豬場獸醫診斷實驗室的建立及要求

張文通 ，魏 鳳 ，李 峰 ，王金良 ，苗立中 ，沈志強 ＊，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫研究院，山東 濱州 256600）

隨著規模化養殖加速發展，豬病變得極為復雜，僅靠傳統診斷變得極為困難，實驗室診斷就顯得極為重要。目前從事豬病實驗室檢測服務的單位主要有：農業高校或科研院所、飼料廠或獸藥廠及剛興起的“第三方”專業檢測機構等[1-3]。這些服務機構提供的實驗結果在準確性上存疑，或者不能對養豬場疫病防控提供切實可行的防控方案，這兩方面缺陷導致不少養豬場對這些服務機構的檢測不認可。規模化養豬場在內部建設獸醫診斷實驗室已逐漸興起。本文對如何建立規范的豬場獸醫診斷室做了如下綜述。

1 豬場獸醫診斷室選址

在養豬場內部，應選址在遠離生產區、位于生產區下風向、排污設施下游的地方[4]；若在養豬場外部，首先應考慮遠離附近養殖區域，還應考慮遠離居民區及飲用水源區域。

2 豬場獸醫實驗室建筑設置

豬場獸醫診斷室一般應包括：解剖間，試劑室，會議室，檔案室，實驗室等五部分組成。實驗室可細分為：細菌實驗室，病毒實驗室，分子生物學實驗室，免疫學實驗室等。如果實驗室要開展PCR檢測病原工作，為防止氣溶膠污染則需將PCR室進一步劃分配液區、擴增區及電泳區。

3 豬場獸醫實驗室儀器設備

豬場獸醫診斷室儀器設備包括：解剖臺、超凈工作臺或生物安全柜、高壓滅菌鍋、離心機、恒溫培養箱、冷藏冰箱、冷凍冰柜、試劑柜、組織搗碎儀、精密天平、pH計、光學顯微鏡、試驗操作臺、PCR儀、電泳儀、酶標儀、檔案柜等[5]。

4 豬場獸醫實驗室人員配備

豬場獸醫診斷室人員必須接受專業的教育或培訓，懂獸醫知識，能夠分析檢測結果，并將結果用于豬病防控指導。豬場獸醫診斷室人員必須具有較強的生物安全意識，防止病原傳播擴散，防止病原對自己的侵襲[6]。豬場獸醫診斷室人員必須愛崗敬業、不怕臟不怕累。

5 豬場獸醫實驗室工作內容

5.1 細菌分離及鑒定

豬場存在比較常見的豬細菌病有：豬大腸桿菌、豬鏈球菌、副豬嗜血桿菌、豬沙門氏菌及豬傳染性胸膜肺炎等。首先是無菌采集適于細菌分離的病料；選擇合適的固體培養基進行培養；根據其特性進行鏡檢、菌落形態觀察、生化試驗、動物回歸試驗及PCR方法等進行鑒定；挑取單菌落進行純化培養。

5.2 藥敏試驗

藥敏試驗就是為了找到能夠對本場細菌敏感的治療藥物，避免藥物濫用。通常使用紙片擴散法做藥敏試驗。其原理是將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后擴散形成遞減的梯度濃度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內測試菌的生長被抑制，從而形成無菌生長的透明圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度。

5.3 血清抗體測定試驗

豬場中測血清抗體主要有兩方面用途：一是為了淘汰野毒感染（比如豬偽狂犬病、豬口蹄疫等）豬只；另一方面是為了評價疫苗免疫效果。血清抗體測定主要使用的方法是正向間接血凝、酶聯免疫吸附試驗（EL ISA）、凝集試驗等。其中ELISA方法用途最為廣泛。豬場在使用ELISA方法測定血清抗體時，一定要選擇正規廠家生產的ELISA試劑盒。目前國家在有關豬病方面，國家標準物質欠缺，所以無法對豬病診斷試劑盒進行有效規范管理。豬病診斷試劑盒領域市場上存在魚龍混雜局面，所以在選擇豬病診斷試劑盒時一定要選擇有實力有信譽的廠家。操作人員按照試劑盒提供的說明書操作即可。

5.4 病原分子生物學鑒定

豬病進行病原鑒定時，使用分子生物學方法進行快速鑒定，已獲得業內專業人士普遍認可。分子生物學方法用途最廣泛的是聚合酶鏈反應（PCR）或反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）。該方法一般先從組織病料中提取病原DNA或RNA，然后利用PCR儀器進行PCR擴增，用電泳儀進行核酸電泳。如果條件好一點的實驗室也可選擇熒光定量PCR儀器進行PCR擴增，無需核酸電泳。將PCR擴增產物回收，送專業測序機構進行測序，可獲得病原基因信息，進而對豬場病原基因型進行鑒定，鑒定結果可用于追蹤病原來源或選擇合適菌株或毒株疫苗。

5.5 豬用生物制品的制造

有條件的豬場獸醫診斷室可開展豬病高免血清和自家苗制備試驗。豬病高免血清可用于豬病緊急接種治療。制備高免血清應選用近期有過典型臨床表現且明顯康復母豬。制備好的高免血清需進行無菌試驗或安全檢驗，然后才能在豬場推廣使用。

自家苗制備步驟：無菌采取病死豬的淋巴結、肺臟、脾、腎等病變器官；加適量生理鹽水，用高速搗碎機制成組織勻漿，雙層無菌紗布過濾；濾液再用生理鹽水作適當稀釋，最后加入經適當稀釋的甲醛，置37 ℃條件下滅活；滅活完畢，取出置于4 ℃下，保存待用。在投入使用前，對自制的自家組織苗，進行安全性和免疫效果的生物學試驗。

6 豬場獸醫實驗室質量管理

豬場獸醫診斷室應制定一系列的制度，比如包括生物安全措施制度、人員崗位職責制度、儀器使用制度、試劑使用制度、實驗室衛生制度、試驗標準操作制度、病豬尸體無害化處理制度等的制定。檢測人員進入實驗室應進行登記，進行試驗時要做好試驗記錄及實驗報告，使用儀器及領用試劑應登記，試驗結束要做好清場記錄等。檢測人員養成良好的工作習慣將有助于實驗室的質量管理。

7 小結

獸醫診斷實驗室建設的規模大小，應根據各豬場實際情況而定。但要堅持一點，務必使檢測項目與解決豬場實際需要解決問題相適應，也要根據實際情況調整檢測項目。成立實驗室后需經常開展對外交流活動，比如派檢驗員進行業務培訓或交流等，提高檢測水平。