葉酸口腔速溶膜劑的質量控制

周禹宏，張金芬，房志仲

（天津醫科大學藥學院，天津市臨床藥物關鍵技術重點實驗室，天津300070）

藥物速溶傳遞系統（fast dissolving drug delivery systems，FDDDS）最早開發于上世紀 70年代，作為可代替傳統片劑、膠囊劑及糖漿劑的新興劑型[1]，口腔速溶膜劑常用作兒童、老年人以及吞咽困難的患者人群的傳統劑型替代產品，具有纖薄柔韌、易于吞咽、劑量準確、快速崩解溶化等優點[2-4]，便于患者自主給藥，提高患者的順應性。近年來，人們逐漸發現了葉酸的其它新的治療作用。對于H型高血壓[5]、萎縮性胃炎[6]和骨性關節炎[7]均具有有效的治療作用；另外，對胃癌、肝癌、大腸癌等多種癌癥有明顯的輔助治療作用[8-12]。因此，葉酸被不斷應用于多種疾病的預防、治療和診斷。目前，國內市場的葉酸制劑只有片劑、膠囊劑、顆粒劑等普通劑型。葉酸口腔速溶膜劑具有藥物速溶傳遞系統的優點，它的出現極大改善了患者的用藥體驗，特別適合兒童、老人、吞咽困難和精神疾病患者等特殊人群的預防治療用藥需求，具有良好的市場前景。本課題對自制的葉酸口腔速溶膜劑進行了質量控制方面的研究，建立了檢測葉酸的質量控制方法，確保所建立方法準確、可靠、簡便、易行。

1 材料與方法

1.1 試藥 葉酸（河北冀衡集團藥業有限公司，批號：61410001）；羥丙甲纖維素 E15（HPMC E15，安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：150509）；丙二醇（青島優索化學科技有限公司，批號：I94102224）；β-環糊精（β-CD，安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號：150506）；三氯蔗糖（安徽山河藥用輔料有限公司，批號：150319）；DL-蘋果酸（常茂生物化學工程股份有限公司，批號：20150708）；甜橙香精（天津市香源商貿有限公司，批號：1000506149）；對照品：葉酸標準品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用）；供試品：葉酸口腔速溶膜劑（自制）；甲醇（天津市康科德科技有限公司，色譜純，批號：20150724）；磷酸二氫鉀(天津市光復科技發展有限公司，分析純，批號：20151121)；氫氧化鉀(天津市風船化學試劑科技有限公司，分析純，批號：20150724)；氨水（天津市風船化學試劑科技有限公司，25%，批號：20150723）；重蒸水自制。

1.2 儀器 高效液相色譜儀（Waters 2690）；柱溫箱（CBL Model 100型，天津科貝爾公司）；色譜柱（Inn oval.ODS-2，250 mm ×4.6 mm，5 μm；Phenomenex.luna，250 mm×4.6 mm，5 μm）；Empower色譜工作站；CPA225D電子分析天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）；AFA-Ⅱ型自動涂膜機（上海亞培實業有限公司）；電子數顯千分尺（量程：0~25 mm，桂林廣陸數字測控股份有限公司）；78X-3C片劑多用崩解測定儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）。

1.3 方法[13-14]

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Innoval ODS-2 C18色譜柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流動相：甲醇-0.054 mol/L磷酸二氫鉀緩沖鹽溶液（調節 pH=6.3±0.1）（8:92）；檢測波長：λ=254 nm；流速1.0 mL/min；進樣量為20 μL；柱溫為（30±1）℃。

1.3.2 供試品的制備 采用溶劑澆鑄法制備口腔速溶膜劑。精密稱取處方量的成膜材料HPMC E15，加入適量純凈水，攪拌均勻使其充分溶脹，形成均勻而質地黏稠的膠液。向膠液中加入處方量丙二醇，攪拌均勻后，依次按照處方稱取主藥、填充劑以及其他矯味劑，先后加入膠液中，再持續攪拌15 min，靜置脫氣。待膠液呈無氣泡的均勻混懸黏稠狀態時，涂膜，于50℃下干燥30min。脫膜，切割成所需大小。1.3.3 溶液的制備 （1）流動相的制備：稱取6.8 g磷酸二氫鉀與70 mL 0.1 mol/L氫氧化鉀溶液，加水稀釋至850 mL，用0.5%氨溶液調節pH至6.3±0.1。加入80 mL甲醇，用水稀釋至1 000 mL，即得。（2）對照品儲備液的制備：精密稱取葉酸對照品55.0 mg置于25 mL量瓶中，加入15 mL 0.5%氨溶液，使之溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。（3）對照品溶液的制備：精密稱取葉酸對照品11.0 mg置于50 mL量瓶中，加入30 mL 0.5%氨溶液溶解，加水稀釋至刻度并搖勻，即得對照品溶液。（4）供試品溶液的制備：取葉酸口腔速溶膜5片量（約含葉酸2 mg），稱重后置于10 mL量瓶中，加入6 mL 0.5%氨溶液使之溶解，再加水稀釋至刻度，充分振蕩，搖勻。用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。（5）陰性對照溶液的制備：按照自制處方制得不含葉酸的空白膜劑，依上述供試品溶液的制備方法配制陰性對照溶液。（6）空白溶液的制備：取30 mL 0.5%氨溶液于50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.3.4 厚度考察 膜劑厚度的均勻性關系到其劑量準確性和溶化速度的大小。通過電子數顯千分尺來測量膜劑的厚度。任意選取3片自制葉酸口腔速溶膜，在膜上任意選取3點測定厚度，求其平均值，并計算標準差[15]。

