生殖道支原體感染與IVF臨床結局的相關性分析

王振榮，李宜學，郭劍，吳劍華

（河北省唐山市婦幼保健院1.檢驗科，2.生殖中心，河北 唐山 063000）

支原體是在人類泌尿生殖系統感染中最為常見的微生物，尤其在接受體外受精-胚胎移植（in vitrofertilization and embryo transfer，IVF-ET）治療的不孕患者中支原體感染占有較大的比重，很多學者研究認為，生殖系統支原體感染與不孕癥關系密不可分。患者發病時，支原體主要黏附在泌尿生殖道表面黏膜，損害表層細胞，引發女性尿道炎，進而宮頸炎。如果炎癥沒有得到控制，上行感染時，會引起輸卵管炎及子宮內膜炎等，亦可造成生殖道免疫屏障損傷，引起局部或全身的免疫反應，產生抗精子抗體（antisperm antibody，ASA）或導致細胞因子等發生變化，進而導致不孕[1]。近年來，關于接受IVF-ET治療的患者進入周期前，是否需要常規進行分泌物支原體檢測及陽性結果是否會對臨床結局造成負面影響等問題，國內外學者做的研究并不多，且結果不一致。孟艷等[2]報道，助孕治療前女性支原體陰性者臨床妊娠率較陽性者稍高，但差異無統計學意義，即宮腔內支原體感染并不影響IVF-ET的臨床結果。而WITTRMER等[3]持相反觀點，認為不孕癥女性支原體檢測陽性時，即使經過合理的抗生素治療，也會影響胚胎種植率，因此建議取消IVF周期。關于男性支原體感染，范宇平等[4]認為，男方生殖道支原體培養陽性對IVF的正常受精率、異常受精率、正常卵裂率、臨床妊娠率及流產率均沒有明顯影響。而有學者認為不孕癥男性患者精液中支原體陽性可影響IVF結局，建議常規篩查及治療。故本研究就本地區情況展開研究，報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

對2012年5月-2015年4月唐山市婦幼保健院生殖中心接受IVF-ET治療的1 237例患者進行分泌物支原體檢查，根據培養結局分成雙方陰性（A組，n=966）、僅女方陽性（B組，n=145）和僅男方陽性（C組，n=126）3組。

1.2 標本處理

無菌棉拭子采集，送檢。收到標本后，1 h內接種（血平板、中國藍平板、淋球菌培養平板），5%～10%二氧化碳CO2的培養箱中36℃培養18～24 h，根據陽性菌初期鑒定，由PhoenixTM100全自動鑒定藥敏分析儀進一步鑒定。

1.3 研究方法

1.3.1 控制性促排卵 根據患者個體差異選擇采用長方案/短方案進行促排卵，當有2個卵泡直徑在20 mm以上時，當晚上臂皮下注射艾澤250μg，36～38 h后取卵。

1.3.2 精液準備、受精 取卵日男方用肥皂清洗雙手和陰莖，手淫取精于一次性無菌杯中，采用密度梯度離心加上游法處理。IVF患者所得卵母細胞培養2～4 h加精；單精子顯微注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）患者卵母細胞培養4 h，行ICSI操作。

1.3.3 胚胎發育與評級 使用Vitrolife培養液進行體外培養。加精后17～18 h拆蛋觀察，記錄受精情況。D3進行卵裂期胚胎評級，評級根據Veeck胚胎評分標準進行，1～2級且卵裂球數目7～8個為優質胚胎[5]。

1.3.4 移植與移植后處理 第3天行胚胎移植，移植數目為2個，剩余胚胎換液繼續培養，第5天有囊胚形成則玻璃化冷凍保存。移植后給予黃體酮等黃體支持，移植后第14天檢測血人絨毛膜促性腺激素（Humanchorionicgonadotropin，hCG），確定生化妊娠與否。移植后第35天，進行B超聲檢查，確定是否臨床妊娠。

