Numb蛋白在乳腺癌組織的表達及其臨床病理相關(guān)性分析

范小慶+陶姍姍+熊秋云+雷秋模

【摘要】 目的：Numb蛋白在乳腺癌中有不同程度的表達缺失，本研究旨在探討乳腺癌組織Numb蛋白的表達，及其與表皮生長因子受體2（HER-2）、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）表達的關(guān)系。方法：收集2015年8月-2017年3月江西省南昌市第三醫(yī)院收治的200例乳腺癌患者的臨床病理資料，同時應用免疫組織化學Elivison方法檢測200例乳腺癌組織的Numb、HER-2、ER和PR的表達。結(jié)果：Numb蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達率51.0%（102/200），淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者Numb表達高于淋巴無轉(zhuǎn)移者（ 字2=6.72，P=0.02），HER-2陽性者Numb表達低于HER2陰性者（ 字2=7.00，P=0.02），ER陽性者Numb表達高于ER陰性者（ 字2=13.55，P=0.00）。Luminal型Numb陽性表達率顯著高于HER-2過表達型和三陰型（ 字2=7.26，P=0.01），HER-2過表達型和三陰型Numb陽性表達率比較差異無統(tǒng)計學意義（ 字2=0.76，P=0.12）。Numb表達在不同年齡、腫瘤大小、組織學分級及PR狀態(tài)間差異均無統(tǒng)計學意義（ 字2=0.13，P=0.72； 字2=0.55，P=0.46； 字2=0.46，P=0.59； 字2=0.06，P=0.80）。結(jié)論：Numb蛋白在乳腺癌中有較高表達，其表達與HER-2、ER和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，Numb能否成為乳腺癌新的治療靶點或預測因子有待進一步研究。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌； ER； Numb蛋白； HER-2

【Abstract】 Objective：The expression of Numb protein in breast carcinomas had different degrees of expression，to explore the expression of Numb protein in breast carcinomas and examine the correlation between its expression and expression of human epidermal growth factor receptor-2（HER-2），estrogen receptor（ER），ogesterone receptor（PR）.Method：The clinicopathological data of 200 breast cancer patients admitted in the Third Hospital of Nanchang from August 2015 to March 2017 were collected and analyzed.Immunohistochemical method was used to detect the expression of HER-2，ER，PR and Numb protein.Result：The rate of Numb protein expression was 51.0%（102/200），the expressions of Numb in ER positive patients were significantly higher than those of ER negative patients，and this trend extended to HER-2 negative and no node metastasis patients（ 字2=13.55，P=0.00； 字2=7.00，P=0.02； 字2=6.72，P=0.02）. The expressions of Numb protein in Luminal subtype was signifycantly higher than in HER-2 over-expression subtype and basal like subtype （ 字2=7.26，P=0.01），but there was no significant difference between HER-2 over-expression subtype and basal like subtype（ 字2=0.76，P=0.12）.No correlations existed between the expression of Numb protein and age，tumor size，histologic grade or PR of breast cancer patients（ 字2=0.13，P=0.72； 字2=0.55，P=0.46； 字2=0.46，P=0.59； 字2=0.06，P=0.80）.Conclusion：Numb protein is highly expressed in breast cancer，and its expression is related to lymph node status，HER-2 and ER，and node metastasis.However，Numb can be a new therapeutic target or predictor for breast cancer remains to be further studied.

【Key words】 Breast carcinoma； ER； Numb protein； Her-2

First-authors address：The Third Hospital of Nanchang，Nanchang 330009，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.23.007

