滇龍膽栽培技術(shù)研究進(jìn)展

盧杰 胡勇

摘要：對滇龍膽近年的種子生理、育苗、組織培養(yǎng)、栽培模式、生態(tài)因子影響、生長年限與采收期研究和病蟲害等方面的研究情況進(jìn)行了綜述，為滇龍膽的進(jìn)一步栽培研究提供參考。

關(guān)鍵詞：滇龍膽;栽培技術(shù);研究進(jìn)展

中圖分類號：S572

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1674-9944（2018）04-0096-03

1 引言

滇龍膽（Gentiana rigescens Franch. ex Hemsl.）為龍膽科（Gentianaceae）植物，又名堅龍膽，根與根莖入藥。其有清熱燥濕，瀉肝膽火的功效。滇龍膽用藥歷史悠久，長期使用野生資源，使野生資源量銳減，人工栽培種植是其必然發(fā)展趨勢。朱衛(wèi)萍等研究了栽培滇龍膽的化學(xué)成分.證實(shí)其所含化學(xué)成分類型、主要成分和野生滇龍膽一致。滇龍膽栽培與野生品中龍膽苦苷含量相當(dāng)。兩者龍膽苦苷含量均高于藥典標(biāo)準(zhǔn)。這項(xiàng)研究為滇龍膽的栽培提供了理論基礎(chǔ)。本文從滇龍膽的近年各方面栽培技術(shù)研究進(jìn)行綜述，為滇龍膽的不斷深入栽培研究提供參考。

2種子生理研究

滇龍膽生產(chǎn)上以種子進(jìn)行繁殖為主。滇龍膽種子為栽培的起點(diǎn)。楊美權(quán)等研究了溫度、光照、貯藏方式和貯藏時間以及赤霉素濃度對滇龍膽種子萌發(fā)的影響。結(jié)果顯示：25℃為滇龍膽種子最適宜萌發(fā)溫度.發(fā)芽率達(dá)76. 33%。光照對種子萌發(fā)影響顯著。在自然條件下，干藏為種子最佳貯藏方式，并可促進(jìn)種子后熟，但不能超過6個月。100--1000 mg/L赤霉素處理可明顯縮短滇龍膽種子萌發(fā)時間，其中500 mg/L赤霉素處理可使種子發(fā)芽率提高至95.00%。

新鮮滇龍膽種子中有水溶性的萌發(fā)抑制物。其水浸提液抑制白菜籽萌發(fā)及胚根生長。滇龍膽種子經(jīng)4℃貯藏了1年后，其種子萌發(fā)時間長，需經(jīng)39 h才能充分吸水膨脹。一定時間的低溫層積處理有利于種子萌發(fā)，為縮短剛采收種子的萌發(fā)時間，50～80 d的低溫層積處理效果相對較好。

干藏1年的滇龍膽種子在所有處理下均未發(fā)芽。在pH值為7.0時，冷藏1年和當(dāng)年的滇龍膽種子最高發(fā)芽率（71. 0%和58. 5%），最長胚芽長度（5.46 mm和4. 90 mm）。在5% PEG處理下，上述兩種樣品最高發(fā)芽率（73. 0%和60. 0%）;PEG對種子胚芽長度的抑制作用最明顯;10% ～15%PEG對當(dāng)年種子的萌發(fā)時間影響顯著;在相同水分脅迫條件下，冷藏1年種子的發(fā)芽率均高于當(dāng)年種子，而平均萌發(fā)時間顯著低于當(dāng)年種子。冷藏可以打破滇龍膽種子的休眠。

滇龍膽種子不耐干藏久存。李志宇采用種子引發(fā)和吸濕一回干組合的種子處理方法.選取不同無機(jī)鹽溶液和高分子有機(jī)溶液對滇龍膽種子進(jìn)行引發(fā)回干處理來回復(fù)種子活力。試驗(yàn)對處理后的種子分別進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)和生理生化檢測，統(tǒng)計發(fā)芽特性指標(biāo)和相關(guān)生理特性指標(biāo)，以此探究不同引發(fā)回干處理對滇龍膽種子萌發(fā)的影響，篩選最適的引發(fā)溶液。經(jīng)篩選，1.0%KNO₃引發(fā)回干處理的滇龍膽種子發(fā)芽率最高，達(dá)到81.67%。可見，栽培滇龍膽時，使用1.0%KNO₃對滇龍膽種子進(jìn)行引發(fā)回干處理，可以獲得好的生產(chǎn)效果。

