甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆發生與分布

玉山江·麥麥提，楊 渡，韓 盛，阿米乃姆·麥麥提，古勤生

(1.農業部西北荒漠綠洲作物有害生物綜合治理重點實驗室/新疆農業科學院植物保護研究所，烏魯木齊 830091；2.烏什縣依麻木農業技術推廣站，新疆烏什 83406；3.河南省果樹瓜類生物學重點實驗室/中國農業科學院鄭州果樹研究所，鄭州 450009)

0 引 言

【研究意義】甜瓜(Cucumis melo L),又稱哈密瓜，新疆天山南北多數綠洲都適合種植哈密瓜，新疆哈密瓜在國內外享有盛譽，使新疆成為國內重要的哈密瓜生產和出口基地，哈密瓜生產已成為促進農民增收的一大支柱產業[1-3]。病毒病是哈密瓜的重要病害之一，感病植株的果實畸形，果色發生變化，葉片出現花葉、黃化等多種癥狀，導致品質嚴重下降、產量大大降低，而無法進入市場，成為影響出口的限制因素[4]。從1980年開始國內許多學者對新疆哈密瓜病毒病開展了研究，并已報道的哈密瓜病毒有WMV、CMV、SqMV、TNV、甜瓜葉脈壞死病毒(Melon Vein Necrosis Virus，MVNV)。在病毒病大流行時WMV、CMV、SqMV可以混合侵染同一植株[5-9]。目前新疆引起哈密瓜病毒病的病毒種類主要是西瓜花葉病毒(WMV)、黃瓜花葉病毒(CMV)、小西葫蘆黃花葉病毒(ZYMV)、南瓜蚜傳黃化病毒病(CABYV)以及甜瓜葉脈壞死病毒(Melon Vein Necrosis Virus，MVNV)[10-12]。甜瓜葉脈壞死病毒即香甜瓜葉脈壞死病毒，也稱為哈密瓜葉脈壞死病毒病(HmVNV)。MVNV的寄主范圍局限于葫蘆科的黃瓜屬，不侵染南瓜屬的西葫蘆，在甜瓜不同品種上引起明顯的葉脈壞死。該病毒除了侵染香石竹科外,還侵染一些豆科植物, 在寄主上一般體現隱形癥狀。可由蚜蟲以非持久性傳播, 侵染豆科植物的病毒也可由粉虱或者經由種子傳播[13-14]。2014年以來甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆主要瓜產區普遍發生，發病率達到10%～50%，發病率在逐年上升，嚴重影響到部分地區瓜產量與品質。確定該病毒病的生物學特性、分布與發生規律，對深入研究該病的發生機制有重要現實意義。【前人研究進展】1952年甜瓜葉脈壞死病毒病(Melon Vein Necrosis Virus，MVNV)在美國加州甜瓜上發現。1986年，病害在新疆安寧渠首次發現，并對其癥狀、病毒類型、寄主范圍以及傳毒介體進行了初步的研究，報道該病毒病發病率比較低，對哈密瓜生產的影響不太大，不是新疆的優勢毒源，一直不太重視[15-16]。【本研究切入點】1986年，李國玄等對新疆主要產瓜區病毒病發生情況進行調查，在新疆首次報道甜瓜葉脈壞死病毒病，當時對甜瓜生產未造成嚴重危害。將近30年以來，對新疆葉脈壞死病毒病的發生與分布，未見新的文獻報道，該病近幾年來對新疆瓜生產造成嚴重危害。對甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆發生與分布狀況進行初步研究。【擬解決的關鍵問題】對新疆甜瓜主栽區甜瓜葉脈壞死病毒病的發生與分布進行調查與鏡檢，確定該病毒病的生物學特性、分布與發生規律，為該病的鑒別與防治提供方法與依據。

1 材料與方法

1.1 材 料

2014～2016年采自新疆昌吉、阜康、吉木薩、喀什地區、和田民豐、巴州且末等地區，采集疑似甜瓜葉脈壞死病毒病癥狀的樣品；實驗室栽培的3～4葉期健康的薄皮甜瓜幼苗；研缽與研棒、紗布、三角瓶、金剛砂、0.05 mol/L pH7.2的磷酸緩沖液(PBS)。

1.2 方 法

1.2.1 病毒病的人工接菌

剪取小塊感病毒病的葉片放在研缽中并加入適量的磷酸緩沖液，研磨成糊狀。用紗布過濾、取少量病毒病樣汁液，并已灑少許金剛砂對甜瓜幼嫩的葉面上輕抹2～3次后，用滅菌水清洗葉面，每處理接10株,接種一周后，開始觀察病狀發展，觀察時間為30 d。

1.2.2 病毒電鏡樣品制備

將感染MVNV的甜瓜葉片剪成小塊，放到研缽中并滴入1～2滴磷酸緩沖液后，用研磨棒進行研磨。取出汁液，用帶膜樣品載網膜面向下放在汁液上吸收1～3 min，然后用鑷子將移到染色液磷鎢酸(2%，pH 6.7)中，染色1～2 min，取出后用濾紙吸干染液，放入墊有濾紙的培養皿中，使用JEM-1200 EX 投射電鏡對已備好的樣品進行觀察。將其與同樣方法處理的健康的甜瓜葉組織浸出液作對照試驗觀察。

