血小板直方圖在血小板計數中的應用

劉春都

（南京市浦口醫院檢驗科，江蘇 南京 210031）

血小板具有重要的止、凝血功能，而本身又容易聚集粘附和變型，甚至退變、崩解，使得識別困難[1]。特別是儀器法阻抗原理檢測血小板數時，更難以準確計數。本文通過研究Sysmex XT-4000i提供的血小板直方圖及相關參數，并將計數結果與目視法做對比，分析影響血小板直方圖的因素。

1 材料與方法

1.1 儀器

Sysmex XT-4000i血細胞分析儀；Olympus雙目顯微鏡。

1.2 試劑

Sysmex XT-4000i血細胞分析儀原裝全套試劑以及高、中、低三種室內質控品；草酸銨溶血試劑按《全國臨床檢驗操作規程》配制[2]EDTA-k2真空管。

1.3 標本

本院2017年4.1～4.30每天隨機50份標本，共計1500份。

1.4 方法

每位患者迅速、順利靜脈采血2毫升入EDTA-k2真空管，并立即充分混勻。

（1）在30分鐘內通過Sysmex XT-4000i血細胞分析儀進行檢測，得到血小板直方圖及其參數。

（2）準確吸取20 ul血液加到0.38 ml草酸銨稀釋液中，充分混勻后沖池進行人工目視計數，由本室技術熟練的檢驗人員重復計數三次，取其平均值作為本實驗的參考值。

（3）將每份標本制作一張血涂片，經瑞氏染色后，顯微鏡觀察血小板的分布、形態、大小、聚集情況等。

1.5 統計學方法

數據采用EpiData軟件進行雙錄入，SPSS 17.0分析，t檢驗。

2 結 果

將1500例標本分類如表1。

表1 樣本分類（±s）

表1 樣本分類（±s）

直方圖形態血小板分組例數儀器法（×109/L）目視法（×109/L）tP＜100×109/L25285±1488±151.845＞0.05正常直方圖組（1123例）100～300×109/L694192±23184±241.414＞0.05＞300×109/L177369±29358±271.543＞0.05大血小板組44147±21195±242.647＜0.01小血小板組43241±26234±221.812＞0.05血小板聚集組11674±15185±279.476＜0.01 EDTA-PTCP現象組3564±13154±187.684＜0.01異常直方圖組（377例）血小板衛星現象262±18193±2212.574＜0.01小紅細胞干擾組62258±31157±199.745＜0.01紅細胞溶血、碎片組35261±28160±219.963＜0.01其它干擾組40213±24151±208.119＜0.01

3 討 論

（1）血小板直方圖正常組。Sysmex XT-4000i血細胞分析儀在2--20 fl范圍內分析血小板，直方圖在25--30 fl之間與橫坐標重合，它是一條偏左分布的光滑曲線。由表1可知1123例血小板直方圖正常的標本中，無論血小板＜100、100～300還是＞300×109/L，兩者差異均無顯著性（P＞0.05），說明若直方圖形態正常，無論血小板數升高還是降低，兩者的結果相符。但據報道[3]，輸注脂肪乳后，儀器法血小板數升高，但直方圖形態正常。對一些特殊情況，需要多與臨床聯系，掌握病史、檢查、治療情況等，綜合分析，才能給患者一個準確的結果，這是我們的職責。

（2）血小板聚集直方圖,當血小板聚集時，血小板直方圖曲線右側抬高呈拖尾狀，不與橫坐標重合。從表1可知，兩者差異有極顯著性（P＜0.01）。常見于技術性血液采集不順，血液混勻不充分，機體血液處于高凝狀態等。鏡檢時可見有多少不一的聚集成堆的血小板，對技術性原因引起標本凝集的，需要重新正確采集，并迅速混勻，30分鐘內儀器法檢測。

（3）巨大血小板直方圖[4]，血小板直方圖右側右移，在＞30fl處與橫坐標重合，MPV明顯增大，常常大于12 fl，這時染色鏡檢，可見血小板大小不均明顯[5]，巨大的血小板直徑可以達到20～50 nm以上，如ITP、粒細胞白血病等。由表1可知，巨大血小板組儀器法與目視法相比，結果差異有極顯著意義（P＜0.01），儀器法結果低。

