三磷酸腺苷二鈉片質量標準提高研究

董 勇，謝浙裕，朱琳嬌，陳運動

（紹興市食品藥品檢驗研究院，浙江 紹興 312071）

三磷酸腺苷二鈉（adenosine disodium triphosphate，ADT）為核苷酸衍生物，分子式為 C10H14N5Na2O13P3·3H2O±H2O，為輔酶類藥[1－2]，參與體內脂肪、蛋白質、糖、核酸及核苷酸的代謝[3]。當體內吸收、分泌、肌肉收縮及進行生化合成反應等需要能量時，三磷酸腺苷即分解為二磷酸腺苷及磷酸基，同時釋放能量[4－5]。三磷酸腺苷二鈉片的質量標準收載于國家藥品西藥標準（化學藥品地標升國標第九冊），在國家食品藥品監督管理總局網站查詢可知，有三磷酸腺苷二鈉片批準文號的生產企業有65家。近年來，三磷酸腺苷二鈉片的抽檢率較高，筆者評價性抽檢浙江省內流通銷售的5家企業共47批次樣品，并對其含量及性能進行測定，分析影響含量的相關因素，現就此次抽驗情況報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（包括Chemstation工作站、在線脫氣機、柱溫箱、四元泵、VWD紫外檢測器，安捷倫科技有限公司）；萬分之一電子天平（梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司）；UV－2550型紫外分光光度計（島津儀器＜蘇州＞有限公司）；708－DS型溶出儀（安捷倫科技有限公司）。

1.2 試藥

磷酸鈉、鹽酸、無水磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氫氧化鈉、四丁基溴化銨（廣州晟輝化工科技有限公司）；甲醇（色譜純，美國Fisher公司）。

2 方法與結果

2.1 含量測定

總核苷酸：取本品20片，精密稱定，除去包衣后，研細，精密稱取適量，加0.1 mol／L磷酸鹽緩沖液至刻度，取續濾液適量，用上述磷酸鹽緩沖液制成每1 mL中含20 mg的溶液，照分光光度法（2010年版《中國藥典》附錄Ⅳ A）測定，以上述緩沖液為空白溶液，于259 nm波長處測定吸收度，按C10H14N5Na2O13P3的吸收系數為279計算。

三磷酸腺苷二鈉的重量比：照高效液相色譜法（2010年版《中國藥典》附錄ⅤD）[6]測定。流動相：0.2 mol／L 磷酸鹽緩沖液 －甲醇（95 ∶5）；柱溫：35 ℃；檢測波長：259 nm。理論板數按三磷酸腺苷二鈉峰計算應大于1 500。出峰次序依次為一磷酸腺苷（T1）、二磷酸腺苷（T2）與三磷酸腺苷（T3）。計算公式如下：

三磷 酸 腺 苷二 鈉 重 量比 （% ） ＝ T3／（0.671 T1＋0.855 T2＋ T3＋ Tx）

其中，Tx為其他峰（溶劑峰除外）峰面積之和，三磷酸腺苷二鈉含量（%）＝總核苷酸×三磷酸腺苷二鈉的重量比。

2.2 紫外鑒別[6]

取含量測定項下總核苷酸項下溶液，照分光光度法（2010年版《中國藥典》附錄Ⅳ A）測定，在259 nm波長處有最大吸收，在226 nm波長處有最小吸收；250 nm與 260 nm波長處吸收度的比值應介于 0.76～0.82，280 nm與260 nm波長處吸收度的比值應介于0.13～0.17。

2.3 釋放度檢查[6]

取本品，照釋放度測定法[2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅩD第二法（一）]，按 C10H14N5Na2O13P3的吸收系數為279計算出每片的釋放量。

2.4 貯存時間和環境對含量的影響

通過高效液相色譜法，對放置5個月的樣品進行再檢驗，比較不同時間的總核苷酸、T3和含量。并檢測不同時間、不同地點抽取的同一批次樣品，對其含量進行比較分析。

2.5 含量測定、紫外鑒別及釋放度檢查結果

47批次樣品含量測定中，不合格1批次，其他46批次含量測定結果介于96.7% ～117.6%，總核苷酸量介于102%～127%；紫外鑒別47批次樣品均符合標準規定。250 nm與260 nm波長處吸收度的比值介于0.78～0.80，280 nm 與 260 nm 波長處吸收度的比值介于0.14～0.17。釋放度檢查有 1批不符合規定，其他46批次數據介于95% ～130%，其中2批次≤90%，2批次＞130%。

圖1 紫外鑒別、總核苷酸、T3、平均釋放度、總核苷酸與含量的關系

圖 2 T1，T2，T3和其他雜質 Tx關系

2.6 紫外鑒別、平均釋放度、總核苷酸、T3比值與含量的關系

結果顯示，紫外鑒別與三磷酸腺苷二鈉降解情況無關系；總核苷酸和含量有一定相關性；而T3的比值與含量、總核苷酸也有一定關系，詳見圖1 A。平均釋放度和總核苷酸量波動幅度介于100%～130%，兩者存在一定相關性，即平均釋放度大的相應總核苷酸含量也高。但平均釋放度、總核苷酸與含量無相關性，詳見圖1 B。