近來發(fā)現(xiàn)Numb在人體成熟組織中廣泛分布，在調(diào)控細胞生長分化、穩(wěn)定細胞內(nèi)環(huán)境中發(fā)揮重要作用，在多種腫瘤細胞中均有不同程度的表達缺失。目前，人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）、雌激素受體（estrogen receptor，ER）及孕激素受體（progesterone，PR）的表達是指導乳腺癌治療和預后的重要生物學指標。Numb與乳腺癌組織HER-2、ER及PR也可能存在密切相關(guān)性，已逐漸成為一個新的研究熱點。為此，本研究檢測了200例乳腺癌中Numb蛋白、HER-2、ER及PR的表達，旨在研究Numb蛋白表達與臨床病理因素的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年8月-2017年3月在南昌市第三人民醫(yī)院手術(shù)治療的乳腺癌患者，入選標準：（1）女性；（2）可手術(shù)；（3）術(shù)后均經(jīng)常規(guī)石蠟切片病理檢查確診為乳腺浸潤性癌；（4）術(shù)前未接受過放療、化療和內(nèi)分泌治療。排除標準：（1）合并其他部位的惡性腫瘤；（2）妊娠或哺乳期乳腺癌患者。共獲得200例乳腺癌患者的臨床病理資料。年齡29～70歲，中位年齡49歲，年齡≤35歲23例（11.5%），>35歲177例（88.5%）。腫瘤≤2 cm者56例（28.0%），>2 cm者144例（72.0%）。腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者121例（60.5%），無轉(zhuǎn)移者79例（39.5%）。本研究得到醫(yī)院倫理委員會批準和患者的知情同意。

1.2 方法 采用免疫組化Elivison方法對所有乳腺癌患者的Numb、ER、PR及HER-2表達進行檢測，所有組織經(jīng)10%甲醛固定制作成4 um切片。免疫組化法嚴格按照說明書進行，PBS替代一抗作為陰性對照，乳腺癌組織作為陽性對照。主要試劑：Numb（NB500-178H）美國Epitomics公司，HER-2（ZM0065）、ER（ZA0120）、PR（ZA0255）、KI67（ZM-0186）及相關(guān)試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3 觀察指標與判定標準 觀察在乳腺浸潤性癌組織中Numb、ER、PR及HER-2表達的表達，分析Numb的表達與年齡、腫瘤大小、組織學分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系，以及與ER、PR和Her-2的表達的相關(guān)性。Numb蛋白陽性反應為棕黃色顆粒定位于細胞膜和細胞質(zhì)，采用SINICROPE改良法判斷陽性，即染色細胞計數(shù)所占比例至少包括5個400倍視野區(qū)域。每張切片計分=染色細胞數(shù)分數(shù)×染色強度分數(shù)，所得的分數(shù)<1分為陰性結(jié)果，1～3分為弱陽性（+），4～5分為中度陽性（++），>5分為強陽性（+++），以（++）和（+++）結(jié)果計算陽性表達率。HER-2陽性判斷標準：細胞膜棕黃染色為陽性。無細胞染色或<10%的細胞膜較弱染色為（-）；>10%的細胞膜部分較弱染色為（+）；>10%的細胞膜完全較弱到中等染色為（++）；>10%的細胞膜完全強染色為（+++）。對HER-2（++）者進一步進行FISH檢測。ER和PR陽性判斷標準：≥1%的細胞核棕黃染色則為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織中Numb蛋白的表達情況 Numb蛋白表達于細胞膜和細胞質(zhì)。Numb蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達率為51.0%（102/200），其中（+++）表達率為14.5%（29/200），（++）表達率為36.5%（73/200），（+）表達率為31.0%（62/200），（-）表達率為18.0%（36/200），見圖1。

2.2 Numb蛋白的表達與乳腺癌患者臨床病理學及分子特征的關(guān)系 淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者Numb陽性表達顯著低于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者（ 字2=6.72，P=0.02）。ER（+）者的Numb陽性表達顯著高于ER（-）者（ 字2=13.55，P=0.00）。HER-2（+）者的Numb陽性表達顯著低于HER-2（-）者（ 字2=7.00，P=0.02）。Numb陽性表達在年齡、腫瘤大小、組織學分級和PR組差異無統(tǒng)計學意義（ 字2=0.13，P=0.72； 字2=0.55，P=0.46； 字2=0.46，P=0.59； 字2=0.06，P=0.80），見表1。

