馬比木不同部位喜樹堿含量測試分析

高漸飛 張凡 楊艷 張明

摘要：分析了馬比木不同部位喜樹堿含量及其運移過程，采用高效液相色譜法對其進行了測定。結果表明：色譜柱Syncyronis C18（4.6 mm×250 mm，5μm）;流動相：甲醇一水（60：40），等度洗脫;監測波長：254nm;流速：0.8 m L/min;柱溫：30℃。測定結果表明：馬比木喜樹堿含量為葉一嫩枝皮<嫩枝木質部<主枝皮<主枝木質部<主干皮<主干木質部<根木質部<根樹皮。不同部分喜樹堿含量差異較大，根部到地上部分至植株頂端喜樹堿含量逐漸降低，不同部位樹皮喜樹堿含量差異比木質部大。

關鍵詞：馬比木;喜樹堿;含量;差異

中圖分類號：S759. 3+5

文獻標識碼：A

文章編號：1674-9944（2018）01-0001-03

1 引言

馬比木（Nothapodyres pmosporoides （Oliv.） sieum），別名公黃珠子、追風傘，為茶茱萸科海桐假柴龍樹屬植物。該屬植物有5～9個種，主要分布印度、泰國、越南等熱帶地區，我國約有5個種，產于云南、四川、湖南、廣西等地[1]。已有報道馬比木和該屬的植物臭味假柴龍樹（Notha Podytes oetida]、青脆枝（又名臭馬比木）（Nothapodytes nimmoniana （Graham） Mablerley）均含有喜樹堿[2-4]。現代藥理研究表明，喜樹堿類有很好的藥理活性，具有抗腫瘤、抗病毒、細胞毒性和抗菌等藥理作用[5]，是很有應用前景的一類化合物。目前喜樹堿的兩種水溶性衍生物拓撲替康（Topotecan）和伊利替康（Irinotecan）已成為很暢銷的抗癌藥物。喜樹堿主要是從喜樹（Camptotheca acuminata Decne）中提取[6，7]，由于世界市場對喜樹堿類抗癌藥物的需求量日益增加[8]，導致了大量的樹木被完全砍伐，對物種安全造成嚴重威脅，喜樹已被列入中國國家二級保護植物。上述3種海桐假柴龍樹屬植物含有喜樹堿的發現，較低原料成本，較高的含量，使其成為提取喜樹堿的重要原料，一定程度上緩解了對喜樹資源的依賴。但由于植物都有特定的分布范圍，該屬植物尤其馬比木對生長環境要求更為嚴格，生長緩慢，產量有限，且藥用部位為根，必須對樹木進行砍伐后采挖，極其不可持續。據報道印度的臭馬比木數量已減少了80%，中國湘西[8]、目前貴州東北部（銅仁）馬比木種植資源安全已受到嚴重威脅。

國外對味假柴龍樹的研究較為深入，國內則對青脆枝（臭馬比木）研究較多，對2種植物提取喜樹堿工藝及其在器官中的分布、植物組織培養和產喜樹堿內生菌等方面都有深入的認識[3，4，9-15]。相比較，對馬比木研究較晚，目前已開展馬比木根、不同部位（細根、主根、主莖、幼莖和葉）喜樹堿含量測定、化學成分、抑菌作用[4，16～18]等方面研究。本研究將同一馬比木植株分為樹葉、嫩枝、主枝、主枝木、根部，并將木質部和皮分開進一步深入不同部位喜樹堿含量差異，揭示喜樹堿運移特征，為拓寬開發利用方式提供支撐。

2 材料與方法

2.1 樣品來源

樣品于2015年6月4日取與貴州省萬山區，樹齡15—20年，主干部分地面30 cm以上被砍伐，已萌發枝條，枝條年齡3年左右。將植株分為葉（頂芽以下5 cm成熟葉片）、嫩枝（當年生幼嫩枝條）、主枝（取與主干直接連接部至20 cm）、主干（地面以上30 cm）、根部（地表以下部分）;進一步分為樹皮和木質部，每個樣一式2份平行樣送檢，取平均值。

2.2 樣品處理

對照樣品溶液的制備喜樹堿：實驗室制備，精密稱取對照喜樹堿，配成濃度為77.2 μg/mL的對照溶液。

2.3 供試品溶液的制備

馬比木不同部位低溫干燥后，粉碎，取相應細粉0.1g，精密秤定，置于圓底燒瓶中，精密加70%乙醇25 mL，稱重，以70℃回流提取60 min放冷，用70%乙醇補重，搖勻，濾過，取繼續液，0.45μg微孔濾膜濾過即得。

2.4 色譜條件

高效液相色譜質譜儀Agilent 1100 HPLC。色譜柱syncronis C18（4.6 mm×250 mm，5μm）;流動相：甲醇一水（60：40），等度洗脫;檢測波長：254 nm;流速：0.8mL/min;柱溫：30℃。

3 結果與分析

由表1可知，馬比木葉和嫩枝皮喜樹堿含量最低，為0. 011%，根樹皮部分含量最高，為0.378%，兩者相差37倍多。不同部位喜樹堿含量特征為，葉=嫩枝皮<嫩枝木質部<主枝皮<主枝木質部<主干皮<主干木質部<根木質部<根樹皮。

由圖1—11可知，樹皮部分喜樹堿含量最大值和最小值差距巨較大（37，5倍），木質部含量相差12倍，相比較木質部分喜樹堿含量差異較小;樹皮和木質部分均表現出越接近根部喜樹堿含量越高的特征。

相同部位，嫩枝、主枝、主干樹皮喜樹堿含量均低于木質部分;但根部皮中喜樹堿卻高于木質部。

4 結論

馬比木不同部分喜樹堿含量差異較大，根部到地上

部分至植株頂端喜樹堿含量逐漸降低，這與呂江明等[4]研究湖南湘西州馬比木結果一致;且這種量的動態變化與臭馬比木中根的喜樹堿量大于莖、莖大于葉的結果亦是一致的。本研究發現馬比木主干木質部、根木質部、根樹皮含量均超過0.24%，大于臭馬比木中相同部位喜樹堿含量，遠超過喜樹果實中喜樹堿最高量（0.190%）[19]，馬比木主干部分亦可作為提取喜樹堿的

本研究馬比木根的喜樹堿平均含量為0. 327%，大于吳開慧等[20]對貴州銅仁馬比木根部的喜樹堿含量0.18%，可能與測試時間和樹齡有關。時間上喜樹堿含量從春節至夏季逐漸降低，到秋冬以后有升高;樹齡對其含量影響還有待進一步證實。

初步推斷馬比木中喜樹堿由根部（樹皮）生產，有待進一步揭示根部（樹皮）生產喜樹堿的機制，為探索促進馬比木高效生產喜樹堿的措施提供支撐，從而為抗癌藥物生產提供更多原料、降低成本，并促進馬比木種質資源的保護。

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