1.4 統計學方法

應用WHONET軟件處理培養結果。應用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析，計量資料采用均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組患者一般情況比較

A、B兩組不孕患者中，年齡、不孕年限、基礎卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、子宮內膜厚度、Gn天數、Gn量、取卵數以及成熟卵子（MⅡ期卵細胞）數目差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

A、C兩組不孕患者中，年齡、不孕年限、基礎FSH、子宮內膜厚度、Gn天數、Gn量、取卵數以及成熟卵子數目差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.2 3組患者臨床結局比較

從統計結果可以看出，A、B兩組的正常受精率、異常受精率、卵裂率、卵裂期優質胚胎率、臨床妊娠率、種植率、宮外孕率、流產率、早產率、低體重兒出生率等差異均無統計學意義（P＞0.05）；移植后可利用胚胎進行囊胚培養，結果顯示囊胚形成率、優質囊胚率以及冷凍率差異均無統計學意義異（P＞0.05）。見表2。

如表3所示，另從統計結果可以看出，A、C兩組的正常受精率、異常受精率、卵裂率、卵裂期優

質胚胎率、臨床妊娠率、種植率、宮外孕率、流產率、早產率、低體重兒出生率等差異均無統計學意義（P＞0.05）；移植后可利用胚胎進行囊胚培養，結果顯示囊胚形成率、優質囊胚率以及冷凍率差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表1 A、B兩組患者基礎臨床資料 （±s）

表1 A、B兩組患者基礎臨床資料 （±s）

MⅡ期卵數/個A 組（n=966） 30.6±3.92 31.9±4.22 4.9±3.24 10.13±2.04 6.35±2.04 11.29±1.89 32.75±9.57 12.45±4.39 10.62±3.94 B 組（n=145） 31.2±4.23 32.6±4.59 4.7±3.65 9.77±2.25 6.53±1.85 11.45±1.76 31.55±9.21 13.15±4.18 11.13±3.85 t值 1.701 1.841 -0.681 1.954 1.002 0.959 -1.415 1.8 1.458 P值 0.089 0.066 0.496 0.051 0.316 0.338 0.157 0.072 0.145組別 女方年齡/歲 男方年齡/歲 不孕時間/年 子宮內膜厚度/mm （pmol/L） Gn天數/d Gn用量/支 獲卵數/個基礎FSH/

表2 A、C兩組患者基礎臨床資料 （±s）

表2 A、C兩組患者基礎臨床資料 （±s）

MⅡ期卵數/個A 組（n=966） 30.6±3.92 31.9±4.22 4.9±3.24 10.13±2.04 6.35±2.04 11.29±1.89 32.75±9.57 12.45±4.39 10.62±3.94 C 組（n=126） 30.5±3.81 31.3±4.35 4.5±3.36 10.01±2.38 6.61±1.91 10.98±1.55 32.89±8.78 12.85±4.57 10.88±4.15 t值 -0.27 -1.496 -1.298 -0.609 1.355 -1.765 0.156 0.957 0.692 P值 0.787 0.135 0.195 0.543 0.176 0.079 0.876 0.339 0.489組別 女方年齡/歲男方年齡/歲不孕時間/年子宮內膜厚度/mm （pmol/L） Gn天數/d Gn用量/支 獲卵數/個基礎FSH/

表3 A、B兩組實驗室數據的比較 %

表4 A、C兩組實驗室數據的比較 %

3 討論

嚴格來講支原體是一種原核微生物，處于細菌和病毒之間，它感染人體時不侵入血液和組織，只是寄居在泌尿生殖道或呼吸道上皮細胞表面的受體上，從宿主細胞吸收營養，釋放有毒代謝產物，造成寄居細胞受損，進而組織損傷。引起生殖道感染的支原體最常見是人型支原體（mycoplasma hominis，Mh）及解脲脲原體（ureaplasma urealyticum，Uu），在社會可生育人群中，生殖道支原體感染患者占15%～21%，而在女性不孕癥患者中支原體感染明顯增高，Uu為50%～80%，Mg為17%～19.6%，Mh為19.2%，男性不孕患者的支原體檢出率中，Mg為0.9%，Uu為5%～42%，Mh為23.8%[6]。