近年，林藥栽培模式興起。楊美權(quán)等研究了在同一濃度下的核桃葉、茶葉、桉葉提取液對26份不同居群的滇龍膽資源種子的化感作用。采用化感作用效應(yīng)指數(shù)進(jìn)行評價。結(jié)果為：在0. 2%濃度下3種葉片的提取液對滇龍膽種子的萌發(fā)均有一定的抑制作用，其化感作用的強(qiáng)弱為：桉葉>茶葉>核桃葉。可見.在林藥栽培時.需充分考慮化感作用。

另有報道，果實(shí)、種子的適時采收也有利于種子萌發(fā)。當(dāng)種子為綠色，種皮尚未變硬時，采集未完全成熟的果實(shí)，將果實(shí)在0～5℃干沙中沙藏1個月，果實(shí)成熟。然后將種子從成熟的果實(shí)中取出;將種子放入50-1000 mg/L濃度的赤霉素中，在25℃條件下自然光照，浸泡24 h，再進(jìn)行種子發(fā)芽。種子發(fā)芽率高達(dá)84%以上。

3育苗研究

砂培漂浮育苗技術(shù)在滇龍膽育苗中研究較多。砂培漂浮育苗技術(shù)使用粗砂為基質(zhì)，控制了滇龍膽苗期雜草危害問題。該技術(shù)在一定程度上避免了滇龍膽常規(guī)育苗中由于澆水次數(shù)過多，造成的土表板結(jié)問題，以及澆水中常造成種子被沖刷而露于土表易失水干芽的問題。滇龍膽砂培漂浮育苗時基質(zhì)配比對種子萌發(fā)有一定影響。秦子入等正交試驗(yàn)設(shè)計分析基質(zhì)：珍珠巖、蛭石、草炭和腐殖土對滇龍膽漂浮育苗的種子萌發(fā)和幼苗生長的影響。其種子萌發(fā)的最佳基質(zhì)配比是珍珠巖：蛭石：草炭：腐殖土-3：1：3：4.該配比下種子萌發(fā)率達(dá)93. 4%。四種基質(zhì)中珍珠巖和腐殖土對種子萌發(fā)率有顯著影響，蛭石和草炭對種子萌發(fā)作用不顯著。滇龍膽幼苗生長的最佳基質(zhì)配比是珍珠巖：蛭石：草炭：腐殖土一2：1：3：4，該配比條件下幼苗高、根長及莖葉干重均顯著高于其他基質(zhì)配比。

層積方式、層積時間、赤霉素稀釋液濃度和浸種時間對滇龍膽種子漂浮育苗的萌發(fā)及成苗也有影響。促進(jìn)滇龍膽種子萌發(fā)的最佳處理組合是：濕沙層積方式十層積60 d+赤霉素濃度200 mg/L+浸種24 h。促進(jìn)成苗的最佳處理組合是：一般層積方式十層積30 d+赤霉素濃度50 mg/L+浸種24 h。綜合考慮，滇龍膽種子漂浮育苗促進(jìn)萌發(fā)和成苗的最佳處理組合是：一般層積方式十層積30 d+赤霉素濃度50 mg/L+浸種24 h，該組合處理下種子萌發(fā)率為90. 23%、成苗率高達(dá)97. 50%。

適量的施肥有利于滇龍膽幼苗生長。在滇龍膽漂浮育苗中對幼苗進(jìn)行適宜濃度的施磷，其幼苗株高、根長、莖葉干質(zhì)量和根干質(zhì)量均極顯著高于空白組，而且葉片中葉綠素含量等指標(biāo)也極顯著高于空白組。營養(yǎng)液中磷質(zhì)量濃度以50～100 mg/L為宜。N肥也為滇龍膽所必須。尿素態(tài)氮濃度以25～50 mg/L范圍內(nèi)為宜，有利于幼苗莖葉生長;當(dāng)尿素態(tài)氮濃度為100 mg/L時，幼苗的生長受到抑制，根系活力也下降。

