乳腺浸潤性導管癌超聲特征與分子生物標志物的相關性

葉晶晶+余茂武+黃曉民

[摘要] 目的 探討乳腺浸潤性導管癌的超聲特征和分子生物標志物表達之間的關系。 方法 回顧性方便收集2014年2月—2017年2月該院收治的134例經手術病理確診為乳腺浸潤性導管癌患者的術前超聲影像學資料，包括腫塊最大直徑、邊緣毛刺、縱橫比、微鈣化、血流分級、腋窩淋巴結轉移，并采用免疫組化方法檢測ER、PR、HER-2、Ki-67及E-cad的表達情況，研究分析兩者的相關性。結果 ER、PR、HER-2、Ki-67和E-cad的表達陽性率分別為71.2%、59.0%、66.9%、69.1%和83.4%。腫塊最大直徑>2 cm組Ki-67表達陽性率明顯高于腫塊最大直徑≤2 cm組（P<0.05）；邊緣毛刺征者ER、PR表達陽性率明顯高于無邊緣毛刺征者（P<0.05）；有微鈣化者HER-2表達陽性率明顯高于無微鈣化者（P<0.05）；無淋巴結轉移者E-Cad表達陽性率高于有淋巴結轉移者 （P<0.05）。 結論 乳腺IDC的部分惡性超聲表現與病理生物學分子表達之間有一定的相關性，可嘗試從超聲角度評估乳腺癌分子表達情況，對乳腺癌的個體化診治及預后評估具有重要參考價值。

[關鍵詞] 乳腺浸潤性導管癌；超聲表現；雌激素受體；孕激素受體

[中圖分類號] R737 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）10（b）-0020-04

[Abstract] Objective This paper tries to explore the correlation of ultrasonographic features and biomarkers in invasive breast ductal carcinoma. Methods Preoperative ultrasound imaging data of 134 cases of surgical pathology confirmed breast invasive ductal carcinoma patients treated in this hospital from February 2014 to February 2017 were retrospectively collected， including the maximum diameter of the tumor， edge burr， aspect ratio， microcalcification， blood flow grade， axillary lymph node metastasis. The correlation between ER， PR， HER-2， Ki-67 and E-cad was detected by immunohistochemistry. Results The positive rate of ER， PR， HER-2， Ki67 and E-cad were 71.2%， 59.0%， 66.9%， 69.1%， 83.4% respectively. The positive rate of Ki-67 in tumor size>2 cm was statistically significantly higher than that of tumor size≤2 cm group （P<0.05）. The positive rates of ER， PR in spicule sign group were statistically significantly higher than that group without spicule sign （P<0.05）. The positive rate of HER-2 in microcalcification group was statistically significantly higher than that group without microcalcification （P<0.05）. The positive rate of E-Cad in metastasis to lymph node group was statistically significantly higher than that group without metastasis to lymph node （P<0.05）. Conclusion There is a certain correlation between the partial malignant ultrasonography of breast and the expression of pathologic biology. It is possible to try to evaluate the expression of breast cancer from the perspective of ultrasound， which is of great reference value for individual diagnosis and treatment of breast cancer.

[Key words] Breast invasive ductal carcinoma； Ultrasonographic features； Estrogen receptor； Progesterone receptor

浸潤性導管癌（ invasive breast cancers，IDC）是指導管壁基底膜被導管內癌細胞突破向間質浸潤，是乳腺癌中最常見的一種類型。國外學者發現，乳腺癌的生物學行為和病理組織學改變受雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人類表皮生長因子受體2（HER-2）、細胞核增值抗原（Ki-67）及上皮鈣黏蛋白（E-cad）等表達水平的影響，導致超聲影像學上具有特定表現，總結分析乳腺癌影像學特征能夠部分反映上述標志物的表達水平[1]。該研究方便選取于2014年2月—2017年2月收治的134例患者，將IDC的超聲聲像圖特征與免疫組化指標相結合進行研究分析，探討兩者的內在聯系，希望為在非介入基礎上預測上述指標表達水平，希望能為乳腺癌的診斷、個性化治療、預后評估提供更好的參考，現報道如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性方便收集福建醫科大學附屬寧德市醫院收治的經手術病理確診為IDC患者134例，具備完整的術前超聲及術后病理資料，均為女性，年齡26～77歲，平均46歲。排除非腫塊型、乳頭Paget′s病、合并其他類型乳腺惡性腫瘤及有遠處轉移者。排除術前接受放療、化療或穿刺活檢者。

1.2 儀器與方法

采用PHILIPSIU22和GE LOGIQ E9彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率5～12 MHz，取仰臥位，充分暴露雙側乳腺及腋窩，根據美國放射學會BI-RADS乳腺超聲評估標準記錄腫塊位置、大小、形態、邊界、回聲、縱橫比、鈣化情況、Adler半定量法血供分級、腋窩淋巴結等。