表1 不同時間的含量測定結果

表2 不同時間、不同地點抽取的同一批次樣品的含量測定結果

2.7 T1，T2，T3和其他雜質 Tx的關系

由圖2可見，T3值的變化會導致T1、Tx顯著變化，T3值的變化和其他三者都有一定關聯，且和T1、Tx關系較密切，且呈負相關。

2.8 貯存時間和環境對含量的影響

對放置5個月的樣品進行再檢驗，發現總核苷酸、T3和含量均下降，T1，T2，Tx含量均增加，詳見表 1。而對不同時間、不同地點抽取的同一批次樣品進行檢測，結果發現含量完全不同，詳見表2。

3 討論

三磷酸腺苷二鈉在貯存過程中，可以水解成二磷酸腺苷（ADP）和一磷酸腺苷（AMP）[7－8]，在質量標準中制訂了鑒別和含量測定兩項來控制三磷酸腺苷二鈉的含量，以保證該藥品的生物活性。從近年來的藥品抽驗情況來看，不合格項目主要集中在性狀和含量。

本研究結果發現，總核苷酸量介于102% ～127%，釋放度介于95%～130%，明顯高于標準，分析原因可能是廠家為保證ATP含量而高限投料，T3與含量呈正相關，T3和Tx呈負相關。本研究認為，通過T3和Tx比值更能反映藥品的降解程度、藥包材的質量問題，以及貯存條件的符合程度。故相對于標準中的釋放度，筆者認為限度制訂太低，因為釋放度反映的是藥片在體內的溶出程度，如果藥片本身是高限投料，而限度很低，會導致藥片未溶解而結果合格，不能真實反映藥品的質量。同時，由于是高限投料，總核苷酸的含量均在110%以上，而真正反映藥片質量的是三磷酸腺苷二鈉的比值。本研究結果表明，含量變化和三磷酸腺苷二鈉比值變化基本一致，但它們之間的關系有待進一步研究。

有文獻報道，貯存的溫度、濕度對三磷酸腺苷二鈉片的含量有重要影響[9－10]。從貯存時間和環境對含量的影響結果來看，個體藥店的貯藏條件很難達到涼暗的條件。就生產廠家而言，說明這些不合格廠家的生產工藝有待改進，或者由于包裝材料密封性能不好，導致貯藏過程中，吸潮水解。

由于本研究在流通領域開展，企業數量較少，代表性較差。但從本研究結果來看，三磷酸腺苷二鈉片的生產廠家應嚴格控制生產過程中的水分和溫度，使用單位應嚴格按貯存條件進行保管。對于現有標準，釋放度限度可適當提高。在含量測定中，建議增加T3、Tx比值的限度范圍或總核苷酸量的限度。

[1]宋新康.HPLC法測定三磷酸腺苷二鈉片有關物質[J].解放軍藥學學報，2015，31（5）：428 －431.

[2]韓 瑩，曾文珊，賴衍清，等.采用最近鄰法建立三磷酸腺苷二鈉片通用型近紅外定性模型[J].中國藥事，2015，6（3）：309－312.

[3]山廣志，宗艷平，王 曉，等.離子色譜法測定三磷酸腺苷二鈉制劑中主成分及有關物質的含量[J].色譜，2014，32（11）：1275－1279.

[4]王文佳，肖 羽，方海順，等.建立近紅外一致性模型快速鑒別三磷酸腺苷二鈉片的真偽[J].中國當代醫藥，2014，21（8）：19 － 21.

[5]Ren W，Tu WZ，Jiang SH，et al.Electroacupuncture improves neuropathic pain： Adenosine， adenosine 5′－ triphosphate disodium and their receptors perhaps change simultaneously[J].Neural Regen Res，2012，7（33）：2618 － 2623.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：23，29 －30，87，附錄ⅣA ，附錄ⅤD，附錄ⅩD.

[7]莫姿麗.三磷酸腺苷二鈉片含量測定方法的探討[J].海峽藥學，2011，13（9）：75 － 76.

[8]韋 娟.三磷酸腺苷二鈉片的質量分析[J].醫藥前沿，2011，6（13）：98 － 101.

[9]Qi WJ，Liu ZY，Zhang W，et al.Visual and Plasmon Resonance Absorption Senser for Adenosine Triphosphate Bssed on the High Affinity between Phosphate and Zr（ Ⅳ ） [J].Sensors （Basel），2016，16（10）：1674 － 1678.

[10]余穗萍.三磷酸腺苷二鈉片質量標準的探討[J].中華醫藥雜志，2005，4（12）：123 － 127.