尿沉渣定量分析儀用于腦脊液細胞計數的可行性

傅 蓉

(成都市第二人民醫院檢驗科，四川 成都 610017)

腦脊液標本的細胞計數及分類對臨床疾病的診療及預后有重要意義。然而目前腦脊液常規檢查仍廣泛采用顯微鏡手工計數，該方法操作煩瑣，速度慢，人為誤差較大，無法進行室內或室間質控。且隨著當前標本檢測數量的增多，手工計數已不能滿足大規模樣本量的準確快速檢測。UF-1000i全自動尿沉渣定量分析儀采用流式細胞術和電阻抗原理對尿液細胞成分進行分類計數，已經在臨床實驗室廣泛開展應用，其檢驗快速，準確、重復性好、可進行質控管理。鑒于腦脊液標本中的細胞總數一般位于儀器的檢測范圍內且細胞成分簡單，這為使用UF-1000i計數腦脊液中細胞數量及分類提供了理論依據[1]。筆者結合本院實驗室實際情況和國內相關文獻的研究經驗[2，3]，通過對226例住院患者的腦脊液標本同時應用UF-1000i和手工計數細胞進行對比和分析，探討該儀器在檢測腦脊液中的白細胞及紅細胞計數及分類的可行性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院2015年1—6月住院患者隨機送檢的腦脊液標本共計256例。納入標準：臨床醫師在無菌條件下進行腰椎穿刺所得，并在2 h內用無菌EDTA抗凝管送檢的標本。排除標準：(1)標本送檢容器錯誤；(2)送檢時間超過2 h；(3)標本有凝塊。按照標準，共計226例標本納入本研究。

1.2 檢驗方法 UF-1000i全自動尿沉渣定量分析儀及配套試劑和質控品均由日本SYSMEX公司提供，分析前采用儀器配套質控品進行檢測，儀器在控。檢測操作嚴格遵循儀器操作說明書及本實驗室SOP。手工鏡檢法由獲得主管檢驗技師資格證及以上資歷的檢驗人員嚴格按照第4版《全國臨床檢驗操作規程》操作。所有檢測均在標本留取后2 h內完成，結果采用雙盲方式判讀數據。

1.3 儀器及試劑 UF-1000i全自動尿沉渣定量分析儀及配套試劑(含質控品及校準品)均由日本SYSMEX公司提供，Olympus光學顯微鏡(日本奧林巴斯公司生產)，改良牛鮑計數板(江蘇鹽城錦輝玻璃儀器廠生產)，1%冰醋酸及20 μL微量吸管(江蘇泰興市諾金醫療器械廠生產)，EDTA-K2真空抗凝管由成都瑞琦公司提供。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0軟件進行組間配對t檢驗和線性回歸分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 對總體標本進行比較 分別用手工鏡檢法和儀器法對226例標本進行白細胞和紅細胞計數，對總體樣本情況進行一致性分析：白細胞回歸方程y=0.826x+44.67(t=1.148，P<0.05)。紅細胞回歸方程y=0.916x+102.22(t=1.288，P<0.05)。

2.2 對白細胞進行分組，就組內進一步進行的一致性和均數比較分析 以手工鏡檢結果為參考標準，將結果按(0～10)×106/L、(11～100)×106/L、(101～1000)×106/L、>1000×106/L梯度將標本分為A組、B組、C組、D組，進行統計學分析，結果詳見表1、表2。

表1 腦脊液白細胞計數的UF-1000i計數法與手工鏡檢結果相關性比較

表2 腦脊液白細胞計數的UF-1000i計數法與手工鏡檢結果比較

2.3 對紅細胞進行分組，就組內進一步進行的一致性和均數比較分析 以手工鏡檢結果為參考標準，將紅細胞結果按(0～100)×106/L、(1 00～1000)×106/L、(1001～10 000)×106/L、>10 001×106/L梯度將標本分為E組、F組、G組、H組，進行統計學分析，結果詳見表3、表4。

表3 腦脊液紅細胞計數的UF-1000i計數法與手工鏡檢結果相關性比較

表4 腦脊液紅細胞計數的UF-1000i計數法與手工鏡檢結果比較

3 討 論

UF-1000i全自動尿沉渣定量分析儀采用流式細胞術和電阻抗原理。尿液中的紅細胞、白細胞、上皮細胞和管型等顆粒經過核酸熒光染色后在鞘流貫流分析池中形成鞘流樣本，通過紅色半導體激光束照射，不同粒子產生相應的前向、側向散射光以及側向熒光信號，根據對光電信號進行分析實現對粒子分類進行識別[4]。結果證實，總體而言UF-1000i全自動尿沉渣分析儀檢測腦脊液細胞一致性良好。

