翻白草油對肝癌HepG2細胞遷移和侵襲能力的影響

李天柱，崔鳳姬，王文濤，李宏，由豐銘，于淼，董雪琦，翟云鵬，王敏

（1．赤峰學院 醫學院；2．赤峰生殖健康專科醫院，內蒙古 赤峰 024000）

肝癌是惡性程度和復發率高、易轉移的腫瘤之一[1].傳統的外科手術、化療或放療等治療手段都有局限性，生存率仍無改善.近年來，盡管在肝癌的診斷和治療上有較大的進展，但對于肝癌細胞的增殖和侵襲機制仍未闡明，術后的復發轉移是影響治療效果的重要因素之一[2].因此，肝癌細胞增殖和侵襲轉移的研究有重要的理論意義和應用價值.

翻白草是一種薔薇科植物，在我國傳統醫藥典籍和其他國家的民間都被廣泛地應用.好多人對翻白草的化學成分、毒理和病理等生理等基礎研究和對翻白草的藥用、食用和生產化工原料等的應用研究付出了努力[3].

2011年，李忠秀等人分別研究發現翻白草油具有抑制人肝癌細胞HepG2的增殖，促進肝癌細胞凋亡的功能，可能是一種新型的抗腫瘤藥物[4].但未見關于翻白草油對于肝癌細胞轉移及侵襲能力的報道.通過本研究闡明翻白草油對肝癌細胞的轉移及侵襲有影響，為肝癌的治療方案尋求新的理論依據.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細胞：人肝癌細胞HepG2（中科院上海細胞庫）.

1.1.2 實驗試劑：DMEM細胞培養基和胎牛血清（Gibco公司）；TranswellTM 小室（Becton Dickinson Labware公司）.

1.2 方法

1.2.1 細胞培養：將HepG2細胞用含10%胎牛血清DMEM培養基，置于37℃、5%CO2、飽和濕度.

1.2.2 藥物配制：用DMEM培養液將翻白草油（DMSO溶解）稀釋成濃度10mg/mL儲備液，4℃保存備用.

1.2.3 實驗分組：翻白草油組（用DMSO稀釋后，以DMEM培養液稀釋成0.5mg/mL），另設對照組（僅加DMEM培養液）.

1.2.4 細胞劃痕實驗檢測各組細胞的遷移能力：先把細胞重懸，各組細胞接種于24孔板，然后將細胞鋪滿后利用小槍頭在24孔板中央畫一條線，加入0.5mg/mL翻白草油，0h和48h觀察并拍照，利用Image J測細胞遷移的距離，各取隨機的5組計數.重復3次實驗.

1.2.5 Transwell小室實驗檢測各組細胞的侵襲能力：先把細胞重懸，上室加1×105細胞，然后在下室加DMEM完全培養液，48h后棄掉上下室的培養基，利用棉簽擦拭上室的細胞.利用10%甲醛把細胞固定,用蘇木精染色,用刀片將把小室膜切下，利用倒置顯微鏡分別計數5個視野穿模的細胞平均數.重復3次實驗.

1.3 統計學分析

數據利用Sigma Plot 2000軟件進行分析，數值采用均數±標準差（±s）表示，利用t檢驗檢測顯著性分析.

2 結果

2.1 翻白草油抑制人肝癌細胞HepG2的遷移能力

翻白草油組細胞劃痕48h后遷移距離為（39±4.2）μm，對照組（221±6.8）μm.翻白草油組細胞遷移距離明顯比對照組短(P＜0.05)（圖1）.

圖1 劃痕實驗48h后各組細胞的遷移情況(×100)

2.2 翻白草油抑制人肝癌細胞HepG2的侵襲能力

翻白草油組細胞侵襲48h后穿透小孔板的細胞數為（11±1）個，對照組（60±5）個.翻白草油組穿過小孔的細胞數明顯比對照組少(P＜0.05)（圖2）.

圖2 Transwell侵襲實驗各組細胞48h穿過小室的細胞數(×200)

3 討論

肝癌是中國癌癥患者死亡的原因之一，高度的血管浸潤以及侵襲轉移導致了預后不良的現象.目前,對抗腫癌藥物研究從細胞毒型藥物向癌癥治病基因的拮抗劑的發展.因為中草藥的毒副作用較小,所以從中藥中尋找抗癌天然化合物引起了國內外諸多學者的高度重視.翻白草性味苦,平，功能主治祛風濕、解毒、痢疾和風濕筋骨疼痛等疾病[5].

研究表明翻白草油可抑制人肝癌細系HepG2的細胞增殖，促進肝癌細胞凋亡的功能[4].但目前，未見關于翻白草油對于肝癌細胞轉移及侵襲能力的報道.肝癌患者的主要死亡原因是肝癌細胞的增殖和侵襲轉移，也是導致治療預后不良，易復發的原因.

通過本研究發現翻白草油能明顯抑制HepG2細胞的遷移和侵襲.說明翻白草油對調控肝癌細胞的增殖和侵襲起著重要的作用.從而推測翻白草對肝癌細胞的轉移及侵襲有影響，為肝癌的治療提供新的理論依據.

〔1〕Hernandez-Gea V，Toffanin S，Friedman SL，et al．Role ofthe microenvironmentin the pathogenesis and treatment ofhepatocellular carcinoma[J]．Gastroenterology，2013，144：512-527．

〔2〕Zhang L，Yang J，Chen XQ，et al．Antidiabetic and antioxidant effects of extracts from Potentilla discolor Bunge on diabetic rats induced by high fat diet and streptozotocin [J]．J Ethnopharmacol，2010，132：518-524．

〔3〕Subbotina MD，Timchenko VN，Vorobyov MM，et al．Effect of oral administration of tormentil root extract (Potentilla tormentilla)on rotavirus diarrhea in children：arandomized,double blind,controlled trial[J]．Pediatr Infect Dis J．2003，22：706-711．

〔4〕李忠秀，王淑秋，劉蕾，等．翻白草油對肝癌HepG2細胞CDK4蛋白的影響[J]．黑龍江醫藥科學，2011（34）：25-26．

〔5〕Yoon WJ，Moon JY，Kang JY，et al．Neolitsea sericea essential oil attenuates LPS-induced inflammationinRAW 264．7macrophagesby suppressing NF-kappaB and MAPK activation[J]．Nat Prod Commun．2010,5(8)：1311-1316．