γ-干擾素體外釋放試驗在結核病診斷中的應用價值*

劉 濤，馮曉梅（.運城市中心醫院檢驗科，山西044000；2.運城學院，山西運城044000）

結核病由結核分枝桿菌感染所引起，是一種慢性呼吸道傳染病，已嚴重危害人類的身心健康[1]。我國作為結核病高發病率的國家，已成為世界第三大高負擔國家，每年新發結核病病例已高達130萬例，死亡病例更是達到了13萬例[2]。因此，我國結核病的控制形勢非常嚴峻，急需采取有效措施進行遏制。對于結核病的預防和控制，診斷與治療是核心。而結核病早期快速而準確的診斷，又是控制結核病蔓延、阻斷傳染源的關鍵環節，只有早診斷才能早治療。

目前，結核病診斷“金標準”是痰涂片和培養，但痰培養因陽性率低、耗時長（培養4～8周），常不能滿足臨床早期診斷和及時治療需求，而且結核菌的培養在操作規程和生物安全性要求方面非常嚴格，不利于在基層醫院廣泛開展；涂片鏡檢法作為實驗室常用的檢測方法，成本低、易取材，但敏感度低，又有非結核分枝桿菌的干擾，易漏診[3-4]。結核菌素皮膚試驗（TST）因其不能區分是陳舊感染還是新近感染，且與卡介苗及環境非結核分枝桿菌之間存在交叉免疫，容易引起誤診[4]。分子生物學方法如GeneXpert，敏感性和特異性均較高[5]，但儀器、試劑價格昂貴，限制了其在醫療衛生單位的推廣應用。全血結核分枝桿菌相關γ-干擾素體外釋放試驗（TB-IGRA）作為一種結核病診斷方法，以其早期快速且價廉、生物安全性較好等特點，在國外已得到廣泛應用[6]。本文通過對在運城市中心醫院進行TB-IGRA試驗患者數據的回顧性分析，評估TB-IGRA在該地區結核病診斷中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年4月至2016年4月在運城市中心醫院進行TB-IGRA檢測的106例門診和住院患者的病例資料，并進行隨訪。106例患者中，結核病患者51例（結核病組，男30例，女21例；年齡18～84歲），其中肺結核30例，肺外結核21例，診斷標準參照中華醫學會《臨床診療指南——結核病分冊》[7]；疑似結核病例及非結核病例55例（疑似結核及非結核組，男37例，女 18 例；年齡 12～88歲）。排除標準：（1）已接受抗結核治療；（2）人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體陽性；（3）有免疫系統疾病及使用免疫抑制劑的患者。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 北京天石酶標儀，型號：SM-3；BioTek洗板機，型號：ELX808IU；北京萬泰TB-IGRA檢測試劑盒，批號：TR20141001-1-10。

1.2.2 檢測方法 全血TB-IGRA所有操作步驟均嚴格按照說明書執行。靜脈采集4 mL以上新鮮抗凝全血，注入BD公司專用肝素鋰抗凝采血管，每管1 mL，分裝至測試刺激管（Test），陽性對照管（Positive），陰性對照管（Negative），37 ℃培養 22～24 h，3 000～5 000 r/min 離心10 min，分離上清液（注意避免吸到細胞層）進行酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測。根據ELISA標準曲線計算相應γ-干擾素水平。按照《結核病實驗室標準操作規程》進行涂片鏡檢。

1.2.3 觀察指標 觀察兩組患者的結核陽性檢出率，并對TBTB-IGRA與涂片鏡檢2種檢測方法的敏感性、特異性、陽性預測值、陰性預測值進行比較。

1.3 統計學處理 應用SPSS23.0統計軟件進行數據分析；計數資料以率表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者TB-IGRA的結核陽性檢出率比較 結核病組結核陽性檢出率顯著高于疑似結核及非結核組（χ2=56.3，P＜0.01）；結核病組中，肺結核和肺外結核的檢出率比較，差異無統計學意義（χ2=0.1，P＞0.05），見表 1。

表1 兩組患者TB-IGRA的結核陽性檢出率比較

2.2 TB-IGRA與涂片鏡檢結果比較 TB-IGRA對結核病診斷的敏感性明顯優于涂片鏡檢，但特異性低于涂片鏡檢，差異均有統計學意義（P＜0.01）。見表2。

表2 TB-IGRA與涂片鏡檢結果比較[%（n/n）]

3 討 論

目前，結核病仍是全球一個棘手的重大公共衛生問題，是一種傳染性強、致病性高的慢性傳染病[8]。在結核病預防和控制體系中，診斷一直是困擾結核病防治工作的難題。傳統細菌學方法（如涂片和培養）陽性檢出率低，結果報告時間長，難以滿足臨床及時治療的需求。一直以來，人們不斷研究和探索更敏感、快速、簡便的檢測方法，已取得積極的成果。免疫學方法由于有較好的敏感性和特異性，且無須昂貴儀器、簡便、價廉，易于在基層實驗室推廣使用，至今仍是熱點研究方向。

全血TB-IGRA以T細胞為基礎，是近年來新研制的一種結核病免疫診斷方法，其以特異性抗原[早期分泌抗原靶-6（ESAT-6）和培養分泌蛋白-10（CFP-10）]刺激T細胞，而這2種抗原僅存在于有致病性的結核分枝桿菌中，在接種卡介苗和非結核分枝桿菌中則沒有表現，且這2種抗原均具有很好的免疫原性，機體T細胞若接觸過結核菌抗原，則可誘導致敏的T細胞活化分泌高水平的干擾素γ（INF-γ），從而判斷機體感染結核菌的情況[9]。但ESAT-6和CFP-10也同時存在于諸如堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、轉黃分枝桿菌和胃分枝桿菌等少數幾種非結核分枝桿菌中。因此，IGRAs陽性并不能排除上述分枝桿菌感染的可能性[10]。

目前，隨著對TB-IGRA應用經驗的增加，其已被發達國家廣泛接受和應用[6，11]，我國衛生部也將結核感染T細胞檢測納入《醫療機構臨床檢驗項目目錄》。因此，本文對運城市中心醫院通過新技術申報引進該技術，收集引用該技術1年后的TB-IGRA檢測結果進行分析，探討其對運城地區結核病診斷的應用價值。

本研究結果顯示，TB-IGRA在運城地區結核病診斷中具有較高的陽性檢出率（94.1%），且對肺結核和肺外結核的檢出率均較高（分別為93.3%和95.2%），這與蔣英等[12]的研究結果一致，證實了TB-IGRA的潛在應用價值。在對疑似結核及非結核病例的檢測中，TB-IGRA仍有21.8%的陽性檢出率。高坎坎等[13]研究結果也提示，TB-IGRA在非結核病組的檢出率為23.08%，與本研究結果一致。分析原因可能有：（1）TB-IGRA可能存在一定的交叉反應；（2）尚不排除存在潛伏感染的可能，TB-IGRA不能區分結核潛伏感染者及結核病患者。與傳統涂片相比，TB-IGRA檢測陽性率明顯提高，特異性略低。因TB-IGRA有一定的局限性，其檢測結果易受機體免疫狀態的影響，免疫力低下者（如HIV感染者、兒童和老年患者）易導致假陰性結果。

綜上所述，TB-IGRA具有早期診斷、較高的敏感性及全血標本易獲得等優點，而其作為一種結核病診斷的篩選試驗和輔助診斷手段，通過本研究證明該技術在運城地區結核病的診斷應用中具有較高的價值。但在臨床應用中，還需要結合患者的臨床表現及其他輔助診斷方法，以提高結核病診斷的陽性率。

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