[22]。在SS中，抗SS-A抗體的陽(yáng)性率與抗Ro-52抗體的陽(yáng)性率均很高，由此發(fā)現(xiàn)，抗SS-A抗體、抗SS-B抗體、抗Ro-52抗體與SS存在明顯的相關(guān)性，結(jié)果與文獻(xiàn)中報(bào)道：抗SSA、SSB抗體是診斷SS的標(biāo)志性抗體[23]相符。 61 例 AID 中除 RA、PM/DM 外，SLE、PSS、SS中的ANA譜陽(yáng)性率均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），說明這三種AID均與ANA譜有較大的相關(guān)性。

總之，ANA譜檢測(cè)各抗體陽(yáng)性率在不同性別間存在差異，一種抗體能存在多種AID中，一種AID也可表現(xiàn)出多種自身抗體，所以在臨床檢測(cè)中應(yīng)采用多種自身抗體的聯(lián)合檢測(cè)，防止漏檢，以提高AID的診斷率。ANA譜檢測(cè)對(duì)臨床疾病的診斷具有重要意義。