天癸方對多囊卵巢綜合征大鼠性激素及胰島素抵抗的影響

鄧 晶，王 敏，羅 菁，應(yīng)伊麗

（武漢市第一醫(yī)院，武漢 430022）

多囊卵巢綜合征（Polycystic ovary syndrome，PCOS）約有50%～60%PCOS患者伴有胰島素抵抗[1]。研究[2]指出，高胰島素血癥、胰島素抵抗會加重PCOS各種病理生理改變，誘導(dǎo)PCOS各種遠期并發(fā)癥。祖國醫(yī)學(xué)將PCOS歸屬于“月經(jīng)后期”“不孕”等范疇，認(rèn)為此病病機為脾腎兩虛、痰瘀互結(jié)。本研究就通過采用天癸方治療胰島素抵抗的PCOS大鼠模型，為中醫(yī)藥治療胰島素抵抗PCOS提供循證醫(yī)學(xué)依據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1 動物及飼料 選擇健康雌性大鼠50只，分成5組，每組均為10只，均為雌性，體質(zhì)量40～80 g，均由上海市實驗中心提供，采用單籠飼養(yǎng)籠系統(tǒng)飼養(yǎng)。飼料均購自上海同濟大學(xué)實驗動物中心。高脂飼料參考文獻[3]自行配置。硫酸普拉睪酮鈉溶液按照100 mg硫酸普拉睪酮鈉和10 mL注射用水配置而成；二甲雙胍按每日0.38 g/kg混懸液配制而成。

1.2 建模方法 參考文獻[4]建立胰島素抵抗PCOS模型，采用21 d斷乳的未成年雌性大鼠予顆粒喂養(yǎng)，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d。2 d后正常對照組進行顆粒喂養(yǎng)，自由飲水，余4組均高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)80 d。從第60天開始按照大鼠每日體質(zhì)量給予皮下注射硫酸普拉睪酮鈉溶液，劑量為9 mg/d進行，連續(xù)20 d，第20天抽取靜脈血，檢測T、LH、FSH、FINS、FBG、E2含量水平，計算出ISI，對不符合胰島素抵抗型PCOS大鼠模型者剔除，正常對照組則每日皮下注射0.4%注射用水，連續(xù)20 d。

1.3 分組及給藥方法 天癸方由蒼術(shù)、膽南星、紫河車、丹參、益母草、茯苓、香附、半夏、淫羊藿、熟地黃、石斛、山藥、麥冬、巴戟天、葛根組成，比例為15:20:15:20:10:10:10:15:20:15:10:10:10:10:30。以每日6 mL/kg給藥，均灌胃處理。建模成功后分為正常對照組、模型組、中藥治療組、西藥治療組、中西醫(yī)結(jié)合治療組。分別予蒸餾水0.4 mL灌胃、蒸餾水0.4 mL灌胃、中藥天癸方3 mL灌胃、二甲雙胍0.38 g/(kg·d)灌胃、中藥天癸方3 mL+二甲雙胍0.38 g/(kg·d)灌胃， 每日上午9: 00開始用藥，連續(xù)給藥 20 d 后處死。

1.4 觀察指標(biāo) 連續(xù)治療20 d后，陰道涂片提示為大鼠失去動情期，末次給藥，禁食1 d后用2%戊巴比妥鈉0.3 mL腹腔麻醉，成功后腹主動脈取血3 mL，以3 000 r/min離心5 min后分離血清，在-80℃下備用。采用化學(xué)免疫發(fā)光法檢測T、LH、FSH、E2。取大鼠卵巢，用10%多聚甲醛液固定后常規(guī)打蠟包埋1 d后取切片，用免疫組織化學(xué)分析法檢測血清IGF-1水平。采用葡萄糖氧化酶法檢測FBG，采用放射免疫法檢測FINS。ISI和HOMA-IR計算方法參考文獻[5]進行。ISI計算方法為1/FINS×FBG，HOMA-IR計算方法為FBG×FINS/22.5，評估胰島素敏感性和胰島素抵抗情況。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組樣本對應(yīng)數(shù)據(jù)采用獨立樣本t檢驗，計量資料采用χ2檢驗，多組間比較采用F檢測，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 各組在血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)比較 模型組在血清T、LH、LH/FSH、IGF-1、E2上較正常對照組顯著升高，F(xiàn)SH顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明造模成功。與模型組比較，中藥組、西藥組、中西醫(yī)結(jié)合治療組在T、LH、LH/FSH、IGF-1、E2上較模型組顯著下降，F(xiàn)SH則顯著升高，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而中西醫(yī)結(jié)合治療組較中藥組、西藥組在以上指標(biāo)上改善更加顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.2 各組在血糖和胰島素抵抗指標(biāo)比較 正常對照組在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平上顯著低于其他4組（除模型組ISI水平最低外）（P＜0.05），模型組在FBG、FINS、HOMA-IR水平上最高，ISI水平最低，與其他組別比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），中藥組和西藥組在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），而中西醫(yī)結(jié)合治療組在FBG、FINS、ISI、HOMA-IR水平上改善最顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 各組在血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)比較 （ ，n = 10）

