微生物鑒定技術在藥品生產中運用研究

萬清峰

【摘要】文章通過闡述微生物鑒定技術的內涵特征，對微生物鑒定技術在藥品生產中運用及藥品生產中的微生物污染控制策略展開探討，旨在為研究如何促進藥品生產的安全有序開展提供必要思路。

【關鍵詞】微生物鑒定技術;藥品;生產

藥品微生物檢測結果受諸多因素影響，例如產品抗菌性及抑菌性、微生物分布不均勻等。所以，對于藥品生產而言，要想保證檢測結果的可靠性，務必要依據對應方法開展有效的方法驗證，依據驗證完畢的檢測方法對其開展微生物鑒定[1]。由此可見，對微生物鑒定技術在藥品生產中運用開展研究，有著十分重要的現實意義。

1 微生物鑒定技術

1.1 PCR技術

PCR是一項體外快速擴增特定DNA片段的技術。PCR技術自上世紀80年代被美國生物化學家穆里斯發明以來已經在醫療衛生、現代農業、食品加工等諸多行業領域得到廣泛推廣。該項技術的運行原理在于在體外將引物及目標DNA經由變性、退火、延伸等流程達成對目標DNA的快速、特異性擴增[2]。Taq DNA聚合酶的誕生很大程度上推動了PCR技術的發展進步。在實際工作中，PCR技術往往被應用于與核酸測序技術開展有效相融，以實現對微生物基因型的鑒定。16s rDNA可呈現微生物特有的進化信息，在微生物中呈現出廣泛的序列多態性以及保守性，其基因序列己然轉變成微生物鑒定的一項有力依據。現階段，由PCR技術衍生的各式各樣相關技術，諸如不對稱PCR技術、引物標記PCR技術、多重PCR技術等，己在微生物分型及檢測領域得到廣泛推廣。

1.2 基因芯片技術

基因芯片，亦可稱之為生物芯片、DNA芯片，其運行機制在于核酸經由與己知序列的、在基片表面固定標記過的核酸探針雜交，進而開展核苷酸測序的方法。該項技術是1998年自然科學領域的重要進展之一，現階段己在諸多行業領域得到廣泛推廣，諸如藥物篩選、微生物檢測、臨床診斷等。基因芯片具備較強的自動化、并行性以及微型化，可同時于一張芯片上開展不同微生物的快速檢測。基因芯片技術擁有良好的靈敏性、特異性，并且還可縮減化學試劑的使用量，屬于一項環境友好型的技術。作為一項快速、準確、大規模的微生物鑒定技術，基因芯片技術尚未廣泛轉化成商品化產品應用。基因芯片技術所需運用到的諸如寡核苷酸合成儀、掃描儀等設備成本昂貴，并且對基因芯片檢測結果評定現階段尚未有構建起全面統一的標準，樣品制備難度大也一定程度上制約了基因芯片技術的廣泛推廣。伴隨微生物鑒定技術的不斷發展成熟，微生物基因庫越來越豐富，基因芯片技術在藥品微生物鑒定領域勢必能夠得到越來越廣泛的推廣。

2 微生物鑒定技術在藥品生產中運用

藥品生產中安全問題是一項十分重要的問題，其主要涉及到質量、成分營養性及依賴性等方面的問題，本次研究側重于研究質量安全。近年來，不論是在國際還是在國內不斷發生有藥品安全問題，由此使得藥品安全越來越為醫學領域及生產領域所廣泛關注。需要注意的是，藥品中微生物的鑒定可視作藥品質量安全的一項重要權衡標準，也可將其作為鑒定的一項重要參考依據，所以要對藥品中各式各樣微生物開展高水平的鑒定，微生物相關鑒定技術在當前藥品生產中的運用，包括有：

2.1 PCR技術在藥品生產中運用

PCR技術依托體外多聚酶鏈反應合成特異性DNA片段，然后經由擴增產物，使DNA迅猛增長，數量可驟升至原本的百倍，再對熒光條帶進行檢測，進而實現對微生物種類的確定。PCR技術既具備較高靈敏度、較強的特異性以及快速檢測等特征，自理論層面而言，在檢測細菌過程中，運用PCR技術可檢測出一個細菌的拷貝基因，進一步在短暫時間內增菌或不增菌，在細菌檢測中極大水平縮減時間投入，可定量鑒定出大腸桿菌、沙門桿菌、肉毒桿菌等，極大水平擴大檢測范圍。同時，PCR技術還可鑒定出藥品中含有治療金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、李斯特桿菌等多種不同成分。舉例而言，相關研究人員在尚未開展富集化培養便引入免疫磁珠方法、熒光定量PCR技術開展有效相融，實現了對藥品的快速準確檢測，鑒定出藥品中含有治療李斯特菌、大腸埃希氏菌等成分：還有相關研究人員運用熒光定量PCR技術對實驗菌株展開檢測，發現藥品中大部分菌株呈陰性，且含有少部分溶血弧菌呈陽性[3]。值得一提的是，PCR技術同樣存在一些缺點，好比因為增菌培養基或其他相關微生物DNA會對水生棲熱菌產生一定抑制作用，進一步導致鑒定結果呈假陰性，對結果帶來不利影響。