（4）EDTA依賴性假性血小板減少（EDTAPTCP）組，血小板直方圖曲線峰降低，曲線右側抬高，與輕度血小板聚集組直方圖相似，鏡檢可見許多血小板聚集在一起。其[6-7]機理據報道是由EDTA誘導血小板表面結構使血小板之間形成免疫復合物而聚集在一起，當儀器計數血小板時，將血小板聚集體當成一個血小板或紅細胞導致計數假性減少。當更換抗凝劑如用枸櫞酸鹽時，可以糾正EDTA-PTCP現象發生。

（5）血小板衛星現象，在觀察的1500例標本中，共發現了2例血小板衛星現象，從表1可知，儀器法計數與目視法相比結果有顯著性差異（P＜0.01），從上面圖1e可知，它的直方圖和血小板聚集直方圖相似。通過染色鏡檢可見血小板圍繞在白細胞周圍，形似衛星一樣，有的血小板已被白細胞吞噬。當通過儀器法計數時，由于儀器設計原理的局限，使得血小板數量假性減少減少。

（6）小紅細胞干擾組的血小板直方圖，血小板直方圖右側有一鳥翼樣上翹峰，不與橫坐標重合。從表1可知，兩者的差異極顯著性（P＜0.01），儀器法的結果偏高，這是由于儀器設計的原因，血小板和紅細胞計數在同一通道內，通過體積的大小來將它們人為的分開而達到各自計數的目的[8]，當紅細胞＜25 fl時，儀器就將紅細胞誤認為血小板，導致計數偏高。

（7）小血小板直方圖,血小板直方圖曲線光滑，但右側左移，在＜20 fl處與橫坐標重合。從表1可知，小血小板直方圖儀器法與目視法相比較，差異無顯著性（P＞0.05），正常血小板直方圖是偏左的偏態分布的光滑曲線，小型血小板所占的比例占33%～47%[9]。從血涂片染色鏡檢可看到，小型血小板的比例升高，見于脾功能亢進，某些病毒感染等。

（8）紅細胞溶血、紅細胞碎片干擾組,此組直方圖曲線峰右移，右側延長于橫坐標重疊。由表1可知，二者的差異極顯著性（P＜0.01），儀器將一些溶血的、破碎的紅細胞碎片當成血小板而計數，使得結果偏高。

（9）其它干擾組。此組血小板直方圖形態不規則，與正常直方圖有很大的區別。由表1可知，兩者極顯著的差異（P＜0.01）。由鏡檢可見血小板的分布與形態基本正常，分析認為待檢測的血液里面有細菌、真菌、免疫復合物等，干擾了正常血小板的計數，使得儀器法的結果偏高。

綜上所述，當用儀器法計數時[10]，易受到各種因素的干擾而出現錯誤的值。但由于操作簡單快速，可以成批檢測，精密度、效率高等優點，以致在檢驗科廣泛應用。可以通過血小板直方圖的形態，簡單快速的了解測得的值是否正確，達到初篩的作用。當血小板直方圖的形態正常時，儀器法測得的值往往正確的，對一些特殊情況，可以通過了解病人的情況加以糾正。對于血小板直方圖異常者，一定要目視法計數，有時還需涂片染色鏡檢來綜合判斷，才可以得出正確的數。

[1] 熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎[M].6版.北京:人民衛生出版社.2012:125.

[2] 葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:157.

[3] 錢 敏,等.患者輸入脂肪乳后的血小板計數準確性的探討[J].臨床檢驗雜志,2001,19(4):251-253.

[4] 熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎[M].6版.北京:人民衛生出版社,2012:113.

[5] 王兆鉞,施菊妹,韓 悅,等.具有異常結構的巨大血小板的自發性聚集[J].中華血液學雜志,2002,23:123-125.

[6] ChaeH,Kim M,LimJ,etal,Novel method to dissociate Palete Clumps in EDTA-dependent pseudothom bocytopenia based on the Pathophysiological mechanism[J].Clin Chen Lab Med,2012,50(8):1389-1391.

[7] 宓慶梅,施巍宇,郝婉瑩,等.EDTA依賴性假性血小板減少癥一例[J].中華檢驗醫學雜志,2004,77(10):719.

[8] 陸奎英,黃國平.血小板直方圖在血小板計數中的應用探討[J].適用醫技雜志,2005,12(7):1772.

[9] 熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎[M].6版.北京:人民衛生出版社,2012:101.

[10] 戴 雋.血小板檢測的影響因素探討[J].中華醫藥雜志,2016,6(1):122.