76例丙型肝炎病毒基因分型結(jié)果分析

徐慶波 徐建華 楊麗娟

丙型肝炎病毒（HCV）是引起丙型肝炎的病原體。HCV感染是一個(gè)世界性的健康問(wèn)題，其發(fā)病率逐年增高，且致病性強(qiáng)，病情隱匿，若不進(jìn)行合理治療極易轉(zhuǎn)為慢性，甚至發(fā)展成肝硬化和肝細(xì)胞癌。這些病變的形成與其病原HCV的某些重要生物學(xué)特性相關(guān)[1-3]。HCV是RNA病毒，其基因組為單股正鏈RNA，其基因組分為5'非編碼區(qū)（5'untranslated region，5'UTR）、編碼區(qū)以及3'非編碼區(qū)（3'UTR），其中5'UTR區(qū)、編碼區(qū)中的核心區(qū)最保守，E1區(qū)、E2區(qū)最易變異，HCV高度變異性導(dǎo)致HCV存在不同的基因型和基因亞型[4-5]。HCV基因型可能與初始感染劑量、病毒復(fù)制效率、感染期限、宿主免疫反應(yīng)、感染物的異質(zhì)性有關(guān)[6-7]。

本研究收集了一汽總醫(yī)院自2010年8月—2017年6月共76例抗-HCV和HCV-RNA均為陽(yáng)性的患者的實(shí)驗(yàn)室HCV基因分型結(jié)果以及患者的臨床資料進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

標(biāo)本來(lái)源于一汽總醫(yī)院2010年8月—2017年6月76例住院患者，其中男47例，女29例，年齡10～78歲；患者抗-HCV和HCV-RNA均為陽(yáng)性，并收集患者的臨床資料。

1.2 方法

1.2.1 試劑 丙型肝炎病毒（HCV）基因分型檢測(cè)試劑盒由上海之江生物科技股份有限公司提供。

1.2.2 儀器 核酸擴(kuò)增儀采用美國(guó)Applied Biosystems 公司的ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

1.2.3 檢測(cè)方法 采用丙型肝炎病毒分型特異性引物及熒光探針，應(yīng)用一步法聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PT-PCR）結(jié)合Taqman技術(shù)對(duì)丙型肝炎病毒（HCV）進(jìn)行Ⅰ型和非Ⅰ型的熒光PCR分型檢測(cè)；循環(huán)條件：45℃×10 min；95℃×15 min；再按 95℃ ×15 s→58℃×60 s，循環(huán)40次，單點(diǎn)熒光檢測(cè)在58℃，反應(yīng)體系為25 μl反應(yīng)體系，熒光通道檢測(cè)選擇：選用FAM通道。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Microsoft Excel表格，計(jì)數(shù)資料利用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05，為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV RNA基因分型情況

檢測(cè)76例樣本，共檢出Ⅰ型基因30例，構(gòu)成比39.5%；非Ⅰ型基因46例，構(gòu)成比60.5%。

2.2 不同性別各基因型分布比較

其中Ⅰ型例數(shù)男性21例，非Ⅰ型例數(shù)男性26例，Ⅰ型男性占有率為44.7%。其中Ⅰ型例數(shù)女性9例，非Ⅰ型例數(shù)女性20例，Ⅰ型女性占有率為31.0%。χ2=1.35，P=0.246。

2.3 HCV感染病例與輸血情況

在76例HCV感染者中，男性有輸血史者25人，無(wú)輸血史者22人，男性中有輸血史者占感染者比例的53.2%；女性有輸血史者15人，無(wú)輸血史者14人，女性中有輸血史者占感染者比例的51.7%。χ2=0.02，P=0.887。

3 討論

許多研究表明，HCV基因分型對(duì)丙肝臨床表現(xiàn)及肝病嚴(yán)重程度有影響，I型基因比非I型基因致病性強(qiáng)，尤其是Ib型基因致病性更強(qiáng)，導(dǎo)致I型患者的肝功能損害較非I型嚴(yán)重，I型患者HCV RNA含量、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶均高于非I型患者[8]。不同基因型對(duì)治療的反應(yīng)存在差異。丙型肝炎防治指南中已明確指出丙型肝炎治療前需要基因分型。本研究對(duì)76例樣本進(jìn)行準(zhǔn)確的基因分型，為臨床醫(yī)生實(shí)行針對(duì)性的個(gè)體化用藥提供參考。

3.1 通過(guò)結(jié)果2.1可以看出，76例HCV染者HCV基因型以非Ⅰ型為主（60.5%），其次為Ⅰ型（39.5%）。這與文獻(xiàn)中關(guān)于HCV感染中，歐美國(guó)家多數(shù)為Ⅰ型感染，而亞洲國(guó)家以非Ⅰ型為主的結(jié)論是相吻合的[9]。也與我國(guó)HCV基因型以Ⅱ型為主，多種基因并存，混合型比例亦較高的結(jié)果一致[10]。

3.2 通過(guò)結(jié)果2.2可以看出男女各基因型分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與黃雪瓊等[11]的報(bào)道是相一致的。

3.3 通過(guò)結(jié)果2.3可以看出，在76例HCV感染者中，40例患者既往有輸血史，占感染人數(shù)的52.6%，說(shuō)明HCV感染與輸血有極大關(guān)系。HCV是引起輸血后慢性肝炎及肝硬化的主要原因之一，50%～70%肝癌患者的抗-HCV呈陽(yáng)性，我國(guó)肝癌患者肝組織中約10%可檢測(cè)到有HCV RNA。丙型肝炎和乙型肝炎不同，HCV只感染黑猩猩，疫苗研制模型受到限制，目前仍然沒(méi)有預(yù)防丙肝的疫苗，因此，我國(guó)預(yù)防丙型肝炎的重點(diǎn)應(yīng)放在對(duì)獻(xiàn)血員的管理上。嚴(yán)格篩選獻(xiàn)血員：嚴(yán)格執(zhí)行《中華人民共和國(guó)獻(xiàn)血法》，執(zhí)行無(wú)償獻(xiàn)血。通過(guò)檢測(cè)血清抗-HCV、ALT和HCV RNA，嚴(yán)格篩選獻(xiàn)血員；加強(qiáng)消毒隔離制度，防止醫(yī)源性傳播。這些與謝風(fēng)[12]等人報(bào)道的輸血是HCV感染的主要途徑相一致。

通過(guò)結(jié)果2.3還可以看出男女兩組丙肝患者有輸血史的概率分別為53.2%和51.7%，兩者的差別可能是抽樣誤差所致，亦可能是兩組輸血概率確有所不同。在結(jié)果2.3中通過(guò)χ2檢驗(yàn)計(jì)算出來(lái)χ2=0.02，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以認(rèn)為有輸血史者感染HCV的概率無(wú)性別差異。