麥冬化學(xué)成分研究

曠湘楠 ，朱 娜 ，劉時(shí)喬

（1.河北中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050200； 2.河北省石家莊市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 石家莊 050031）

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬 Ophiopogon japonicus（L.f） Ker－ Gawl.的干燥塊根，有養(yǎng)陰生津、潤(rùn)肺清心功效[1]。麥冬又名麥門(mén)冬、沿階草、書(shū)帶草、寸冬等，分布于我國(guó)南方各地，四川、浙江和貴州是其主要產(chǎn)區(qū)[2]，不同產(chǎn)區(qū)麥冬中的活性成分略有差異[3]。近年來(lái)，學(xué)者已對(duì)麥冬的化學(xué)成分及其活性作了大量研究，發(fā)現(xiàn)甾體皂苷、高異黃酮和麥冬多糖為其主要活性成分[4－6]，且麥冬具有耐缺氧、抗心律失常、增強(qiáng)心肌收縮力、抗癌、降血糖等生理活性[7－9]，含有麥冬提取物的參麥注射液、生脈注射液等可用于治療氣陰兩虛之休克、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(簡(jiǎn)稱冠心病)、病毒性心肌炎、慢性肺源性心臟病、粒細(xì)胞減少癥。本研究中對(duì)麥冬的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，通過(guò)各種色譜、波譜等方法分離鑒定了5個(gè)化合物（1個(gè)苯丙醇苷、1個(gè)龍腦苷、1個(gè)膽甾醇苷、2個(gè)高異黃酮）。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695型分析型高效液相色譜（HPLC）儀（美國(guó)Waters有限公司），Waters 2487型雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器（波長(zhǎng)203 nm，美國(guó)Waters有限公司）；YMC ODS－A C18分析型色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm；日本 YMC有限公司）；LC－20A型制備型高效液相色譜儀，SP－20A型示差檢測(cè)器（日本 Shimadzu有限公司）；YMC ODS－A C18制備型色譜柱（250 mm ×20 mm，5 μm，250 mm ×10 mm，5 μm；日本 YMC 有限公司）。Brucker AVANCEⅢ 型超導(dǎo)高分辨核磁共振譜儀（600 MHz，德國(guó)Brucker公司）；Synapt G2 MS型高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters有限公司）。

1.2 試藥

Sp825大孔吸附樹(shù)脂（日本三菱公司）；甲醇、乙腈（美國(guó)Fisher公司）均為色譜純；羥丙基葡聚糖凝膠：Sephadex LH －20（美國(guó) Amersham Biosciences公司）；乙醇、甲醇和氯仿（天津永大化工廠）均為分析純；Milli－Q超純水（美國(guó)Millipore有限公司）。新鮮麥冬，采自四川綿陽(yáng)，經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院鄭玉光教授鑒定為 Ophiopogon japonicus（Thunb.） Ker－ Gawl，標(biāo)本保存于河北中醫(yī)學(xué)院科研中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

取麥冬干燥塊根10 kg，70%乙醇回流提取，過(guò)濾，減壓濃縮至無(wú)醇味。浸膏用水混懸，離心，水洗沉淀，得到沉淀部分和水溶液部分。將水溶液上樣至Sp825樹(shù)脂柱內(nèi)。先用蒸餾水洗脫至流出液澄清后，依次用35%，55%，85%乙醇洗脫（均為 5倍柱體積），得到 MD－35%（180 g）、MD － 55% （8 g）、MD － 85%（15 g）三部分。

取MD－35%上樣于Sp825大孔吸附樹(shù)脂，分別用水及5%，15%，25%，35%乙醇洗脫，取35%乙醇洗脫流分，用制備型高效液相色譜儀（流動(dòng)相為35%甲醇）分離，得化合物 1（343.6 mg）。取 MD－55% 上樣至Sp825樹(shù)脂，分別用35%，45%，55%乙醇洗脫，取55%乙醇洗脫流分，用制備型高效液相色譜儀（流動(dòng)相為52%甲醇）分離，得化合物 2（8.9 mg）和化合物 3（16.5 mg）。取 MD－85%上樣于 Sp825樹(shù)脂，分別用55%，65%，75%，85%乙醇洗脫，85%乙醇洗脫流分有針晶析出，用羥丙基葡聚糖凝膠Sephadex LH－20（流動(dòng)相為無(wú)水乙醇）分離，得化合物 4（105.3 mg）和化合物 5（98.2 mg）。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

