三種免核酸提取PCR試劑盒檢測乙肝患者血清HBV-DNA的臨床對比研究

高潔 嚴敏 付婷 邵中軍

近年來，我國乙型肝炎患者人數呈現逐年上升的趨勢，現代醫學已經證實，引發該病的主要原因是乙型肝炎病毒感染，血液傳播是其最主要的傳播途徑[1]。針對乙型肝炎病毒，如何能夠準確、迅速地作出診斷，及時治療尤為關鍵，血清中的乙型肝炎病毒是診斷乙型肝炎患者是否患病的最精準、最可靠的指標[2]。為了尋找最為科學、合理、有效的檢查手段，本研究選擇了3種免核酸提取PCR試劑盒對24例乙肝患者血清進行檢測，同時選擇24例陰性血清作對比，比較3種試劑盒在乙肝病毒檢測中的臨床應用效果。現作如下報告。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經患者本人及其家屬同意，選取乙肝防治示范區于2015年1月—2016年6月檢測出的24例乙型肝炎患者血清標本，24例患者包括14例男性和10例女性，年齡在24～51歲，平均年齡在（40.1±3.7）歲。以《病毒性肝炎防治方案》（2000年）為診斷標準，HBsAg、HBeAg檢測呈現陽性或抗HBe、抗HBc呈現陽性；另外要排除HAV、HCV、HDV、HEV感染病例。另外于我院體檢中心選擇24例陰性血清作為參比對照，包括14例男性和10例女性，年齡在21～49歲，平均年齡在（39.8±3.4）歲；經HBsAg檢測均為陰性。

1.2 主要試劑

3種免核酸提取PCR試劑盒分別購自A、B、C三家不同的公司；DL2000 DNA Marker（寶生物工程有限公司）；SYBGreenⅠ染料（廈門百維信）；乙肝病毒熒光定量試劑盒（上海科華生物科技公司）；引物由上海生工公司合成。

1.3 檢測方法

對24份乙肝患者血清及24份陰性血清，分別用3種免核酸提取PCR試劑盒單獨檢測。反應體系（25 μl）組成如下：引物0.75 μl，酶 0.5 μl，2×PCR Buffer 12.5 μl，待測血清 2 μl，使用RNase-free water 加至25 μl。反應條件如下：98℃ 2 min；98℃5 s，68℃ 30 s，35個循環。PCR產物用2%瓊脂糖凝膠電泳分析，實驗結果用凝膠成像系統掃描成像記錄。

1.4 統計學方法

2 結果

針對24例乙型肝炎患者血清檢測，結果發現，3種免核酸提取試劑盒中，購自C公司的MightyAmp試劑盒陽性檢出率最高，達到95.83%；3種試劑盒檢測下的陽性結果經RTPCR檢測，均為陽性。另外，檢測24例陰性參比血清，結果顯示均為陰性。3種試劑盒陽性檢出率相比差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

3 討論

目前，慢性乙型肝炎患者在我國乃至全世界占有很大比例，研究發現，大約有15%～40%的乙肝病毒攜帶者會出現一系列的并發癥，比如肝硬化、肝功能失常、腎衰竭等[3-4]。乙型肝炎的發生不僅嚴重危害患者自身的身體健康和生活質量，還會增加患者家庭經濟負擔以及家屬精神壓力。

當機體感染乙肝病毒時，外周血液乙肝病毒復制活動開始加劇，因此檢測血清中的乙肝病毒對于乙肝的診斷具有重要意義[5]。當前臨床應用的主要檢測方法是熒光定量PCR技術，這種診斷技術有其獨特的優勢，同時也存在一定的局限性[6]。熒光定量PCR方法的優點是靈敏度和特異度都比較高，但樣品前處理比較麻煩，需要進行核酸提取并純化，耗時較長，檢測費用較高[7]。

本研究選取3種免核酸提取PCR試劑盒，這樣就彌補了熒光定量PCR檢測方法的局限性，省略了核酸提取以及純化的步驟，采集患者血清后直接加入反應體系，按照試劑盒說明操作即可，簡化了操作程序，節約了檢測時間，相比于熒光定量PCR檢測方法更加方便快捷[8]。本試驗研究結果顯示，3種免核酸提取試劑盒中，購自C公司的MightyAmp試劑盒陽性檢出率最高，達到95.83%；3種試劑盒檢測下的陽性結果經RT-PCR檢測，均為陽性。另外，檢測24例陰性參比血清，結果顯示均為陰性。3種試劑盒陽性檢出率分別為87.50%（21/24），91.67%（22/24），95.83%（23/24），3種試劑盒，兩兩相比，陽性檢出率均差異無統計學意義（P＞0.05）。綜合分析本試驗，由于本次試驗的樣本量較少，為了使免核酸提取PCR試劑盒應用于乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒的臨床檢測分析這一方法更具有說服力及可信度，下一步本試驗欲將進一步加大試驗的樣本量。

表1 3種免核酸提取PCR試劑盒檢測乙型肝炎病毒結果[n（%）]

綜上所述，3種免核酸提取PCR試劑盒應用于乙型肝炎病毒的檢測，具有檢測方便快捷、特異性強、靈敏度高等優點，在乙型肝炎患者的臨床診斷中發揮重要作用。

[1] 宋文慧. 乙型肝炎五項標志物定量檢測的臨床分析[J]. 中華醫院感染學雜志，2012，22（6）：1216-1217.

[2] 付林平. 2種免疫檢驗方法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志物的臨床研究[J]. 中外醫療，2017，36（32）：21-23.

[3] 劉菊. 2種不同免疫檢驗方法檢測乙型肝炎病毒感染血清學標志物的臨床比較[J]. 中國衛生標準管理，2015，6（17）：156-157.

[4] 張小麗，王瑞玲，宋娜，等. 四種乙型肝炎病毒表面抗體試劑盒檢測人乙型肝炎病毒表面抗體效果比較[J]. 武警醫學，2014，25（12）：1209-1211.

[5] 王福，張敏，劉子珍，等. 683例體檢人員乙型肝炎病毒標志物檢測結果分析[J]. 繼續醫學教育，2013，27（9）：31-32.

[6] 劉明水. 乙型肝炎患者血漿IFN-γ、IL-10和IL-6水平及臨床意義[D]. 昆明：昆明醫科大學，2012：19.

[7] 宣萍. 乙型肝炎病毒前S1（PreS1）抗原檢測在乙型肝炎診斷中的臨床意義[J]. 中國衛生產業，2012，9（9）：101.

[8] 張海雁，劉方鶴，葛存興，等. 乙型肝炎病毒前S1抗原和HBV-DNA聯合檢測在乙型肝炎診療中的作用[J]. 齊齊哈爾醫學院學報，2015，36（23）：3458-3459.