GRIN1、GRIN2B基因多態(tài)性與氯胺酮依賴的關(guān)聯(lián)研究＊

藍(lán)曉嫦，劉玉平，劉恩益，周超，王懷坤，段煉，丁毅

（廣州市惠愛醫(yī)院，廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院，廣州510370）

氯胺酮俗稱“K粉”，是苯環(huán)利啶(N-1-phenycyclohexypieridine，PCP)的衍生物，屬非競爭性N-甲基-D-天門冬氨酸（NMDA）受體拮抗劑，是目前我國流行最廣泛的三大新型毒品之一[1]。有文獻(xiàn)報道，在氯胺酮濫用者中，12.7%的人經(jīng)歷過與氯胺酮相關(guān)的急性中毒，13.5%發(fā)生了攻擊他人行為，40.3%和5.5%的人出現(xiàn)相關(guān)的性沖動和性暴力行為，12.1%經(jīng)歷過不同程度的精神障礙[2]，長期濫用氯胺酮還會導(dǎo)致一系列的并發(fā)癥，包括藥物依賴、記憶力損害、腹痛、肝功能障礙等[3]，這些都為個人身心健康、社會治安和公共衛(wèi)生造成危害。盡管氯胺酮濫用帶來的個人、社會和公共衛(wèi)生問題越來越嚴(yán)重，但是目前對其成癮的相關(guān)機(jī)制和相應(yīng)的處理對策并未闡明。本研究擬通過遺傳學(xué)研究探討NMDAR1和NMDAR2B受體基因多態(tài)性是否與氯胺酮成癮的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)，擬在此研究基礎(chǔ)上探索出能夠準(zhǔn)確判定和檢測氯胺酮成癮心理渴求變化的生物學(xué)標(biāo)記。

1 研究對象和方法

1.1 研究對象

從2013年7月～2017年5月期間在廣州市惠愛醫(yī)院物質(zhì)依賴科和廣州市白云自愿戒毒醫(yī)院住院治療的氯胺酮依賴者。入組標(biāo)準(zhǔn)：（1）漢族，18～50歲，采用DSM-IV-TR半結(jié)構(gòu)式會談藥物依賴診斷量表（SCIDAD），符合DSM-Ⅳ-TR中關(guān)于氯胺酮依賴的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，（2）尿液濫用物質(zhì)篩查氯胺酮陽性，（3）由本人簽署書面知情同意，排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并SCID中其他嚴(yán)重精神疾病；（2）伴有嚴(yán)重的軀體疾病者；（3）合并有其它物質(zhì)濫用者（如傳統(tǒng)型毒品、酒精或其它種類新型毒品等，尼古丁除外）。正常對照組入組標(biāo)準(zhǔn)：（1）無精神疾病史及精神活性物質(zhì)濫用史，（2）尿?yàn)E用物質(zhì)篩查陰性，（3）由本人簽署書面知情同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合SCID中任何精神疾病診斷或有相關(guān)家族史者，（2）同患者組。本方案經(jīng)我院倫理委員會審批、備案。所有入組對象簽署書面知情同意。

1.2 血液標(biāo)本采集及DNA檢測

所有入組患者均于入組次日早上7：00～7：30空腹抽取肘部靜脈血液樣本5ml（EDTA抗凝管），同期收集匹配的正常對照組血液樣本，送我院實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行離心（3000轉(zhuǎn)，離心10分鐘）分離出血細(xì)胞和血清，標(biāo)本存放在實(shí)驗(yàn)中心-70的冰箱。收集完所有標(biāo)本后用冰盒保存統(tǒng)一外送至上海瑞立生物科技有限公司，委托該公司的專業(yè)檢測技術(shù)人員采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)及限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)技術(shù)對樣本進(jìn)行基因分型鑒定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)管理。用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算等位基因及基因型頻率，卡方檢驗(yàn)檢測等位基因頻率是否符合Hardy—Weinberg平衡定律，且比較患者組和對照組基因型分布的差異。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較組間年齡，x2檢驗(yàn)比較性別差異、組間基因型及等位基因的頻率。顯著性水平取α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 本研究共入組了113例符合氯胺酮依賴的患者，其中男性105例，女性8例；同時入組136例健康對照者，其中男性123例，女性13例；兩組受試者性別經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.49，p=0.48）。患者組平均年齡（28.80±6.49）歲；對照組平均年齡（26.55±6.14）歲，兩組受試者年齡經(jīng)t檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p≥0.05）。