2 結果與分析

2.1 甜瓜葉脈壞死病毒病危害癥狀

研究表明，此病在哈密瓜全生育期都可發生可危害葉片、葉柄、莖蔓及果實，幼苗染病，新葉葉脈及邊緣出現不規則銹褐色壞死斑，隨病害發展瓜苗逐漸變褐枯萎而死亡。成株染病，首先在葉片上出現癥狀，葉片主脈與細脈褪綠變褐，呈網狀壞死，逐漸形成銹褐色壞死大斑，致病葉局部枯死，最后整葉壞死。于此同時，葉柄與莖蔓上出現銹褐色凹陷條紋，后期變成較大的壞死條紋，終使植株由下向上焦枯死亡。果實網紋褪綠變褐，逐步形成銹褐色，使果肉變酸味。圖1(封二)

2.2 甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆發生及分布

該病近幾年內在新疆普遍發生，危害程度在不同地區或者同一地區不同區域都有很大的差異。在北疆昌吉、阜康等地區該病危害比較嚴重。2014年3月該病在昌吉示范區溫室種植的哈密瓜上發生并導致大面積死亡，并當年6月15日該區附近露地哈密瓜發生，造成絕收。該病在南疆喀什伽師縣、和田民豐縣、巴州且末縣均有發生并造成不同程度的危害。該病在北疆瓜區的發生時間比南疆早一些，危害程度比南疆嚴重。表1

2.3 人工接菌試驗

MVNV經汁液人工摩檫接種到薄皮甜瓜上，在室內條件下，觀察15 d后，發現甜瓜葉片局部葉脈開始變弱褐色。接菌25 d后甜瓜葉片葉脈變深褐色并逐步擴展到葉柄。人工接菌發病癥狀與田間發生的癥狀完全一致。

2.4 病毒粒體形態

電鏡載網上的感染MVNV的甜瓜葉片組織浸出液經過處理后，在電子顯微鏡下可觀察到線狀病毒粒體，在測量過的30個病毒粒中，病毒粒子的大小約為660 nm×13 nm，與已報道的甜瓜葉脈壞死病毒病病毒顆粒大小一致[15]。健康甜瓜葉組織浸出液經同樣處理后，未觀察到病毒粒子。 圖2(封二)

表1 甜瓜葉脈壞死病毒病在新疆發病情況與危害程度
Table 1 and severity of disease in Xinjiang

地點location調查時間Observeddate調查面積Observedarea(hm2)發病率Incidencerate危害程度Severityofdisease昌吉市西域種業育種基地2013年6月21日26．67(400畝)90%以上減產60%～100%阜康市西地鎮南灣村2014年6月21日133．33(2000畝)50%～100%80%地塊減產90%以上甚至絕收阜康市上戶溝鄉小泉村2014年6月21日40(600畝)100%減產70%109團2014年6月22日133．33(3000畝)2%～80%部分地塊減產達60%吉木薩爾縣東家灣村2015年6月25日133．33(2000畝)40%～100%減產30%～100%巴州且末縣2015年7月20日6．67(100畝)30%～40%減產30%和田民豐縣2015年7月22日13．33(200畝)10%～20%減產10%喀什伽師縣2016年8月10日33．33(500畝)10%～20%減產10%克拉瑪依市2016年8月1日33．33(500畝)90%以上減產90%以上

3 討 論

1985年新疆烏魯木齊市近郊安寧渠早熟甜瓜上首次發現甜瓜葉脈壞死病毒[15]，當時對甜瓜生產未造成嚴重危害，將近30年以來，對新疆甜瓜葉脈壞死病毒病的發生與危害，均未見發生相關報道，可能是對甜瓜生產沒有造成太大危害，而沒有引起相關專家們注意。該病由葉片葉脈開始發病到葉柄，莖蔓，影響到果實并造成不同程度的危害，成株染病，葉片細脈褪綠變褐，呈網狀壞死，逐步形成銹褐色壞死大斑，最后整個葉片壞死，最終使植株由下向上焦枯死亡，嚴重影響甜瓜產量與質量。該病主要通過汁液和桃蚜非持久性傳毒，自然界中的豆科作物可能是MVNV的毒源植物[8]。近年來，甜瓜葉脈壞死病毒病在我區甜瓜生產普遍發生，北疆瓜區比南疆瓜區發生面積大，發生時間早，造成危害嚴重，可能與氣候、種植規模有關系。該病在不同地區或者同一地區不同年度發病狀況與危害程度都一樣，該病的發生成災規律待進一步研究。

甜瓜葉脈壞死病毒病可種傳，致死溫度55～60度，體外存活期3～5 d。種子帶菌率高，管理粗放，蚜蟲數量多情況下發病嚴重，當氣候條件適宜時，該病發展迅速，易造成大量減產，因此采取適當早播方式的同時，注重種子高溫處理與加強田間管理。

4 結 論

2014年至2016年在昌吉州、克拉瑪依市、喀什伽師縣、和田民豐縣與巴州且末縣的主要瓜區中都發現甜瓜葉脈壞死病毒病并已造成不同程度危害，該病在新疆的發生時間與危害程度上有較大的差異。田間采取的MVNV樣品沒有及時接菌會影響到其發病率，在3 d之內接菌效率比較好。目前對MVNV發生規律與基因組序列方面未見報道，需要進一步研究。

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