2.2 基因芯片技術在藥品生產中運用

基因芯片技術是指利用微電子技術及微加工技術，將一大批基因寡核苷酸開展高密度、有序排列，并使其排列于硅片、纖維膜等載體上，進一步形成雜交信號對目的基因予以檢測。運用基因芯片技術對樣品DNA依托PCR技術擴增后制備的探針點樣于基因芯片表面，通過熒光標記的寡核苷酸點及芯片表面探針開展雜交，再選取掃描儀對芯片上呈現的熒光予以檢測分析，進一步鑒定出樣品DNA中含有相關特定微生物與否。基因芯片技術還可于寡核苷酸探針中加入一定探針，進而使檢測范圍得到有效擴大，并且經由加入及調節探針，使基因芯片檢測準確性得到顯著提升。自理論層面而言，運用基因芯片技術可于一次試驗中有限檢測出所有潛在的致病原，或于一張基因芯片中檢測出一種致病原的遺傳學指標，極大水平提高基因芯片技術的檢測速度、便捷性及靈敏度，彌補傳統檢測中操作復雜、效率低及自動化水平低等不足。

3 藥品生產中的微生物污染控制策略

新形勢下，藥品生產行業要緊緊跟隨社會前進腳步，加大改革創新力度，加強對國內外成功發展經驗的學習引入，切實開展好對藥品生產中的微生物污染控制工作。如何進一步促進藥品生產的安全有序開展可以將以下策略作為切入點：其一，開展好藥品生產原料控制。對買入的藥品生產原料開展嚴格驗收檢測，保證達標的原料投入生產。進廠的生產原料應當首先對包裝情況開展檢測，確保外包裝完好，各項標簽記錄完整，依據質量標準開展染菌情況檢測。同時，還應當開閘好物料儲存保管工作，運用達標的原材料，結合各種劑型實際要求，藥品生產前對原材料開展篩選、清洗、滅菌等處理。直接入藥的藥材在配料前鑒定微生物滿足標準與否，確保成品衛生學指標達標，對直接入藥含菌量高的中藥材依據其特性逐一開展滅菌處理。制劑包裝對確保制劑質量至關重要，應當提高重視，要滿足藥品監管部門相關規定，防止包裝材料在儲存、運輸等環節遭受污染，倘若包裝材料污染細菌不滿足標準，則應當開展滅菌處理方可投入使用。其二，確保生產用水質量。生產用水應當嚴格依據國家標準開展控制，例如控制好制粒過程中運用的粘合液，應當運用經高溫煮沸殺菌處理的純水，應當運用流動水對藥材進行洗滌，運用完畢的水不可再用于洗滌其他藥材。適時對生產用水質量進行檢測，加大對純化水防污染管理力度，保證儲藏、輸送純化水容器及管道材質的穩定性，應當運用可靠的不銹鋼材質，縮減管線死角，定期對輸送管道、容器進行消毒處理。最后，適時依據國家標準對純化水、自來水開展質量控制。其三，加大對環境與設備的有效管理。構建科學健全的管理制度，確保潔凈區個環境指標達標，并按照規定進行滅菌、使用、維護、保養等，并進行詳細記錄。藥品生產設備應當結合生產工藝要求及生產規模而定，只要與產品直接接觸的設備，便應當確保設備內表面光滑無死角。各個生產環節盡可能縮減微生物污染，應適時清洗、消毒。藥品生產前應當檢測容器、設備、輸送藥液潔凈與否或者是否需要消毒，否則不可開展新產品生產。

4 結束語

總而言之，在藥品生產中，對原料、生產場所、生產過程的微生物控制是確保藥品質量的重要前提，因而運用微生物鑒定技術高效、準確地獲取檢測結果，對現階段藥品微生物檢測工作而言至關重要。新形勢下，藥品生產行業相關人員應當加大研究力度，提高對微生物鑒定技術內涵特征的有效認識，推進對微生物鑒定技術的科學合理應用，“開展好藥品生產原料控制”、“確保生產用水質量”、“加大對環境與設備的有效管理”等，積極促進藥品生產的安全有序開展。

參考文獻

[1]池王胄，宋庭，周芳芳，孫黎，微生物鑒定技術在無菌藥品生產企業中的應用[J].中國醫藥導刊，2012，14 （01）：177-178， 180.

[2]鄭小玲，王知堅，李玨，王征南，洪利婭，多種測序技術在藥品檢測環境微生物鑒定分析中的應用研究[J].藥物分析雜志，2016，27 （01）： 46-52.

[3] HERBEL S R， LAUZAT B， VONNICKISCH-ROSENEGK M. et al.Species-specific quantification ofprobiotic lactobacilli in yoghurtby quantitative real-time PCR[J].JApplMicrobiol，2013， 115 （06）： 1402-1410。