2.2.1 化合物 1

結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。白色不定型粉末，易溶于甲醇、乙醇、吡啶、二甲基亞砜（DMSO）。Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，紫外燈（254 nm波長(zhǎng)）下顯暗棕色。

HR －ESI－MS：m ／z457.169 9[M －H]－，311.090 8[M －H －146]－，149.060 6[M －H －146－162]－，計(jì)算得其分子式為C21H30O11，且結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)六碳糖和1個(gè)去氧六碳糖。

1H － NMR（pyridine － d5，600 MHz）：δ，7.07（1H，d，1.8，H － 2），7.57（1H，d，8.4，H － 5），6.72（1H，dd，1.8，8.4，H － 6），5.93（1H，m，H － 8），5.27（1H，d，7.2，glc －H － 1），5.51（1H，brs，rha － H － 1）。

13C － NMR（pyridine － d5， 150 MHz）：δ， 145.1（C －1）， 149.7（C － 2）， 117.5（C － 3）， 137.1（C － 4）， 120.1（C －5）， 121.2（C － 6）， 39.9（C － 7）， 138.2（C － 8），115.6（C －9）， 106.0（glc－ C －1）， 74.9（glc－ C －2），77.6（glc－ C － 3），71.5（glc － C － 4），78.4（glc － C － 5），68.0（glc－ C －6）， 102.6（rha－C －1）， 72.3（rha－C －2）， 72.8（rha－ C － 3）， 74.1（rha－ C － 4）， 69.9（rha－C － 5），18.6（rha － C － 6）。

與文獻(xiàn)[10]對(duì)照，確定其與 4－烯丙基 －1，2－苯二酚 1－O－[α－L－吡喃鼠李糖（1→6）]－β－D－吡喃葡萄糖苷（3，4－dihydroxy－allylbenzene 4－O－α－L－rhamnopyranosyl－（1 → 6）－β－D－ glucopyranoside）的核磁數(shù)據(jù)一致，確定其為該化合物。

2.2.2 化合物 2

結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。無(wú)色針晶，易溶于甲醇、乙醇、吡啶。Molish反應(yīng)成陽(yáng)性，紫外燈（254 nm波長(zhǎng)）下不顯色。

HR －ESI－MS：m ／z 339.175 9[M ＋Na]＋，317.195 3[M ＋ H]＋，137.139 5[M ＋ H －180]＋，計(jì)算得其分子式為C16H28O6，結(jié)構(gòu)中含有1個(gè)六碳糖。

1H － NMR （DMSO － d6，600 MHz）：δ，0.85（3H，s，H － 1），0.81（3H，s，H － 9），0.79（3H，s，H － 10），4.11（1H，d，7.8，glc － H － 1）。

13C － NMR（DMSO － d6，150 MHz）：δ，13.7（C － 1），49.1（C － 2）， 26.2（C － 3）， 27.8（C － 4）， 44.3（C － 5），37.1（C － 6）， 84.3（C － 7）， 47.1（C － 8）， 18.6（C － 9），19.6（C －10）， 104.2（glc－C －1）， 73.7（glc－ C － 2），76.8（glc － C －3），70.1（glc － C － 4），76.6（glc－ C － 5），61.1（glc － C －6）。

圖1 化合物1～5結(jié)構(gòu)

與文獻(xiàn)[11]對(duì)照，確定其與龍腦7－O－β－D－葡萄糖苷（borneol 7－O－β－D－glucopyranoside）的核磁數(shù)據(jù)一致，確定其為該化合物。