4組織培養(yǎng)研究

組培現(xiàn)已經(jīng)廣泛用于各種藥用植物的栽培育苗中。但滇龍膽的組織培養(yǎng)研究不多。趙志蓮等對滇龍膽莖尖生長點(diǎn)離體培養(yǎng)及植株再生的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。其認(rèn)為最適宜培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基，再生植株誘導(dǎo)率高可達(dá)80. 00%，最佳培養(yǎng)條件是20℃/25℃變溫培養(yǎng)，再生植株誘導(dǎo)率高可達(dá)87. 78%。

組培滇龍膽和野生滇龍膽有效成分儲存部分不同應(yīng)引起注意。野生堅龍膽（滇龍膽）中的龍膽苦苷主要儲存于根部，而組培堅龍膽中龍膽苦苷集中在莖、葉部位。在出根初期組培堅龍膽葉中的龍膽苦苷含量近似于或略大于野生堅龍膽根中的含量。可見，綠色組織是龍膽苦苷合成的部位.這些部位也同時具有儲藏功能。

5栽培模式研究

林藥，農(nóng)藥等多種栽培模式可以提高土地利用率，增加產(chǎn)值，是滇龍膽栽培技術(shù)研究的重點(diǎn)。滇龍膽栽培中現(xiàn)在研究較多的栽培模式有木瓜、尼泊爾榿木、茶樹、大葉桉、天麻等和滇龍膽的組合栽培方式。

米麗菊等將傅里葉變換紅外光譜結(jié)合化學(xué)計量學(xué)應(yīng)用于滇龍膽栽培方式篩選上。該研究小組應(yīng)用上述方法對滇龍膽的條播、撤播、剪根后移栽、扦插和剪枝后移栽，這些栽培方式進(jìn)行了分析，以篩選最佳栽培方式。結(jié)果為：滇龍膽所含四種主要成分總量大小是：剪枝>剪根>撒播>條播>扦插，除剪根后移栽剪枝后移栽這種栽培方式所產(chǎn)滇龍膽質(zhì)量最佳。沈濤探討建立滇龍膽不同極性部位的紫外指紋圖譜，以分析其不同栽培模式下藥材光譜特征的差異。分析后認(rèn)為不同栽培模式滇龍膽紫外指紋圖譜在221～247 nm圖譜重疊率低，有明顯指紋特征。不同栽培模式的滇龍膽樣品90%能正確識別。紫外指紋圖譜可協(xié)助區(qū)分藥材栽培模式”。該研究組也探討了HPLC指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計量學(xué)在滇龍膽林藥復(fù)合栽培最適模式的選擇及質(zhì)量控制方面的應(yīng)用。王麗等發(fā)明烏天麻和龍膽套、輪作的方法：第一年，選地，培養(yǎng)菌床;第二年，定植種麻，打草蓋塘.播種滇龍膽，采挖天麻;第三年，間苗補(bǔ)苗，剪稈過冬;第四年，滇龍膽采收。

不同的栽培模式會對滇龍膽的形態(tài)、生物量和化學(xué)成分造成影響。沈濤等分別試驗(yàn)了幼齡茶樹、十年茶樹、尼泊爾榿木、大葉桉、木瓜間作模式和荒坡栽培滇龍膽的栽培模式。上述模式中.荒坡栽培光照條件較好，有利于生物量的積累;而與桉樹間作，滇龍膽受生物與非生物脅迫的影響，植株矮小，生物量低。6種模式中荒坡、滇龍膽與茶樹、木瓜間作栽培為效果好的高產(chǎn)模式。楊美權(quán)等的研究也證明栽培模式對滇龍膽不同器官的龍膽苦苷的含量有影響。木瓜茶樹滇龍膽套種時根部龍膽苦苷含量最高為3. 80 mg/g，荒坡種植時葉龍膽苦苷含量為1. 34 mg/g、花龍膽苦苷含量為1.22mg/g;上述栽培模式滇龍膽根均符合藥典要求，可作為龍膽藥材入藥。