1.3 免疫組化檢測

所有標本經10%甲醛固定后石蠟包埋，連續切片，行HE和免疫組化染色，對ER、PR、HER-2、Ki-67、E-cad表達水平進行檢測，ER、PR及Ki-67陽性染色定位于細胞核，HER-2及E-cad陽性染色定位于細胞膜，細胞核或細胞膜染為淡黃色至棕褐色為陽性細胞。ER、PR：陽性細胞<10%判為陰性（-）；10%≤陽性細胞≤25%判為弱陽性（+）；26%≤陽性細胞≤50%判為陽性（++）；陽性細胞>50%判為強陽性（+++）。HER-2：（-）和（+）為結果陰性，HER-2（+++）為結果陽性，（++）表示不確定，須再行熒光原位雜交法檢測有擴增為結果陽性。Ki-67：>20%陽性為高表達。

1.4 統計方法

采用SPSS 17.0統計學軟件進行檢驗，組間率的比較采用χ2檢驗，用[n（%）]表示，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

134例IDC患者雙側發病3例，多灶性5例，共139個腫塊。ER、PR、HER-2、Ki-67和E-cad的表達陽性率分別為71.2%、59.0%、66.9%、69.1%和83.4%。腫塊最大直徑>2 cm組Ki-67表達陽性率明顯高于腫塊最大直徑≤2 cm組；邊緣毛刺征者ER、PR表達陽性率明顯高于無邊緣毛刺征者；血流分級2～3級者HER-2、Ki-67表達陽性率高于血流分級0～1級者；微鈣化者HER-2表達陽性率明顯高于無微鈣化者；無淋巴結轉移者E-Cad表達陽性率高于有淋巴結轉移者，以上均差異有統計學意義（P<0.05）。ER、PR、HER-2、Ki-67及E-Cad的陽性表達率在縱橫比>1與<1兩組間差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

3 討論

乳腺癌的發生及發展是一個復雜的過程，腫瘤的生物學行為受各種原癌基因和抑癌基因影響，進而發生病理學改變，從而具有特定的超聲影像學特征[2]。分子生物標志物的表達與乳腺癌的TNM分期、組織學分級及術后生存率關系密切。

在該研究中，腫塊有邊緣毛刺者占81.3%，ER和PR的表達陽性率分別為71.2%、59.0%，結果顯示邊緣毛刺征與ER、PR表達呈正相關（P>0.05）。ER、PR存在于正常乳腺上皮細胞中，雌、孕激素通過作用于它們來調控乳腺的生長發育和細胞的增殖。受體的水平與激素反應程度正相關。ElebiF等[3]認為ER和PR表達陽性的IDC患者，乳腺細胞功能依舊存在，對內分泌治療敏感，預后較陰性者好，這兩個指標陰性與乳腺細胞合成激素受體能力降低、癌細胞生長迅速有關，預示存在進展或復發風險“邊緣毛刺征”的形成是因腫瘤邊緣癌細胞向周圍結締組織擴散所致，可由內向外分依次為癌床帶、炎性細胞浸潤帶和結締組織增生帶，構成一個根粗尖細的齒狀致密影。李朝喜等[4]認為有邊緣毛刺征的乳腺IDC主要出現在腫瘤侵襲性更低的組織學級別，預后較好。結締組織增生帶可限制腫瘤細胞的進一步擴散，起到早期保護的作用，這可以解釋該研究中ER、PR表達陽性的乳腺癌為何較陰性者更易向周圍浸潤。

在該研究中，腫塊伴微鈣化者占51.8%，HER-2的表達陽性率為66.9%，結果顯示腫塊伴微鈣化者其HER-2過表達率明顯高于無微鈣化者（P<0.05）。HER-2是一種具有酪氨酸激酶活性的原癌基因，有研究證實，20%～30%的原發性浸潤性乳腺癌有HER-2基因的擴增，是腫瘤復發和生存期長短的獨立預后因子，是乳腺癌靶向治療藥物的作用位點。HER-2過表達促進癌細胞增殖， 抑制凋亡，增加侵襲力，誘導腫瘤血管新生，預示著腫瘤惡性程度高， 復發率高。癌細胞代謝旺盛，容易在腺泡和導管內形成鈣鹽沉積，壞死的細胞碎片也可形成鈣化。Vibert JF等[5]發現幾乎50%～55%的乳腺癌伴有微小鈣化灶。姚潔潔等[6]認為，癌灶中微鈣化的形成與HER-2過表達關系密切，病灶腫瘤基因快速增殖，細胞壞死使含鐵血黃素堆積導致鈣鹽沉積。