表1 各組在血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)比較 （ ，n = 10）

注：與對照組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

組 別 T/（ng/mL） FSH/（miu/mL） LH/（miu/mL） LH/FSH IGF-1 E2（ng/L）正常對照組 4.62±0.56 2.51±0.22 3.51±0.64 1.79±0.14 8.45±1.24 573.12±112.34模型組 17.84±2.45# 1.72±0.14# 5.79±1.05# 3.94±0.92# 28.94±4.11# 1213.45±167.34#中藥組 9.33±1.13#△ 2.11±0.17#△ 4.51±0.72#△ 2.31±0.79#△ 17.11±3.24#△ 899.46±134.33#△西藥組 9.31±1.02#△ 2.02±0.12#△ 4.78±0.76#△ 2.61±0.72#△ 12.45±2.89#△ 875.67±126.75#△中西醫(yī)結(jié)合治療組 6.32±0.74#△ 2.49±0.19#△ 4.05±0.59#△ 1.63±0.45#△ 10.12±1.86#△ 689.45±119.46#△

表2 各組在血糖和胰島素抵抗指標(biāo)比較 （ ，n = 10）

表2 各組在血糖和胰島素抵抗指標(biāo)比較 （ ，n = 10）

注：與對照組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

組 別 FBG/（mmol/L） FINS/（μg/L） ISI HOMA-IR正常對照組 3.14±0.48 12.56±0.25 0.26±0.31 1.78±0.25模型組 5.78±0.67# 23.13±0.34# 0.23±0.15# 5.67±0.37#中藥組 4.33±0.41#△ 17.89±0.31#△ 0.27±0.17#△ 3.62±0.34#△西藥組 3.81±0.25#△ 15.11±0.24#△ 0.27±0.19#△ 2.48±0.29#△中西醫(yī)結(jié)合治療組 3.71±0.21#△ 11.34±0.21#△ 0.31±0.18#△ 2.11±0.24#△

3 討論

從中醫(yī)角度分析PCOS，病因病機為脾腎兩虛、痰瘀互結(jié)，為本虛標(biāo)實證，標(biāo)為痰瘀阻滯胞宮所致。結(jié)合相關(guān)文獻[6-8]，可從三個方面分析，其一是脾失健運，水濕不化，痰濕內(nèi)生，痰濕阻滯形成血瘀，痰瘀互結(jié)，阻閉沖任胞脈，日久蘊而化毒，形成痰瘀毒交織現(xiàn)象；其二脾腎兩虛、運化無力，水谷精微不能化生，則郁而化熱，出現(xiàn)陰虛內(nèi)熱現(xiàn)象；其三腎陽虧虛，溫煦作用乏力，則全身機體功能下降。從PCOS上看，胰島素抵抗時體內(nèi)過多葡萄糖、胰島素和游離脂肪酸破壞機體陰陽平衡，屬于亢則害，這種害就造成體內(nèi)蓄積過多[9]。而胰島素受體和受體抵抗后，造成受體功能和結(jié)構(gòu)改變，胰島素功能逐漸喪失，故出現(xiàn)高糖代謝紊亂。臨床治療調(diào)補脾腎、清除痰瘀邪毒同時要應(yīng)用清熱解毒藥物以順應(yīng)陰陽消長平衡[10]。

