miR-16在早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征患兒血清中表達(dá)水平的研究

朱天一 許云仙 金蕊 陳筱青 胡毓華

早產(chǎn)兒出生之后, 很容易患上呼吸窘迫綜合征［1］, 主要癥狀有呼吸急促、呻吟、發(fā)紺等, 一旦出現(xiàn)這樣的問題就需要及早進(jìn)行治療, 否則很容易導(dǎo)致早產(chǎn)兒呼吸衰竭死亡［2］。即使是存活下來的早產(chǎn)兒, 也很容易留下一系列的后遺癥,比如說, 由于吸入了大量的高體積分?jǐn)?shù)氧最終導(dǎo)致支氣管的發(fā)育不良, 這些后遺癥會(huì)大大降低早產(chǎn)兒的生存和生活質(zhì)量,同時(shí)也給早產(chǎn)兒的家庭帶來承重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。micro RNAs是一種新發(fā)現(xiàn)的單鏈小分子RNA, 這種RNA具有很強(qiáng)的調(diào)節(jié)活性, 同時(shí)micro RNAs還能與其他的分子共同組成一種新的沉默復(fù)合體, 這一沉默復(fù)合體也受到RNA的誘導(dǎo)。另外, 沉默復(fù)合體還與mRNA 的 3’端非編碼區(qū)相互影響, 并在最終的相互作用下能夠抑制翻譯過程的進(jìn)行, 或者是實(shí)現(xiàn)對(duì)mRNA的降解, 進(jìn)而調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的表達(dá)結(jié)果, 最終對(duì)細(xì)胞的活動(dòng)過程進(jìn)行調(diào)控, 也就是對(duì)病理的生理過程進(jìn)行調(diào)控。在炎癥的調(diào)控中, micro RNAs發(fā)揮了重要的作用, 這也為分析早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病機(jī)制探討提供了新的思路。如前所述, 早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征具有發(fā)病急、病情惡化快和死亡率高的特征, 因此在臨床治療過程中, 需要對(duì)該病癥進(jìn)行及時(shí)的診斷, 然而現(xiàn)有的臨床和實(shí)驗(yàn)都缺乏早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的早期診斷指標(biāo), 鑒于此, 本研究通過PCR檢測方法來測量炎癥因子miR-16在呼吸窘迫綜合征早產(chǎn)兒血清中的表達(dá)情況, 旨在為呼吸窘迫綜合征的治療提供參考。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2016年1月~2018年2月于本院出生的60例早產(chǎn)兒作為研究對(duì)象, 根據(jù)是否合并呼吸窘迫綜合征分為RDS組(合并呼吸窘迫綜合征)和對(duì)照組(未合并呼吸窘迫綜合征), 每組30例。

1. 2 方法 以歐洲共識(shí)指南為依據(jù), 對(duì)所有早產(chǎn)兒進(jìn)行處理, 具體的包括給予肺磷脂注射、機(jī)械通氣等。兩組早產(chǎn)兒均采用PCR檢測方法測定血清中的miR-16表達(dá)水平, 在血清miR-16表達(dá)的檢測過程中, 首選要提取每一個(gè)標(biāo)本的RNA, 并檢測標(biāo)本RNA的吸光度值, 計(jì)算標(biāo)本總RNA的純度和質(zhì)量。然后將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA, 并在溫度為82℃的條件下進(jìn)行熒光信號(hào)的采集, 運(yùn)用PCR自帶軟件分析溶解曲線。并將上述過程重復(fù)3次。

1. 3 觀察指標(biāo) 分析PCR檢測血漿miR-16水平的可行性,比較兩組早產(chǎn)兒血漿miR-16表達(dá)水平。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 PCR檢測血漿miR-16水平的可行性分析 將樣本RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄之后, 需要運(yùn)用PCR方法進(jìn)行miR-16表達(dá)水平的檢測。最終的溶解曲線為單峰, 且PCR的產(chǎn)物是單一條帶, 沒有進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的RNA和對(duì)照組都沒有出現(xiàn)增產(chǎn)物, 這一結(jié)果表示可以運(yùn)用RT-PCR進(jìn)行miR-16表達(dá)水平的檢測。為了進(jìn)一步分析血清中miR-16的表達(dá)水平, 需要對(duì)miR-16進(jìn)行合成, 并構(gòu)建相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線, 最終所得的Ct值在現(xiàn)行檢測范圍之內(nèi)。

2. 2 兩組早產(chǎn)兒血漿miR-16表達(dá)水平比較 RDS組早產(chǎn)兒miR-16表達(dá)水平為(18.59±0.66), 對(duì)照組早產(chǎn)兒的miR-16表達(dá)水平為(19.10±0.85), RDS組早產(chǎn)兒miR-16表達(dá)水平低于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.596, P＜0.05)。

3 討論

早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征發(fā)生的主要原因包括：早產(chǎn)兒的肺發(fā)育不成熟和肺表面活性劑合成不足, 呼吸窘迫綜合征大大提高了早產(chǎn)兒的死亡率［3］。在炎癥的調(diào)控中, microRNAs發(fā)揮了重要的作用, 這也為分析早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病機(jī)制探討提供了新的思路。本研究通過PCR檢測方法來測量炎癥因子miR-16在呼吸窘迫綜合征早產(chǎn)兒血清中的表達(dá)水平, 旨在為呼吸窘迫綜合征的治療提供參考。本研究運(yùn)用RT-PCR進(jìn)行miR-16表達(dá)水平的檢測, 首選要提取每一個(gè)標(biāo)本的RNA, 然后將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA, 最后運(yùn)用PCR自帶軟件分析溶解曲線。最終的研究結(jié)果顯示溶解曲線為單峰,且PCR的產(chǎn)物是單一條帶, 這一結(jié)果表示可以運(yùn)用RT-PCR進(jìn)行miR-16表達(dá)水平的檢測。

在腫瘤的治療過程中, miR-16是一種十分重要的抑制劑, 比如說在乳腺癌和淋巴癌中miR-16的表達(dá)水平都出現(xiàn)下降的情況［4］。本研究通過運(yùn)用RT-PCR的方法檢測呼吸窘迫綜合征早產(chǎn)兒血漿中的miR-16表達(dá)水平, 結(jié)果顯示RDS組早產(chǎn)兒miR-16表達(dá)水平低于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.596, P＜0.05) , 并且下降程度與疾病的活動(dòng)度存在顯著相關(guān)。分析早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病機(jī)制可知, 細(xì)胞的過渡活化是主要原因之一, 而臨床上對(duì)早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的治療方法主要包括抑制B細(xì)胞的增殖和促進(jìn)細(xì)胞的凋亡［5］。通過本研究結(jié)果可以推測, miR-16表達(dá)水平的降低可能會(huì)降低細(xì)胞增殖的抑制作用, 進(jìn)而加快了早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病速度。

綜上所述, 通過分析miR-16的表達(dá)水平能夠分析早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的發(fā)病情況, 可以將miR-16看作是早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征的一種標(biāo)志物。