2.2.3 化合物 3

結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。白色無(wú)定型粉末，易溶于甲醇、吡啶，可溶于乙醇。Lieberman－Burchard反應(yīng)顯陽(yáng)性，E試劑顯陰性，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性。

HR －ESI－MS：m ／z 765.443 7[M ＋Na]＋，計(jì)算得出其分子式為C39H66O13。Positive模式下顯示其碎片離子峰 m ／z：765.443 7[M ＋ Na]＋，743.464 4[M ＋ H]＋，725.457 6[M ＋H －18]＋，707.444 3[M ＋H －18－18]＋，545.385 8[M ＋H －18－18－162]＋，399.324 6[M ＋H －18－18－162－146]＋。質(zhì)譜可見(jiàn)有 1個(gè)六碳糖和 1個(gè)去氧六碳糖，且此苷元含有2個(gè)游離羥基。

1H － NMR （pyridine － d5，600 MHz）：δ，5.52 （1H，d，2.4，H － 6），1.03（3H，s，H － 18），1.20（3H，s，H － 19），1.15（3H，d，7.2，H － 21），0.92（3H，d，o，H －26），0.91（3H，d，o，H － 27），5.63（1H，brs，glc － H － 1），4.73（1H，d，7.8，rha － H － 1），1.64（3H，d，6.0，rha － H － 6）。

13C － NMR（pyridine － d5，150 MHz）：δ，81.4（C － 1），36.1（C － 2），68.1（C －3），43.8（C －4）， 139.2（C －5），125.1（C － 6），31.6（C － 7），33.5（C － 8），50.9（C －9），42.9（C － 10）， 24.8（C － 11）， 40.6（C － 12），42.3（C －13）， 55.4（C － 14）， 37.2（C － 15）， 82.6（C － 16）， 58.1（C － 17）， 13.9（C － 18）， 14.6（C － 19）， 36.0（C － 20），12.7（C － 21）， 73.2（C － 22）， 33.8（C － 23），36.8（C －24），28.9（C － 25），23.1（C － 26），23.1（C － 27），107.0（glc－ C －1），75.7（glc － C －2），78.8（glc － C － 3），71.8（glc－ C －4），78.2（glc － C －5），63.0（glc － C － 6），97.7（rha－C －1）， 72.9（rha－C －2）， 73.0（rha－C －3）， 73.7（rha－ C － 4），70.7（rha － C － 5），18.7（rha － C －6）。

與文獻(xiàn)[12]對(duì)照，確定其與（22S）－cholest－5－ene－1β，3β，16β，22－tetrol 1－O －α － L－rhamnopyranosyl－16－O－β－D－glucopyranoside的核磁數(shù)據(jù)一致，確定其為該化合物。

2.2.4 化合物 4

結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。黃色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、丙酮、DMSO，可溶于乙醇，微溶于甲醇。三氯化鐵反應(yīng)呈陽(yáng)性。紫外燈（254 nm波長(zhǎng)）下顯深藍(lán)色。

HR －ESI－MS： m ／z 343.122 7[M ＋H]＋，計(jì)算得其分子式為C19H18O6。

1H － NMR（pyridine － d5，600 MHz）：δ，4.34（1H，dd，4.2，10.8，H － 2 － 1），3.29（1H，dd，4.2，10.8，H －2 －2），2.99 （1H，m，H － 3），4.14（1H，dd，4.2，13.8，H －9 － 1），2.75（1H，dd，4.2，13.8，H － 9 － 2），6.89（1H，d，1.8，H － 2’），6.86（1H，d，7.8，H － 5’），6.73（1H，dd，1.8， 7.8， H －6’）， 5.97（2H， m， H － [O －CH2 －O]），2.41（3H，s，H － [6 － Me]），2.33（3H，s，H － [8 － Me]），13.03（1H，s，H － [5 － OH]）。

