腸上皮Syndecan—1對艱難梭菌所致腹瀉患者的腸黏膜屏障保護作用分析

顏娟+曾志偉+謝曉云

【摘要】 目的 研究分析腸上皮Syndecan-1對027型艱難梭菌（CD）所致腹瀉患者的腸黏膜屏障保護作用。方法 60例CD所致腹瀉患者的血液、糞便、尿液及組織標本， 使用肝素（10 kU/L）、Syndecan-1 siRNA、Hanks平衡鹽溶液（HBSS）（400 mg/L）以及V-Syndecan-1進行處理。比較處理前后Syndecan-1水平、熒光黃透過率及炎癥因子分泌水平。結果 處理后， 患者Syndecan-1水平為（0.938±0.041）μg/L， 高于處理前的（0.351±0.022）μg/L， 差異具有統計學意義（P<0.05）。與處理前比較， 處理后患者熒光黃透過率降低， IL-6水平降低， IL-10水平增高， 差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 腸上皮Syndecan-1水平越高對027型CD腹瀉患者腸黏膜屏障的保護作用更明顯。

【關鍵詞】 腸上皮Syndecan-1；艱難梭菌；腸黏膜屏障損傷

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.05.019

艱難梭菌屬于一種革蘭染色陽性產芽孢厭氧桿菌， 臨床上又被稱為難辨梭狀芽孢桿菌， 通常在人體的腸道中寄生， 是臨床上醫院獲得性感染性腹瀉常見的疾病誘導獨立危險因素， 一旦產生很容易引起傳染性腹瀉疾病的爆發， 提升相關疾病的復發率、死亡率[1]。Syndecan-1屬于一種硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPG）分子， 在患者的上皮細胞表面進行表達， 可對患者細菌易位、腸上皮屏障破壞（主要由細菌毒素所引起）進行有效抑制[2]。在2014年， 我國大陸的南方醫院首次在腹瀉患者的糞便標本中， 將具有高產毒性CD菌株進行分離， 本研究便是對Syndecan-1、類似物對CD感染所引起的腸黏膜屏障損傷的作用、影響機制進行探討。現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集2015～2017年廣州市白云區人民醫院住院、門診以及部分社區60例CD所致腹瀉患者的腹瀉糞便（布里斯托分類 5～7 級）標本進行CD菌及毒素分析。患者中男36例， 女24例；年齡20～65歲， 平均年齡（42.56±7.54）歲。

臨床癥狀：所有患有均出現不同程度的嘔吐、腹痛、腹瀉以及發熱等癥狀。納入標準：①所有腹瀉患者均為年齡≥18歲的患者；②具有化療、抗生素治療史且<60 d；③住院后48 h內出現腹瀉， 且患者腹瀉次數≥3 次/24 h， 大便形態為不成型。排除標準：①年齡<18歲患者；②有樣本采集經歷；③為慢性腹瀉患者；④使用過瀉藥的患者；⑤有腸道功能性疾病患者。

1. 2 方法 取患者的血液、糞便、尿液及組織標本， 使用肝素（10 kU/L）、Syndecan-1 siRNA、HBSS（400 mg/L）以及V-Syndecan-1進行處理。并對如下指標進行檢測：①Syndecan-1表達水平檢測：使用蛋白質印跡法（western blot）、熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）進行檢測， 經處理后觀察Syndecan-1表達水平。②上皮屏障通透性檢測：熒光黃是腸屏障通透性標記物， 能夠通過細胞旁轉運， 將終濃度為100 μg/ml熒光黃的HBSS 100 μl加在Transwell上， 在溫度為37℃的情況下進行4 h育卵， 并進行下層液體收集， 使用熒光分光光度計進行吸光度測定， 并計算熒光黃濃度。熒光黃透過率（%）=下層熒光黃濃度/加入上層熒光黃濃度（100%）。③炎癥因子分泌：酶聯免疫吸附實驗（ELISA）法檢測細胞培養上清中IL-6及IL-10水平。

1. 3 觀察指標 觀察Syndecan-1水平改變前后熒光黃濃度變化及炎癥因子分泌水平變化。

1. 4 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件對研究數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 患者處理前后Syndecan-1水平比較 處理后， 患者Syndecan-1水平為（0.938±0.041）μg/L， 高于處理前的（0.351± 0.022）μg/L， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 患者處理前后熒光黃透過率及炎癥因子分泌水平比較

與處理前比較， 處理后患者熒光黃透過率降低， IL-6水平降低， IL-10水平增高， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

CD主要分成非產毒株、產毒株兩種， 產毒株是以A與B兩種毒素的產生而導致CD相關性疾病的發生， 而非產毒株則是在患者的腸道內利用競爭性定植在一定程度上抑制產毒株。CD高毒株亞BI/NAP1/027型菌株所引起的疾病具有細菌耐藥性強、高復發率、高死亡率的特點， 是醫院內部感染性疾病傳播的主要病原菌， 可在短時間內引起大面積流行疾病的爆發， 并能夠使患者的疾病復發率與病死率不斷升高， 最終產生重大的人力、物力以及財產損失， 其造成的重要影響已經得到了世界各國的廣泛關注和重視[3]。

在人體正常的生理情況下， 人體機制可利用微生物屏障、腸黏膜上皮屏障以及免疫屏障等對抗毒素。病原菌進行腸道以外的器官及組織的入侵進行阻止， 而腸黏膜上皮屏障屬于一種物理結構的解剖屏障， 封閉細胞的緊密連接、腸上皮細胞的完整性是腸黏膜上皮屏障的主要依賴；Syndecan-1屬于一種HSPG， 在人體通常的生理條件下， 可在其上皮細胞膜處進行表達， 并粘附分子、生長因子、胞外基質成分、細胞因子以及細菌抗原等一系列配子相結合， 同時也會對促進組織修復、調節免疫功能以及維持細胞形態等具體生理病理過程進行參與， 并對作用于腸道的致炎因素進行阻止[4]。研究發現， Syndecan-1升高后， 患者腸道通透性下降， 并且炎癥因子IL-6水平下降而IL-10水平升高。腸道通透性降低， 有助于阻礙黏膜固有層炎癥因子的激活， IL-6水平降低使腸道炎癥得到緩解， 而IL-10水平的升高則對炎癥反應起到保護作用， 提升抗炎效果。

綜上所述， Syndecan-1水平變化對腸道炎癥具有較大影響作用， 能夠提升腸黏膜屏障的保護作用， 減少炎癥發生。但是， 對該治療的具體實施機制目前臨床上并不十分明確， 且通過Syndecan-1對CD高毒株所造成的腸黏膜屏障損傷作用并未發現有相關報道的出現。

參考文獻

[1] Kuehne SA， Cartman ST， Heap JT， et al. The role of toxin A and toxin B in Clostridium difficile infection. Nature， 2010， 467（7316）： 711-713.

[2] Bauer MP， Notermans DW， van Benthem BH， et al. Clostridium difficile infection in Europe： a hospital-based survey. Lancet， 2011， 377（9759）：63-73.

[3] Patterson AM， Delday MI， van Kuppevelt TH， et al. Expression of heparan sulfate proteoglycans in murine models of experimental colitis. Inflamm Bowel Dis， 2012， 18（6）：1112-1126.

[4] Wang XF， Li AM， Li J， et al. Low molecular weight heparin relieves experimental colitis in mice by downregulating IL-1β and inhibitingsyndecan-1 shedding in the intestinal mucosa. PLoS One， 2013， 8（7）：e66397.

[收稿日期：2017-10-23]endprint