3種抗原修復(fù)方法對免疫組化染色效果的影響

鄭秋樺，李鈺湘，柯 野，張海明

（1.韶關(guān)學(xué)院英東生命科學(xué)學(xué)院，廣東韶關(guān)512005；2.廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司，廣東廣州510663）

免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究.在免疫組織化學(xué)的試驗(yàn)過程中，常采用固定石蠟包埋組織，然而組織在使用甲醛固定過程中，形成的醛鍵會(huì)封閉抗原的決定簇，影響抗體和抗原的結(jié)合，從而影響染色觀察結(jié)果；因此，對抗原的修復(fù)在免疫組織化學(xué)中就尤為重要［1］.不同的抗原修復(fù)方法對免疫組化染色結(jié)果產(chǎn)生不同的影響［2-3］.如加熱抗原修復(fù)技術(shù)既能保留福爾馬林固定石蠟包埋技術(shù)良好的組織學(xué)形態(tài)，又明顯提高抗原的檢出率，提供良好的IHC染色結(jié)果［4-5］；影響加熱抗原修復(fù)的因素主要包括修復(fù)的溫度、加熱的時(shí)間、熱源、抗原修復(fù)液的pH值等方面［1］.

本文采用控制變量法，探究在改良Tris-EDTA(PH9.0)修復(fù)試劑中，采用水煮、微波和高壓3種不同的熱修復(fù)方法對P53、P63、Ki67、CK5/6、CK7這5個(gè)抗體的免疫組化染色效果的影響.

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)組織與試劑

1.1.1 試驗(yàn)組織

由廣州安必平（LBP）醫(yī)藥科技股份有限公司提供的陽性組織材料.

1.1.2 試驗(yàn)試劑

抗體試劑均由LBP公司提供的即用型產(chǎn)品（見表1）；環(huán)保透明脫蠟劑；無水乙醇；過氧化物酶封閉液（3%過氧化氫）；二抗試劑：LBP-VBrightI二抗HRP鼠兔通用型（一步法）；DAB顯色液（加強(qiáng)型）：1 mL DAB色原/20 mL DAB緩沖液；改良Tris-EDTA(PH9.0)濃縮液（50×）；……