不同滇龍膽種植模式中滇龍膽Fe、Mn元素含量差異大。單一種植及杉木十滇龍膽、旱冬瓜十滇龍膽復(fù)合種植下，滇龍膽植株與土壤中部分元素含量具有相關(guān)性。不同種植模式下的滇龍膽對礦質(zhì)元素的富集能力有差異性，其中對Cu、Mn、Ca、Zn元素的富集能力較強(qiáng)。這些模式中茶樹十滇龍膽種植模式下的葉對Cu的富集能力最強(qiáng)。

6生態(tài)因子影響研究

楊雁等對大理蒼山不同海拔和土壤成分對野生滇龍膽生長和龍膽苦苷含量的影響進(jìn)行了研究。其研究了海拔梯度2203～3327 m內(nèi)的野生滇龍膽的表型性狀、生物量和龍膽苦苷含量。試驗(yàn)結(jié)果為：滇龍膽植株性狀與海拔梯度間無相關(guān)性;當(dāng)海拔2783 m時，地上部干重/地下部干重之比=0. 99;其余海拔高度均為地上部干重高于株地下部干重，當(dāng)海拔3046 m時，地上部干重是地下部干重的2. 56倍;此時地下部龍膽苦苷含量均高于地上部龍膽苦苷含量。除了海拔3327 m時地下部與地上部龍膽苦苷含量之比為1. 46倍之外，其余海拔高度地下部龍膽苦苷含量均是地上部龍膽苦苷含量的2倍以上。分析表明，滇龍膽龍膽苦苷含量與土壤成分含量和海拔高度相關(guān)性不顯著。

7 生長年限與采收期研究

袁天軍等應(yīng)用超聲提取一離子色譜（ UAE-IC）法測定滇龍膽不同年限、不同部位中NO^-₂、NO^-₃、F^-、Cl^-、PO^3-₄5種離子。所測定的滇龍膽樣品中離子含量NO^-₃>PO^3-₄>F^->Cl^-;這4種離子在1.5年生含量最高，2年生含量最低，2～3年生又呈上升趨勢。滇龍膽栽培3年后藥材質(zhì)量穩(wěn)定.品質(zhì)最佳，環(huán)烯醚萜與裂環(huán)烯醚萜類總含量最高。

申云霞等采用紅外光譜法對72份不同采收期的滇龍膽進(jìn)行鑒別研究。研究表明5月、9月和10月份采收的滇龍膽樣品差異較小。紅外光譜法結(jié)合主成分分析與偏最小二乘判別分析對滇龍膽不同采收期的分類和判別有較好效果，此法可用于不同采收期的滇龍膽鑒別。

8 病蟲害研究

栽培滇龍膽的病害主要為炭疽病、銹病、網(wǎng)斑枯病、匐柄霉葉枯病、灰霉病、褐斑病、格孢腔菌（多胞菌）葉枯病、殼二孢葉枯病、胞囊線蟲病和根結(jié)線蟲病。其中炭疽病是栽培中的主要病害.發(fā)病株率>40%，嚴(yán)重度達(dá)4～5級。栽培病害中其次是銹病，發(fā)病株率10%以下。其他病害發(fā)病株率在2%以下。對這些病害應(yīng)提出相對的防治措施，以減少病害，提高滇龍膽產(chǎn)量。

從以上研究可以看出，雖然在栽培上種子生理、育苗研究、組織培養(yǎng)、栽培模式、生態(tài)因子影響、生長年限與采收期和病蟲害等方面都有研究報道，但是種子生理、育苗、栽培模式研究較多，其他方面研究偏少，應(yīng)該加強(qiáng)。各栽培模式的規(guī)范化栽培和標(biāo)準(zhǔn)還沒形成。另據(jù)沈磊的研究報道滇龍膽根和葉提取物均有較好的保肝作用，葉和莖提取物有較好的抗炎作用。所以，應(yīng)加強(qiáng)滇龍膽的莖葉綜合開發(fā)利用。