Toll樣受體4基因AsP299G1Y多態性與肺炎鏈球菌病易感性的Meta分析

朱滿桂　馮艷　杜萌　劉星星　劉翠平　李夏西

[摘要]目的系統評價Toll樣受體4（TLR4）基因Asp299Gly基因多態性與肺炎鏈球菌病易感性的相關性。方法計算機檢索Pubmed，Cohrance，Embase，CNKI，維普，萬方等網站，檢索時限均為各數據庫建庫到2016年7月31日，搜尋符合納入和排除條件的隨機對照研究，采用RevMan5.3軟件進行Meta分析及相關統計學分析。結果共納入5篇文獻，樣本量總計為1456例，其中研究組501例，對照組955例。Meta分析未見TLR4基因Asp299Gly多態性與肺炎鏈球菌病易感性相關（等位基因A vs G：OR=1.01，95%CI=0.49～2.07，P=0.98；基因型AA/AG vs GG：0R=0.67，95%CI=0.18～2.48，P=0.55；基因型AA vs AG/GG：OR=1.01，95%CI=0.47～2.19，P=0.98）。結論未見TLR4基因Asp299Gly多態性與肺炎鏈球菌病易感性相關。

[關鍵詞]TLR4基因Asp299Gly多態性；多態性；單核苷酸；肺炎鏈球菌病；Meta分析

[中圖分類號]R446 [文獻標識碼]B [文章編號]2095-0616（2017）17-36-04

肺炎鏈球菌（streptococcus pneumoniae）是社區獲得性肺炎的最常見的致病原因，在全球具有高發病率與死亡率。肺炎鏈球菌可導致局部感染如中耳炎和肺炎，亦可導致嚴重侵襲性疾病包括菌血癥和腦膜炎，而后者是肺炎鏈球菌病導致5歲以下兒童死亡的主要病因。越來越多的研究表明，肺炎鏈球菌感染發展為侵入性致死性疾病與宿主遺傳因素密切相關。Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs）基因是人體識別病原微生物并調控免疫反應的重要受體基因，參與介導和調控細菌和病毒的感染。Toll樣受體基因中最重要的是TLR4基因，在急性炎癥反應中發揮的作用尤為突出。TLR4基因3號外顯子Asp299Glv突變推測與個體對肺炎鏈球菌病的易感性可能有關。TLR4基因Asp299Gly多態性與肺炎鏈球菌病的相關性已有多篇文獻報道，現搜集相關文獻進行Meta分析，以期了解肺炎鏈球菌病易感性關系的基因證據。

1材料與方法

1.1文獻檢索方法

搜索Pubmed，Cohmnce，Embas數據庫，英文檢索詞：Toll-like receptor、TLR、polymorphism、Streptococcuspneumoniae以及pneumococcal；系統地搜索CNKI、萬方、知網等數據庫，中文檢索詞：Toll樣受體、TLR、肺炎鏈球菌病、肺炎。其搜索到的文章不需要限制語言的種類，有關TLR4基因多態性和肺炎鏈球菌病感染性關系的文章就可以收錄。使用相應的手段找到更多的相關文獻。全部的文章需要滿足這樣一個條件：在2016年7月31日之間發表的。

1.2文獻標準

（1）TLR4基因多態性以及肺炎鏈球菌病感染情況有著一定的關系的病例對照文章；（2）研究信息完備，包括研究組以及對照組的每一個基因型分布情況；（3）論文中報道信息完整以及依照報道結果可以推算出每一個基因型分布情況，文中統計方式無錯誤；（4）清除未明確列出實驗組或對照組基因型人數的文獻；（5）對照人群不能偏離Hardy-Weinberg平衡（HWE），P>0.05。

1.3質量評價

參考英國牛津循證醫學中心文獻嚴格評價項目（Oxford critical appraisal skill program，OxfordCASP，2004）㈣評價納入病例對照研究的質量：（1）樣本數目是不是足夠多；（2）診斷標準是不是出現含糊不清的情況；（3）對照組是否和研究組有著比較性；（4）基因測定手段合理與否；（5）分組情況是否符合科學研究規定；（6）數據是否充分等。由第一作者與通信作者依據統一標準確定每篇文章是否納入，假設意見不一致時可與其他作者討論解決。

1.4統計學方法

Meta分析使用Review Manager5.3軟件（Cochrane網下載）。每一項實驗的差異性依照Cochrane手冊。當試驗結果出現顯著異質性（I²>50%）時，使用隨機效應模型，尋找異質性來源，并分析產生原因；當試驗結果無明顯異質性（I²≤50%）時，則使用固定效應模型。通過繪制倒漏斗圖直觀判斷發表偏倚。