在本方中，紫河車、淫羊藿、熟地黃、石斛、山藥、巴戟天溫補腎陽、通陽化氣、填精補腎；蒼術(shù)、膽南星、茯苓、半夏祛濕化痰、利水滲濕杜絕生痰之源，加上丹參、香附疏肝理氣、活血化瘀；益母草活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫，廣泛運用在婦科疾病中，麥冬、葛根生津止渴。諸藥共奏調(diào)補脾腎、化痰祛瘀、清熱解毒。結(jié)合本次結(jié)果，天癸方在改善胰島素抵抗PCOS療效上和二甲雙胍相似，兩者合用后在T、LH、IGF-1、E2水平上顯著下降，能改善FBG、FINS、ISI、HOMAIR水平，這證實中藥能促進胰島素抵抗敏感指數(shù)下降，能降低血清中FINS含量水平，能減少IGF-1合成，阻斷雄激素合成，降低血清雄激素水平，促進卵巢功能恢復(fù)。另外一方面能促進LH合成，誘導(dǎo)排卵[11-12]。報道[13-14]稱，天癸方中的補腎中藥能減少胰島素抵抗，減輕高脂毒性和炎癥反應(yīng)，減少葡萄糖酶轉(zhuǎn)化，糾正胰島素抵抗，降低高胰島素血癥。

[1]張寧.中藥對多囊卵巢綜合征痰濕證性激素及性激素結(jié)合球蛋白表達的干預(yù)性研究[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2011,33(5):43-45.

[2]郭乃君,許小鳳.多囊卵巢綜合征胰島素抵抗的中西醫(yī)治療[J].吉林中醫(yī)藥, 2013, 33(11):1100-1103.

[3]陳欣,宋巖.針刺配合中藥塌漬法對多囊卵巢綜合征血清炎癥因子的影響[J].吉林中醫(yī)藥, 2016, 36(6):616-618.

[4]高霖雨,李淑萍,趙鳴芳,等.從肝郁論治多囊卵巢綜合征[J].吉林中醫(yī)藥, 2013, 33(2):115-117.

[5]王艷華.中醫(yī)序貫療法對多囊卵巢綜合征患者性激素、胰島素抵抗水平及血脂的影響[J].河北中醫(yī), 2016,38(6):849-852,909.

[6]梁靜,孫維峰,周建龍,等.補腎調(diào)周法對多囊卵巢大鼠性激素和胰島素的影響[J].中國中醫(yī)急癥, 2013, 22(5):698.

[7]李曉紅,閆宏,溫泰芳,等.多囊卵巢綜合征大鼠AMH 表達與胰島素抵抗的相關(guān)性研究[J].中國免疫學(xué)雜志, 2015,6(6):835-837,839.

[8]張婷.清熱養(yǎng)陰方對多囊卵巢綜合征（PCOS）模型大鼠卵巢激素及局部胰島素抵抗的影響[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2015, 2(5):361-365.

[9]于超波,馬莉,吳莉,等.加用天癸膠囊治療多囊卵巢綜合征42例臨床觀察[J].中國藥業(yè), 2015, 4(12):50-51.

[10]姚逸.補腎活血調(diào)沖湯對多囊卵巢綜合征促排卵的臨床研究[D].南京:南京中醫(yī)藥大學(xué), 2012.

[11]郭素璇,王文君,歸綏琪,等.中藥天癸膠囊治療多囊卵巢綜合征的隨機對照療效觀察[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報,2011, 9(9):965-972.

[12]張曉金,陳允欽,歸綏琪,等.天癸膠囊治療多囊卵巢綜合征110例臨床觀察[J].中醫(yī)雜志, 2014, 55(21):1835.

[13]張微,喬世聰,侯麗輝,等.侯麗輝治療痰濕型多囊卵巢綜合征經(jīng)驗總結(jié)[J].吉林中醫(yī)藥, 2013, 33(3):228-229.

[14]金凱黎,許小鳳.中醫(yī)藥誘發(fā)排卵治療不孕癥研究近況[J].吉林中醫(yī)藥, 2014, 34(9):965-968.