在該研究中，腫塊大小≥2 cm者占54.0%，血流分級2～3級者占58.3%，Ki-67的表達陽性率為69.1%，結果顯示腫塊大小及Adler血供分級與Ki-67陽性表達率呈正相關（P<0.05）。Ki-67是一種增殖細胞標記，應用較為廣泛。Wayne S和Okumura Y等[7-8]在肝癌、白血病和宮頸癌等病種的相關研究證實，在惡性腫瘤細胞中Ki-67的表達水平越高，治療效果及疾病預后就越不樂觀。乳腺癌可分泌腫瘤血管內皮生成因子，可促使腫瘤內部形成豐富的微血管網絡[9]。外國學者指出乳腺癌血管排列紊亂，壁薄，形成盲袋狀末端及動-靜脈畸形[10]。鄒志英等[11]對腫塊最大直徑小于2 cm的IDC分類研究，結果顯示，腫塊最大直徑大于1 cm 組Ki-67陽性表達率明顯高于小于1 cm組，這與該組研究結果類似。由此推測Ki-67陽性表達率越高，腫瘤細胞增殖越快，血供越豐富。

在該研究中，腫塊伴腋窩淋巴結轉移者占36.0%，E-cad的表達陽性率為83.4%，結果顯示E-cad表達在有淋巴結轉移的乳腺癌患者中明顯低于無淋巴結轉移的乳腺癌患者（P<0.05）。E-cadherin是一個重要的腫瘤轉錄抑制基因，Blick T等[11]認為當腫瘤惡性程度增加，失去上皮性的標記E-cadherin，可導致細胞無限增殖且細胞間粘附力下降，易脫離原發灶而發生轉移。莫倩珍等[12]報道在中國乳腺癌人群中發現E-cadherin蛋白的低表達與淋巴結轉移狀態明顯相關，這與該研究結果一致。endprint

綜上所述，目前尚不能在乳腺癌術前、非手術治療過程中測定分子生物標志物的表達水平。乳腺IDC超聲典型征象在一定程度上反映其表達水平，可作為無創性手段，可在乳腺IDC診治及評估預后等方面提供可靠數據。

[參考文獻]

[1] Merlin JL，Harlé A，Lion M，et al.Expression and activation ofP38 MAP kinase in invasive ductal breast cancers： correlationwith expression of the estrogen receptor，HER2 and downstreamsignaling phosphorylated proteins[J].Oncol Rep，2013，30（4）：1943-1948.

[2] 鄒志英，王文韜，陳琮瑛，等.小腫塊型浸潤性導管癌超聲特征與Ki-67、ER、PR及Her-2之間相關性研究[J].中國婦幼保健，2015 ，30（35）：6341-6344.

[3] Elebi F， Pilanc KN，Ordu ，et al.The role of ultrasonographic findings to predictmolecular subtype， histologic grade，and hormone receptorstatus of breast cancer[J].Diagn Interv Radiol. 2015（21）：448-53.

[4] 李朝喜，劉楊，王立坤，等.乳腺浸潤性導管癌的超聲征象與雌、孕激素受體及CerbB-2表達的相關性分析[J].中國婦幼保健，2015 ，30（17）：2820-2822.

[5] Vibert JF，Valleron AJ.Automatic detection of microcalcifications in mammography using aneuromimetic system based on retina.Stud Health Technol Inform，2003（95）：589-594.

[6] 姚潔潔，張靜雯，朱櫻，等.乳腺導管內癌微浸潤癌分子生物標志物的表達及其與超聲表現的相關性[J].診斷學理論與實踐，2014，13（6） ：588-592.

[7] Wayne S，Robinson RA.Upper aerodigestive tract squamous dysplasia： correlation with p16，p53，pRb，and Ki-67 expression[J].Arch Pathol Lab Med，2014，130（2） ： 1309-1311.

[8] Okumura Y，Nishimura R，Nakatsukasa K，et al.Change in estrogen receptor，HER2，and Ki-67 status between primary breastcancer and ipsilateral breast cancer tumor recurrence[J].Euro JSurg Oncol，2015，41（4）：548-552.

[9] 王輔林，韋立新，陳樂珍，等.血管內皮生成因子、微血管密度與乳腺癌淋巴結轉移與預后的關系[J].中華病理學雜志，2000，29（3）：172.

[10] Cosgrove DO，Kedar RP，Bamber JC，et al.Breast disease：color Doppler US indifferential diagnosis.Radiology，1993，189（1）：99-104.

[11] Blick T，Widodo E，Hugo H，et al.Epithelialmesenchymaltransition traits in human breast cancer cell lines[J]. Metastasis，2008（25）：629-642.

[12] 莫倩珍，沈家欣，陳敏娜，等.E-鈣黏蛋白表達與乳腺癌臨床病理學指標相關性的Meta分析[J].癌變畸變突變，2016，28（4）：284-291.

（收稿日期：2017-07-14）endprint