由于本研究中細胞計數數值差別較大，且不同細胞數對臨床疾病診療的意義不同，因此對總體標本進行均數及標準差檢測意義不大。根據以上原因，筆者根據腦脊液臨床意義進一步將樣本進行分組統計分析：白細胞計數按(0～10)×106/L、(11～100)×106/L、(101～1000)×106/L、>1000×106/L梯度將標本分組；紅細胞結果按(0～100)×106/L、(100～1000)×106/L、(1001～10 000)×106/L、>10 001×106/L梯度將標本分組。由分組數據顯示，各組白細胞一致性均良好。

根據對標本分組的比較，當白細胞數>100×106/L，由兩種方法檢測到的細胞數量在統計學上無顯著性差異，C組和D組的P值分別為0.237和0.526；可以認為兩種方法學檢測一致性良好。由于腦脊液正常值為白細胞<15×106/L，鑒于A組和B組的細胞計數均值比較P<0.05，筆者將兩組共計146份標本按照白細胞數(0～20)×106/L(甲組)和(>20～100)×106/L(乙組)重新分組進行均值比較：甲組手工法和UF-1000i均值分別是3.95±4.87和6.14±6.57，P<0.05；乙組手工法和UF-1000i均值分別是53.09±25.71和70.00±31.79，P<0.05。因此在白細胞數量<100×106/L，兩組數據在統計學上有計數差異，兩組白細胞的手工法的計數值均數都低于UF-1000i法。根據筆者經驗，在低細胞水平計數均數差異可能與高蛋白、凝塊、細胞碎片以及紅細胞混入有關。因此在15×106/L為醫學決定水平附近的白細胞計數，仍須謹慎報告，不能完全依靠儀器，尤其是細胞分類涉及單個核細胞和分葉核細胞的比例差異也須人工判讀。

當白細胞數>100×106/L，檢測具有可行性，其相關性和準確性均良好。不過雖然計數差異無統計學意義，仍須注意UF-1000i在白細胞計數上的假性偏低。可能原因為白細胞檢測通道和上皮細胞檢測通道參數有重疊，當由于腦脊液滲透壓改變導致的白細胞胞體偏大或者變形，可能誤以為是上皮細胞[5]。

在腦脊液標本中，紅細胞計數值要求并無白細胞計數嚴格。少量紅細胞多考慮穿刺損傷導致；大量紅細胞多考慮腫瘤、腦室或者蛛網膜出血所致。因此雖然E組和F組的紅細胞計數均值在統計學上有差別，但研究認為兩種方法檢測結果經統計學處理無顯著性差異(P>0.05)。根據筆者分析，造成這個差異的原因可能因為不同分組中，細胞計數高低比例數不同有關。雖然相關性良好，UF-1000i計數值輕微假性偏高。考慮到兩種檢測方法相關性良好，且由于出血導致血性腦脊液血液中紅細胞數量級為1012/L。少量紅細胞計數對臨床意義不大。筆者認為UF-1000i在紅細胞計數上符合率較好，尤其是紅細胞數>1000×106/L，其相關性和準確性均良好。不僅如此，由于其圖像功能具有鑒別紅細胞形態的能力，還可以進一步協助區別新鮮出血和陳舊性出血。不過由于樣本量不夠，筆者未進一步分析紅細胞形態。

綜上所述，UF-1000i型全自動尿沉渣分析儀應用于腦脊液檢查，其操作規范，快速準確，可重復性強，生物安全性高。其白細胞及紅細胞的計數值和顯微鏡手工計數法相關性良好，尤其在白細胞>100×106/L、紅細胞>1000×106/L時，其計數值和手工法無統計學差異。隨著實驗室樣本量不斷增加，手工檢測無法滿足需要的情況下將其應用于細胞計數上更加具有臨床檢測價值。值得注意的是在白細胞<100×106/L時，尤其是白細胞位于(5～20)×106/L時，儀器法不能完全替代手工法，二者應該相互結合。

[1]韓娟，曹軍皓，楊琴，等.XT-4000i全自動血細胞分析儀與UF-1000i尿沉渣分析儀在腦脊液細胞計數中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2012，33(18)：2248-2249.

[2]李文慶，李紅燕，李玉.Sysmex UF-500i和XT-4000i在體液細胞計數中的應用評價[J].實用醫技雜志，2015，22(1)：63-65.

[3]曹興華.UF-1000i尿有形成分分析儀在腦脊液細胞計數中的應用[J].中國實用神經疾病雜志，2011，14(8)： 97.

[4]左萬超，鄭衛東.全自動尿沉渣分析儀在腦脊液細胞計數中的應用[J].國際檢驗醫學雜志，2016，37(7)：969-970.

[5]章文.UF-100尿沉渣分析儀在小兒腦脊液及漿膜腔積液檢查中的應用[J].國外醫學：臨床生物化學與檢驗學分冊，2004，25(3)：281.