2.3 Numb蛋白與乳腺癌不同分子亞型的關(guān)系 本研究結(jié)果顯示，Luminal型乳腺癌中，Numb陽性表達率顯著高于HER-2過表達型和三陰型乳腺癌（ 字2=7.26，P=0.01）。而HER-2過表達型和三陰型乳腺癌Numb陽性表達率比較，差異無統(tǒng)計學意義

（ 字2=0.76，P=0.12），見表2。

3 討論

Numb在多種腫瘤細胞，如胃癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、乳腺癌和卵巢癌中均有不同程度的表達缺失，其在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的角色成為新的研究熱點，Numb作為抑癌基因在腫瘤組織中表達減低[1-5]。如Numb蛋白可能具有抑制乳腺癌增殖的功能[6]，30%非小細胞肺癌及10%小細胞肺癌中觀察到Numb的缺失[7]，食管鱗癌中Numb低表達與腫瘤術(shù)后高復發(fā)率及不良預后顯著相關(guān)[8-9]。然而，在某些腫瘤中Numb也表現(xiàn)出癌基因的特征，如在肝癌中，Numb與肝癌早期復發(fā)及不良預后顯著相關(guān)。在前列腺癌中，Numb蛋白與腫瘤高侵襲性及激素治療不敏感密切相關(guān)[10-11]。可見Numb的作用機制非常復雜，在不同的腫瘤中的表現(xiàn)不一致。

近來研究報道，利用免疫組化技術(shù)檢測241例乳腺癌組織標本發(fā)現(xiàn)乳腺癌中Numb表達降低，并且降低程度與乳腺癌的侵襲性相關(guān)，提示Numb在乳腺中可能發(fā)揮抑癌因子作用[12-13]。本研究通過免疫組化的方法檢測了200例乳腺癌組織中Numb蛋白的表達，陽性表達率為51.0%，與文獻[14-15]報道結(jié)果相似。本研究分析Numb蛋白的表達與乳腺癌臨床特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移者Numb蛋白陽性表達高于淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者（P=0.02），Numb蛋白陽性表達與患者的年齡、腫瘤大小及組織學分級均無相關(guān)性（P=0.72、0.46、0.59）。Numb表達ER陽性者顯著高于ER陰性者（P=0.00）。由于ER陽性是乳腺癌預后較好的生物學指標，因此推測Numb高表達可能是反應ER陽性乳腺癌患者預后的良好的相關(guān)因素[16-17]。本研究結(jié)果顯示，Numb表達在HER-2陽性者顯著低于HER-2陰性者（P=0.02），間接提示Numb低表達的HER-2陽性乳腺癌患者可能預后較差。endprint

乳腺癌患者的分子分型包括導管型（Luminal型：ER+/PR+）、HER-2過表達型（ER-、PR-，HER-2+）、三陰型（TN型：ER-、PR-，HER-2-），

不同分子分型預后不同。本組研究中Luminal型129例（64.5%），HER-2過表達型35例（17.5%），三陰型36例（18.0%），其分子分型比例與國內(nèi)外文獻[18-19]報道相似，在不同的乳腺癌分子亞型中，Luminal型Numb表達與HER-2過表達型和三陰性型比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P=0.01）；三陰性型和HER-2過表達型組Numb表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（P=0.12）。表明Luminal型乳腺癌患者預后較好可能與Numb高表達相關(guān)。

本研究結(jié)果提示，Numb蛋白在乳腺癌組織中有較高的表達，Numb與乳腺癌組織中ER、PR、HER-2的表達和淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移之間有著密切關(guān)系，由此可推測，其在腫瘤侵襲性的預測以及評估腫瘤的轉(zhuǎn)移可能性方面具有一定的參考價值，但由于目前尚缺乏統(tǒng)一的Numb檢測和評估方案，Numb能否成為新的治療靶點或預測因子有待進一步研究。

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（收稿日期：2017-06-28） （本文編輯：程旭然）endprint