2結果

2.1文獻篩選情況

總計納入文獻5篇，研究群體大部分為白人。總樣本量1456例，研究組501例，對照組955例，納入Meta分析的文獻數據如表1。

2.2 Meta分析結果

2.2.1TLR4基因Asp299Gly位點等位基因與基因型結果 詳見表2。

2.2.2等位基因模型（A vs G）Meta分析結果 等位基因A vs G時Q=8.35，P=0.08，F=52%，異質性大，采用隨機效應模型得到OR=1.01（95%CI=0.49～2.07），Z=0.03，P=0.98（圖1），差異無統計學意義，即TLR4基因Asp299Gly多態性與肺炎鏈球菌病的關聯無統計學意義。

2.2.3基因型模型（AA/AG vs GG）Meta分析結果 分析基因型AA/AG vs GG時：12=0%，采用固定效應模型得到OR=0.67（95%CI=0.18～2.48），Z=0.60，P=0.55（圖2），即TLR4基因Asp299Glv多態性與肺炎鏈球菌病的關聯無統計學意義。

2.2.4基因型模型（AA vs AG/GG）meta分析結果 基因型AA vs AG/GG時：12=53%，采用隨機效應模型得OR=1.01（95%CI=0.47～2.19），Z=0.03，P=0.98（圖3）。均未見TLR4基因Asp299Glv多態性與肺炎鏈球菌病易感性存在相關性。漏斗圖如圖4所示，研究分布較為對稱，表明發表偏倚尚可。

3討論

Toll樣受體識別各種病原體和宿主細胞感染的跨膜蛋白，與炎癥反應密切相關。TLR4基因位于染色體9q32-q33，其單核苷酸多態性299位點的天冬氨酸替代為甘氨酸（Asp299Gly、896a/g，SNPID：rs4986790）可使TLR4受體的胞外結構域發生結構變化，從而導致免疫系統對LPS反應下降，即更易對病原體易感。TLR4有兩種識別LPS信號的模式：一種為細胞表面糖蛋白14（CD14）依賴性，一種為非CD14依賴性。而細菌的識別大多為CD14依賴性。TLR4可與CD14、髓樣分化蛋白-2（MD-2）形成CD14/TLR4/MD-2復合體，由TLR4胞內段與MyD88結合啟動LPS信號轉導通路，從而導致免疫反應，因此，TLR4基因多態性被認為與各類感染性疾病相關，如膿毒癥、牙周炎、炎癥性腸病等。一項綜合7項研究的Meta分析指出TLR4 Asp299Gly基因多態性與革蘭陰性菌易感性不相關。肺炎鏈球菌作為導致兒童侵襲性感染最常見的革蘭陽性菌，目前暫無研究TLR4 Asp299Gly基因多態性肺炎鏈球菌易感性的Meta分析。Malley等發現缺乏TLR4的小鼠在暴露于肺炎鏈球菌溶血素環境下較正常小鼠更容易發生侵襲性感染及死亡。Tanaka等發現TLR4單克隆抗體UT12可改善肺炎球菌肺炎預后，提示TLR4可能與革蘭陽性球菌如肺炎鏈球菌相關。

本研究5篇研究中Moens與Yuan的研究發現TLR4 Asp299Gly與肺炎鏈球菌病無關聯，而最近的一項研究卻顯示二者臨界相關，攜帶等位基因A更易感肺炎鏈球菌病。Meta分析整合納入的5篇文獻，發現在等位基因和各種基因型的對比上，其P值均大于0.05，表明尚無明確證據證明二者有關。得到陰性結果可能因為：（1）納入文獻較少，總樣本量較少。本Meta分析為明確TLR4 Asp299Glv多態性位點與肺炎鏈球菌的關系，所以排除了一切非肺炎鏈球菌病作為對象的研究，例如研究對象僅籠統概括為肺炎，或者侵襲性肺炎的。嚴格的納入標準保證了納入文獻的質量，但也限制了納入文獻的數量，造成Meta分析的效度受影響。（2）單純TLR4Asp299Gly多態性位點并不能有效地影響肺炎鏈球菌病的臨床轉歸。肺炎鏈球菌病是否發展為嚴重的侵襲性疾病從而引起死亡，不僅取決于基因位點突變后宿主是否對肺炎鏈球菌易感，更取決于患者的年齡、基礎疾病以及治療是否及時，用藥是否規范等。（3）TLR4 Asp299Glv多態性位點需要與其他多態性位點共同作用才能在肺炎鏈球菌病的易感性上發揮作用。例如Huebinger等檢測了TLR4信號轉導相關通路上的6個多態性位點，表明TLR4的基因轉導通路與復雜性感染相關，本Meta分析納入的三項研究中缺乏對TLR4相關的其他多態性位點的研究，結論具有一定的片面性。因此，未來新的關于TLR4 Asp299Gly多態性與肺炎鏈球菌易感性的研究不僅可從增加樣本量著手，也可增加TLR4相關的多態性位點，以期更深入地研究TLR4通路相關基因多態性與肺炎鏈球菌易感性的關系。

（收稿日期：2017-06-14）