1.3.5 溶化時限的考察 本研究借鑒《中國藥典》2015版克霉唑口腔藥膜溶化時限的測定方法，將膜劑剪成1 cm2大小，取6片分別用兩層篩孔內徑為2.0 mm的不銹鋼絲夾住，置于上述吊籃的玻璃管中依崩解時限檢查法片劑項下的方法（通則0921）檢查。在盛有 (37±1)℃純凈水的1 000 mL燒杯中，以30~32次/min的速度上下移動（55±2）mm，當膜劑出現崩裂時，記錄所用時間，計算其平均值和RSD。

1.3.6 系統適用性試驗 分別取空白溶液和對照品溶液各20 μL進樣，按照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定，記錄色譜圖。

1.3.7 專屬性試驗 分別取“1.3.3項下”空白溶液、陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液進樣20μL，依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定，并記錄色譜圖。

1.3.8 定量限考察 精密移取“1.3.3項下”對照品溶液1 mL于100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，充分搖勻，得到的待測溶液，記為濃度1。再分別取上述溶液4 mL、5 mL于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，充分搖勻，得到的待測溶液，依次記為濃度2、濃度3。分別進樣，測定其信噪比。將所確定的定量限濃度溶液連續進樣6次，記錄其信噪比，并求其平均值和RSD。

1.3.9 線性關系考察 用移液管分別精密移取0.7、0.9、1.0、1.1 和 1.3 mL 對照品儲備液，置 10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分別為70%、90%、100%、110%、130%的樣品溶液。取對照品儲備液1 mL至50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為20%的樣品溶液。另精密移取“1.3.3項下”對照品溶液1 mL于200 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，充分搖勻，得到濃度為0.5%的樣品溶液。將上述樣品溶液分別進樣20 μL，按照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定并記錄峰面積。

1.3.10 精密度試驗 （1）日內精密度：取“1.3.3項下”所制供試品溶液，同一天內連續進樣6次，依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定，并計算峰面積的RSD。（2）中間精密度：取“1.3.3項下”所制供試品溶液，在同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設備于同一天內連續進樣6次，依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定，并計算峰面積的RSD。

1.3.11 穩定性試驗 按照自制處方制得葉酸口腔速溶膜膠液，靜置備用。分別取室溫放置0、1、2、4、8、12和24 h膠液約300 mg，精密稱定，置于50 mL棕色量瓶中，加入30 mL 0.5%氨試液振蕩溶解，用水稀釋至刻度，混勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液，同法平行配制兩份供試品溶液。依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定，計算其含量，統計其平均值與RSD。另外，分別取室溫放置 0、1、2、4、8、12 和 24 h 的對照品溶液、空白溶液和供試品溶液進樣，依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定，計算其含量，統計其平均值與RSD。

1.3.12 耐用性試驗 根據“1.3.1項下”的色譜條件，依次變動色譜柱、柱溫、檢測波長、流動相流速、流動相比例和流動相pH等條件測定葉酸含量，取“1.3.3項下”的對照品溶液和供試品溶液分別進樣2次，使用外標一點法計算葉酸的含量，并計算RSD。1.3.13 回收率試驗 分別精密移取0.8、1.0和

1.2 mL對照品儲備液于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液過濾，所得續濾液即為標準濃度80%、100%、120%的供試品溶液。將上述每個濃度平行配制3個樣品。依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定并計算回收率。

1.3.14 含量測定 根據“1.3.3項下”的供試品溶液的制備方法對3批樣品進行處理，得到樣品溶液，進樣，依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定，使用外標一點法計算葉酸的含量。