女性支原體感染與輸卵管性不孕密切相關[7]，可導致輸卵管炎癥和瘢痕形成，影響輸卵管蠕動功能和通暢性，造成不孕。支原體也會引起男性不育，多數結果[8]顯示支原體感染從各種途徑對精子、精漿造成不良后果，感染對有些精液參數沒有影響，比如精液量、活率以及形態。而對精子活動力影響極大，支原體吸附在精子表面，會導致精子的活力降低、運動速度減慢和甚至會改變精子的運動方式，使VCL、VAP、VSL明顯降低，相反BCF會明顯升高；支原體可引起精子頂體膜受損，影響精子形態，使頂體酶遭受破壞從而引起男性不育[9]。也有報導支原體感染會影響精液液化時間，使精液液化異常率增高。也有研究認為，支原體感染與男性生育力之間不存在必然的聯系，在排除其他影響因素的前提下，陽性患者與陰性者的精子參數差異沒有統計學意義。

在本研究中，可以排除不孕患者本身因素對IVF臨床妊娠結局的影響，因為3組患者的平均年齡、基礎FSH和內膜厚度差異也均無統計學意義。從數據結果分析可以看出，女方有支原體感染和無感染者之間的正常受精率、異常受精率、卵裂率、卵裂期優質胚胎率、種植率、囊胚形成率、優質囊胚率及冷凍率差異均無統計學意義；男方有支原體感染和無感染者之間的正常受精率、異常受精率、卵裂率、卵裂期優質胚胎率、種植率、囊胚形成率、優質囊胚率及冷凍率差異也均無統計學意義。可以得出結論，不論女方還是男方生殖道支原體感染，對卵子受精及胚胎早期發育都沒有明顯影響。統計臨床妊娠率、流產率、早產率及低體重兒出生率，女方支原體感染組與支原體檢測陰性組之間差異無統計學意義，男方支原體感染與無感染兩組之間差異也沒有統計學意義。表明不論生殖道支原體感染女方還是男方，對臨床妊娠結局及妊娠后期均沒有明顯影響。本研究認為，支原體感染組和無支原體感染組之間流產率差異無統計學意義，說明接受IVF治療后發生流產與支原體生殖道感染無直接關系。

分析本研究結果出現的原因，可能有以下幾點：①IVF過程中，精液會經過密度梯度離心再加2次洗滌處理，去除了活動力差（可能是吸附了支原體而活力受影響）的精子，并且剔除了其中的大部分雜質（可能含有支原體或其有毒產物），降低了支原體感染的機會；實驗人員選卵、授精、換液、移植等一系列操作中，移動卵子或胚胎時都注意盡量少帶原環境中的液體，減少了攜帶性感染的可能性。②配子和受精卵不用經過輸卵管的運輸，輸卵管感染對胚胎的影響大大降低。③IVF過程中，配子結合和早期胚胎發育均在體外完成，避免了感染引發的免疫應答對配子和胚胎的影響。④IVF臨床妊娠結局受很多復雜因素的影響，這些可能會對本實驗最終結果產生或多或少的影響。

綜上所述，從本實驗數據看，支原體陽性對IVFET的臨床結局無明顯影響，但具體實驗數據上仍顯示有一定影響的可能性。總之，支原體陽性至少不是IVF的禁忌證，進一步說，在患者無主觀癥狀的情況下，支原體檢查不是必須的，更不必在IVF術前投入大量抗生素治療。由于本研究樣本數量的局限，此結果僅作為參考，上面推測分析的原因有待進一步大量研究數據的積累和論證。

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