2.2 H-W平衡檢驗(yàn) 經(jīng)檢驗(yàn)，患者組和對照組GRIN1、GRIN2B等位基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05），觀察值和理論值之間差異無顯著性，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡法則，表明這些樣本能夠代表一般人群。

2.3 經(jīng)卡方檢驗(yàn)，GRIN1基因型及等位基因在氯胺酮依賴組與健康對照組間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p≥0.05）。（見表1）。

表1 GRIN1基因型及等位基因在氯胺酮依賴組與對照組間的分布比較

表2 GRIN2B基因型及等位基因在氯胺酮依賴組與對照組間的分布比較

2.4 經(jīng)卡方檢驗(yàn)，GRIN2B基因型及等位基因頻率在氯胺酮依賴組與健康對照組間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p≥0.05）。（見表2）。

3 討論

藥物成癮是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)適應(yīng)性或可塑性改變?yōu)榛A(chǔ)的慢性、復(fù)發(fā)性的腦疾病，其特征表現(xiàn)為強(qiáng)制性的覓藥行為和高復(fù)吸率；成癮者具有個體易感性差異[4]。氯胺酮是現(xiàn)階段最常用的幾種新型毒品之一，盡管目前國內(nèi)外對氯胺酮的濫用、流行及其危害都十分關(guān)注，但對氯胺酮成癮性的研究報道較少，尤其對氯胺酮成癮的分子生物學(xué)基礎(chǔ)缺乏相應(yīng)的研究。

有研究表明成癮和學(xué)習(xí)記憶都依賴于一些共同的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制，由相同的神經(jīng)營養(yǎng)因子調(diào)節(jié)，并具有某些共同的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程以誘導(dǎo)特定基因的表達(dá)，都伴隨著谷氨酸能突觸可塑性的改變[5-6]。因此，谷氨酸能系統(tǒng)，尤其是N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)受體在藥物成癮的研究中受到了越來越多的重視[7]。從行為學(xué)實(shí)驗(yàn)來看，似乎NMDA受體可介導(dǎo)減輕或抑制嗎啡等誘導(dǎo)的動物藥物刺激辨別等行為以及能減輕阿片類的軀體依賴癥狀[8]。另一方面分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)也進(jìn)一步證實(shí)了NMDA 受體亞單位(包括NMDAR1亞單位結(jié)合一個或幾個不同的NMDAR2(NR2A-2D)亞單位以及NMDAR3A亞單位)參與了藥物成癮的形成。研究發(fā)現(xiàn)，NMDAR1亞單位參與了嗎啡的軀體依賴癥狀，NMDAR2B 亞單位參與了嗎啡的獎賞效應(yīng)。側(cè)腦室微注射NMDAR1的反義寡核苷酸能顯著減輕納洛酮促發(fā)嗎啡依賴的大鼠撤藥癥狀。Narita 用免疫組織化學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)嗎啡誘導(dǎo)小鼠形成條件性位置偏愛后，其大腦皮質(zhì)區(qū)、海馬和邊緣前腦區(qū)NMDAR2B亞單位表達(dá)顯著增加[9]。

至此，盡管關(guān)于NMDA受體在物質(zhì)成癮或渴求的研究很多，但是對于本身作用于NMDA受體的氯胺酮成癮與NMDA受體間的關(guān)系，目前卻還沒有相關(guān)研究報道。本研究通過病例對照研究方法探討了氯胺酮成癮者NMDA受體亞基NMDA1基因(GRIN1 )和NMDA2B基因(GRIN2B)多態(tài)性，研究結(jié)果顯示氯胺酮依賴組與健康對照組間GRIN1、GRIN2B基因型和等位基因頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示GRIN1、GRIN2B基因多態(tài)性與氯胺酮依賴可能無關(guān)聯(lián)性。但是本文樣本數(shù)不大，基因的變異本身受到多方面的影響，如種族、環(huán)境、人群遷移等，而成癮性疾病是一種復(fù)雜的慢性腦病，鑒于其病因?qū)W和治療上的意義，將來還是有必要繼續(xù)深入進(jìn)行氯胺酮成癮的遺傳學(xué)方面研究，今后可加大樣本量對兩者的關(guān)聯(lián)性做進(jìn)一步研究。

致謝：衷心感謝廣州市白云自愿戒毒醫(yī)院戒毒科病房醫(yī)生護(hù)士給予的支持和幫助。

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