1.3.15 含量均勻度的測定 精密移取對照品溶液2 mL于10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為含量均勻度測定試驗的對照品溶液。另取10片自制葉酸膜樣品分別置于10個10 mL量瓶中，加入6 mL 0.5%氨溶液使溶解。加水稀釋至刻度，搖勻，離心。取上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾，所得濾液即為待測樣品溶液。進樣，依照“1.3.1項下”的色譜條件進行測定。計算每一片藥膜的含量，統計其平均值與標準差，按照《中國藥典》2015版（二部）附錄ⅩE規定進行測定。

2 結果

2.1 厚度考察結果 見表1。所得葉酸口腔速溶膜厚度均勻。

表1 葉酸口腔速溶膜的厚度考察Tab 1 The thickness of rapidly dissolving oral film of folic acid

2.2 溶化時限考察結果 見表2。平均溶化時限為18.17 s，且均不超過 30 s。

表2 葉酸口腔溶解膜的溶化時限Tab 2 The disintegration time of rapidly dissolving oral film of folic acid

2.3 系統適用性試驗色譜圖 見圖1。于“1.3.1項下”的色譜條件下測得的色譜圖，主峰分離度大于1.5，理論塔板數大于2 000且拖尾因子為0.91，符合要求，該色譜系統有效適用。

圖1 系統適用性試驗Fig 1 System adaptability test

2.4 專屬性試驗結果 見圖2。在“1.3.1項下”的色譜條件下，主藥與輔料之間可明顯分離，互不干擾。該色譜方法有良好的專屬性。

2.5 定量限的考察結果 樣品濃度為1.0 μg/mL時，平行測定6次，信噪比為11.0，RSD為1.08%。確定該濃度為定量限濃度。

圖2 專屬性試驗Fig 2 Specific test

2．6 線性關系考察結果 以葉酸的峰面積（A）對濃度（C）做線性回歸的標準曲線，得到線性方程為A=14551C-15665，R=0．999 8，表明葉酸在 40．0～260．0 μg/L的濃度范圍內線性關系良好。

2．7 精密度試驗結果 葉酸的日內精密度試驗的RSD 為 0．23%（n=6），日間精密度的 RSD 為 0．26%（n=6），表明精密度良好。

2．8 穩定性試驗結果 自制處方制得的葉酸口腔速溶膜膠液的RSD為0．82%，葉酸對照品溶液的RSD 為 1．44%，供試品溶液的 RSD 為 0．86%，表明葉酸口腔速溶膜膠液、葉酸對照品和供試品溶液室溫放置24 h穩定。

2．9 耐用性試驗結果 依次變動色譜柱、柱溫[（25±2）℃、(30±2)℃和(35±2)℃]、檢測波長（252 nm、254nm、256nm）、流動相流速（0．9mL/min、1．0mL/min、1．1 mL/min）、流動相比例（有機相-水相=6∶94、8∶92、10∶90）和流動相 pH（6．1±0．1、6．3±0．1、6．5±0．1），其它條件不變測定葉酸含量，其RSD為0．70%。結果表明，在測定條件有小的變動時，含量測定結果基本不受影響，該測定方法具有良好的耐用性。

2．10 回收率試驗結果 葉酸的平均加樣回收率為99．02%，RSD 為 0．41%，符合要求，詳細測定結果見表3。

表3 葉酸的回收率試驗Tab 3 The recovery tests of folic acid

2．11 含量測定結果 3批樣品中葉酸的含量測定結果見表4。

表4 葉酸的含量測定結果Tab 4 Content determination of folic acid

2．12 含量均勻度的測定結果 根據測得含量計算A+2．2S=1．42＜15．0，表明自制葉酸口腔速溶膜中，葉酸的含量均勻度良好。

3 討論

3．1 供試品的制備方法 本研究采用溶劑澆鑄法制備葉酸口腔速溶膜劑，篩選和調整了幾種輔料的種類與配比，并從成膜性、脫膜性、溶化時限、耐折度等幾個方面考察其特性。所得膜劑外形美觀，柔韌性良好，實現了30 s內迅速溶化。相比于傳統的葉酸片劑，該制劑具有速溶起效快、生物利用度高、患者順應性好等優點。但該制劑尚存在載藥量較小、對包裝要求較高等缺點，這就需要與其他學科共同發展，以期克服上述困難，使其應用范圍更加廣泛。

3．2 溶化時限的測定方法 目前，口腔速溶膜劑的溶化時限測量方法尚未給出官方指導。因此，本研究借鑒 CDER（CenterforDrugEvaluationandResearch）[16]給出的口腔崩解片的指導說明，即崩解時間不超過30 s，來規范開發階段的定性指標。

3.3 研究現狀 本制劑具有口腔速溶膜劑的優良特性，制備過程簡單易行，工藝較為成熟，易于實現產業化，或可為科研工作者提供有益的借鑒。但本研究尚未完成對該制劑的黏性測試、表面pH測試和部分機械性能考察，仍需要進一步補充完善。

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