13C － NMR（pyridine － d5，150 MHz）：δ，69.5（C － 2），46.9（C － 3）， 198.5（C － 4）， 160.4（C － 5）， 104.7（C －6）， 164.2（C － 7）， 103.4（C － 8）， 32.7（C － 9）， 158.3（C － 10）， 101.5（C － 11）， 132.7（C － 1＇）， 109.9（C －2＇）， 148.4（C － 3＇）， 146.8（C － 4＇）， 108.7（C － 5＇），122.6（C － 6＇）， 102.3（C － [O － CH2 － O]）， 8.8（C －[6 － Me]），8.5（C － [8 － Me]）。

與文獻(xiàn)[13]對(duì)照，確定其與甲基麥冬黃烷酮A（methyophiopogonanone A）的核磁數(shù)據(jù)一致，確定其為該化合物。

2.2.5 化合物 5

結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。黃色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿、丙酮、DMSO，可溶于乙醇，微溶于甲醇。三氯化鐵反應(yīng)呈陽(yáng)性。紫外燈（254 nm波長(zhǎng)）下顯深藍(lán)色。

HR －ESI－MS： m ／z 329.141 0[M －H]－，計(jì)算得其分子式為C19H20O5。

1H －NMR（pyridine－ d5， 600 MHz）： δ， 4.33 （1H，dd，4.2，10.8，H － 2 － 1），3.32 （1H，dd，4.2，10.8，H －2 － 2），2.99 （1H，m，H － 3），4.15 （1H，dd，3.6，11.4，H －9－1），2.79 （1H，dd，3.6，11.4，H －9－2），6.96（1H，dd，3.0，9.6，H － 2’），7.23 （1H，d，3.0，H － 3’），7.23 （1H，d，7.8，H － 5’），6.96 （1H，dd，3.0，9.6，H －6’），3.68 （1H，s，H － [O － CH3]），2.42 （3H，s，H － [6 －Me]），2.33 （3H，s，H － [8 －Me]），13.06 （1H，s，H －[5 － OH]）。

13C － NMR（pyridine － d5，150 MHz）：δ，69.5（C － 2），46.9（C － 3）， 198.6（C － 4）， 160.4（C － 5）， 104.7（C －6）， 164.2（C － 7）， 103.4（C － 8）， 32.1（C － 9）， 158.4（C － 10），101.5（C － 11），130.6（C － 1＇），130.8（C －2＇）， 114.5（C － 3＇）， 158.9（C － 4＇）， 114.5（C － 5＇），130.8（C － 6＇）， 55.2（C － [O － CH3]）， 8.8（C － [6 －Me]），8.5（C － [8 － Me]）。

與文獻(xiàn)[14]對(duì)照，確定其核磁數(shù)據(jù)與甲基麥冬黃烷酮B（methyophiopogonanoneB）一致，確定其為該化合物。

3 討論

本研究中從麥冬的低、中、高極性的部位進(jìn)行分離，得到含量較大的5種非甾體皂苷類化合物。大極性或中等極性化合物，如 AB － 8，D － 101，Sp825，MCI，C18等適合用反相色譜法進(jìn)行分離，而用正相硅膠法進(jìn)行分離會(huì)造成較大的吸附損失。交叉使用上述反相色譜，如先用Sp825樹(shù)脂梯度洗脫，流分再用MCI梯度洗脫，最后用C18反相色譜制備純化，會(huì)極大地提高分離純化的效率；另外，極性較小的高異黃酮適合用葡聚糖凝膠進(jìn)行分離，葡聚糖凝膠對(duì)此類化合物具有強(qiáng)保留、吸附損失小的特點(diǎn)，如用聚酰胺色譜會(huì)造成較大的吸附損失。

麥冬為臨床常用中藥，本研究中分離得到的非甾體皂苷類化合物豐富了麥冬中化學(xué)成分的多樣性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，麥冬均以甾體皂苷單體或總皂苷提取物進(jìn)行相關(guān)活性研究。而本研究中分離得到的1個(gè)苯丙醇苷、2個(gè)高異黃酮和1個(gè)龍腦苷具有多種生物活性，對(duì)這些成分的進(jìn)一步研究有助于為已有藥效及新的臨床應(yīng)用奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。

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