513例尖銳濕疣患者人乳頭瘤病毒感染特征分析

梁愛芬，何韶堅，華仙麗，雷亞利，隋洪

為了解東莞地區尖銳濕疣（condyloma acuminate，CA）組織中人乳頭瘤病毒 （human papilloma virus，HPV）感染的型別特點及分布情況，采用導流雜交基因芯片技術檢測HPV21種亞型。現對在我院門診就診的513例尖銳濕疣患者HPV亞型陽性結果進行分析，報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 研究對象參照中國疾病預防控制中心制定的《性傳播疾病臨床診療指南》中CA的診斷標準，選取2014年6月-2016年6月來自本院皮膚科確診為HPV陽性的CA患者，共513例，男性尖銳濕疣患者156例，占30.41%；女性尖銳濕疣患者357例，占69.59%，年齡16～55歲。

1.2 采樣方法 疣體樣本使用專用手術剪刀，剪下疣體組織放入細胞保存液或使用棉拭子反復摩擦疣體直至疣體出血，然后將棉拭子放入細胞保存液中。

1.3 儀器與試劑 廣東凱普生物科技股份有限公司提供的PCR儀（KPTC48）、Hybrid Max醫用核酸分子快速雜交儀、人乳頭瘤病毒HPV分型試劑盒（PCR+膜雜交法）。

1.4 檢測方法 ⑴DNA分離提取：取保存有樣本的細胞保存液500μl，14000rpm離心5min，去上清后，加入細胞裂解液提取DNA。最后取1μlDNA提取液進行PCR擴增；⑵PCR擴增：在KPTC48型PCR擴增儀器上進行擴增，反應條件為95℃9min→95℃20s、55℃ 30s、72℃ 30s 擴 增 40 個 循 環 →72℃5min，擴增結束后進行第二個程序，95℃7min變性處理；⑶導流雜交：95℃7min變性處理的PCR產物→冰水浴 2～5min→加入反應槽孔 45℃雜交10min→加入0.5ml封阻液封閉膜→顯色。⑷結果判讀：陽性為呈藍紫色的點，HPV病毒類型判斷依據HPV分型膜條上的陽性點分布位點情況。

1.5 統計學方法 所有數據采用SPSS 21.0統計軟件包進行分析。計數資料的比較采用χ2檢驗，檢驗標準為 P<0.05。

2 結果

2.1 513例尖銳濕疣患者HPV亞型檢測結果和分布 21種HPV亞型均被檢出，其中單一型HPV感染占 74.27%（381/513）， 多重型 HPV感染占25.73%（132/513），低危型陽性率為 59.84%，高危型陽性率為40.16%；主要HPV型別：6型(23.93%)、11 型 (19.52%)、16 型 (8.91%)、52 型(7.64%)、58 型(6.09%)、18 型(4.87%)，詳見表 1。

2.2 HPV感染性別分組比較 男性患者感染HPV陽性率為30.41%(156/513)，多重型感染率為13.46%（21/156），高危型感染率為 36.54%（57/156，包含多重）；女性患者感染HPV陽性率為69.59%(357/513)，多重型感染率為 31.09%（111/357），高危型感染率為63.03%（225/357，包含多重）。男、女性HPV高危型以16、52、58亞型為主。男女性高危型HPV感染陽性率差異有統計學意義（P<0.01）。

表1 513例尖銳濕疣患者HPV亞型分布情況

2.3 多重感染病例分布情況 132例多重HPV亞型混合感染者中，二重HPV亞型感染87例（65.91%），三重 HPV 亞型感染 30例（22.73%），四重HPV亞型感染9例（6.82%），五重HPV亞型感染 3例 （2.27%）， 六重 HPV亞型感染 3例（2.27%）。組合方式以低-低危型、低-高危型和高-高危型三種，主要以低-高危型為主，詳見表2。

表2 HPV多重感染病例分布情況

3 討論

尖銳濕疣（CA）是以生殖器部位皮膚黏膜的良性增生性損害為主的一種性傳播疾病，復發率及傳染性強，據報道其居于國內性傳播疾病的第二位[1]。而人乳頭瘤病毒（HPV）是其病原體，與多種惡性腫瘤如宮頸癌、陰莖癌、食道癌、肺癌、腸癌的發生相關[2]，是宮頸癌發生的主要因素[3，4]。 目前已發現的HPV基因型約200多種，有45型HPV可感染生殖道和經性接觸傳染，主要有 6，11，16，18，31，33等20多個型別[5]。本研究運用分子生物學技術導流雜交基因芯片法，是目前常用的檢測方法，可同時檢測多種HPV型別，在檢測的靈敏度和特異性有很大的提高[6]。本研究所用試劑盒檢測出21種高低危型HPV基因型，涵蓋了主要流行型別，結果顯示在陽性患者中共檢出21種型別，單一型HPV亞型感染的低危型感染率較高的有HPV6型(23.93%)，HPV11 型(19.52%)，高危型感染率前四名有 HPV16 型(8.91%)、HPV52 型(7.64%)、HPV58 型(6.09%)、HPV18型(4.87%)。與國內文獻報道CA患者 HPV 亞型分布相似[7，8]，與國外 Potocnik U 等[9]研究CA患者皮損中HPV分型以低危型為主，且HPV6、11型明顯占優的報道一致，而在檢測結果中多重型感染的感染率為25.73%，多重型感染形式有低-高危型、低-低危型和高-高危型，以二重感染（65.91%）最多，與山西報道的多重型感染占22.5%和二重感染占72.22%相近[10]。本研究顯示在本地區CA患者中以HPV6型和HPV11型感染為主，可存在多重型別HPV亞型感染。

HPV感染與患者性別因素的關系非常密切，國內一項針對3489例CA患者的流行病學調查顯示，男性患者的發病率明顯高于女性患者，但女性的HPV檢出率卻高于男性[11]，與本研究結果相似，在HPV感染性別分組比較顯示，女性感染比例（69.59%）明顯高于男性。而在HPV感染類型中，本研究結果顯示，男性以HPV6、11、43型等低危型感染為主，女性以HPVl6、52、58型等高危型感染為主，在HPV多重感染中，高危型HPV以混合感染為主(89.7%)，女性更容易感染高危型HPV，而且女性多重感染比例明顯高于男性[12-15]，這值得引起我們的重視。

本研究通過對尖銳濕疣組織HPV型別的檢測，所映出目前該地區尖銳濕疣患者HPV感染型別特點，女性對高危型HPV的易感性，男女性別感染具有差異性，加強HPV感染的預防與健康教育，重視女性CA患者的HPV篩查。