血清胃泌素釋放肽前體31～98片段和神經元特異性烯醇化酶聯合檢測在小細胞肺癌診斷中的臨床價值

尚鵬超 ，謝慧波 ，徐繼業 ，尚勇 ，閆登峰 ，張曉展

(1、周口市中心醫院檢驗科，河南 周口 466000；2、羅氏診斷產品（上海）有限公司，上海 200131；3、周口市中心醫院腫瘤內科，河南 周口 466000；4、周口市中心醫院心胸外科，河南 周口 466000；5、周口市中心醫院呼吸內科，河南 周口 466000；6、鄭州大學第一附屬醫院檢驗科，河南 鄭州450000)

增殖早、惡性程度高的未分化型小細胞肺癌（SCLC）約占年新發肺癌20%左右；及時發現、診斷和治療是提高SCLC患者5年生存率的關鍵。本研究旨在探討評價胃泌素釋放肽前體 （ProGRP）31-98片段和神經元特異性烯醇化酶(NSE)作為小細胞肺癌（SCLC）診斷指標在SCLC診斷中的臨床價值。

1 對象與方法

1．1 對象 收集2014年6月-2016年5月間在周口市中心醫院呼吸內科、心胸外科、腫瘤內科首次就診并確診的SCLC患者49例，非小細胞肺癌患者172例 （上述病人穿刺病理活檢或內鏡組織病理活檢或手術后組織病理學確診）；良性肺病患者（臨床診斷上呼吸道感染患者）100例；健康者100例 （均來自周口市中心醫院同期體檢健康人群）。且排除以上人群無腎病（尿檢、血清肌酐、血清尿素氮、血清尿酸、B超檢查結果正常）、無其他原發腫瘤對ProGRP（31-98）檢測的干擾。

1．2 方法

1．2．1 標本采集 分離膠生化試管采集外周血5ml，1h內用 Roche cobas671前處理離心機 25（℃）下10min分離血清，去除脂血、溶血標本。

1．2．2 儀器與試劑 儀器采用 Roche cobas e602；血清ProGRP（31-98）和NSE體外診斷試劑盒、標準品、質控品均購自Roche公司。

1．2．3 ProGRP（31-98）和 NSE 檢測 在設備運行正常、通訊正常、室內質量控制在允許范圍的情況下，嚴格按照SOP操作規程檢測血清ProGRP（31-98）和NSE濃度。

1．3 統計學處理 IBM SPSS Statistics 19．0軟件對數據進行統計學分析，計量資料采用均數x表示，多組間比較應用方差分析，各組之間兩兩比較應用q檢驗，ROC曲線分析評價臨床應用價值，P＜0．05表示有統計學意義。

2 結果

2．1 兩組血清 ProGRP（31-98）、NSE 水平比較

表1 兩組血清ProGRP（31-98）、NSE中位數水平在（健康對照組、良性肺病組、NSCLC組、SCLC組）組間的比較

2．2 ProGRP（31-98）、NSE 以及 ProGRP（31-98）+NSE診斷SCLC比較 NSE診斷SCLC的ROC曲線下面積為 0．832，P=0．000，95%CI（0．754～0．911），以25ng/ml為臨界點起敏感度和特異度分別為67．1%和 88．3%。 ProGRP （31-98） 診斷 SCLC 的ROC 曲線下面積為 0．864，P=0．000，95%CI（0．794～0．934），以80pg/ml為臨界點起敏感度和特異度分別為 70．4%和 92．3%。 ProGRP（31-98）+NSE 聯合診斷 SCLC的 ROC曲線下面積為 0．926，P=0．000，95%CI （0．877～0．976），ProGRP （31-98）以80pg/ml為臨界點、NSE以25ng/ml為臨界點敏感度和特異度分別為87．1%和96．7%。

圖1 ProGRP（31-98）、NSE 以及ProGRP（31-98）+NSE 診斷SCLC的ROC曲線比較

3 討論

臨床診斷SCLC的主要方法有影像學、組織病理學、相關血清腫瘤標志物；由于SCLC發病以肺門部位居多以及微小未能成像等原因造成影像學不易發現，侵入性組織病理學檢查有諸多禁忌癥等原因，造成SCLC相關血清腫瘤標志物在診斷早期SCLC方面顯得尤為重要；常用相關標志物有NSE 和 ProGRP（31-98）。

糖分解烯醇酶(2-phospho-D-glycerate hydrolase．EC 4．2．4．11) 由 α、β 和 γ 三種亞單位組成，α亞單位見于哺乳動物多種類型組織中，β亞單位則主要見于心臟和肌肉組織。神經元特異烯醇化酶（NSE）為αγ和γγ異構體，高濃度存在于神經細胞和神經內分泌細胞以及這些細胞所引發的腫瘤細胞中[1]，血清NSE現在主要用于SCLC(70%升高)的鑒別診斷、病情監測、療效評價和復發預報。但由于NSE在紅細胞中大量存在，標本溶血（0．1%的溶血度就可導致結果假陽性[2]）、未及時分離血清（Roche要求1h內分離血清）都是導致NSE結果假性大幅升高而造成臨床誤判以至診斷SCLC特異度不高的原因；血漿標本不可用導致其使用受限。本實驗中1h內分離血清及除外溶血、脂血標本都盡可能避免了由此帶來的結果干擾。

胃泌素釋放肽（GRP）參與調節人體生理功能、病理狀態等，由迷走神經節后纖維釋放的一種胃腸激素，主要刺激胃的G細胞分泌胃泌素，參與平滑肌細胞的收縮、發揮存進細胞間的相互作用（上皮細胞增殖、轉移、擴散）；大量分布在哺乳動物的神經系統、胃腸道、呼吸道。SCLC存在高水平的GRP表達和分泌、正常肺部上皮低表達或不表達、良性肺病低表達以及上皮來源腫瘤中的低表達使其成為SCLC診斷的重要腫瘤標志物。由于GRP的半衰期只有2min，穩定性差，體外實驗難以檢測[3]，有報道人工合成GRP的基因編碼產物ProGRP（31-98）在血清中含量穩定，水平可代表GRP的水平以及GRP的基因表達，可臨床用于診斷SCLC的腫瘤標志物[4-7]。52．2%慢性腎功能衰竭患者血清ProGRP（31-98）升高[8]，部分甲狀腺髓樣癌和前列腺癌患者 ProGRP（31-98）升高[9]，是造成 ProGRP假陽性的常見因素；

本實驗中 NSE、ProGRP（31-98）、ProGRP（31-98）+NSE均能夠有效地區分健康人、良性肺病患者、肺癌患者；且 ProGRP（31-98）+NSE 作為聯合診斷（序列實驗）指標與 ProGRP（31-98）、NSE 單診斷指標比較優勢明顯：ROCProGRP（31-98）+NSE(0．928)＞ROC ProGRP（31-98）(0．864)＞ROCNSE(0．832)；敏感度：ProGRP（31-98）+NSE（89．1）＞Pro-GRP（31-98）（70．4）＞NSE （67．1）； 特異度：ProGRP（31-98）+NSE（96．7）＞ProGRP（31-98）（92．3）＞NSE（88．3）。 與王敏[10]、楊興[11]、劉運秋[12]倪軍[13]張萍[14]張素真[15]報道結果一致。本研究采用的電化學發光法相比傳統的酶聯免疫吸附法優勢明顯：⑴標記物再循環利用，發光時間長、強度高、易于測定；⑵敏感度高(NSE 可達 ng/m、ProGRP（31-98）可達 pg/ml)；⑶線性范圍寬；⑷18min以內可完成測定；結果相對更加可靠。

綜上所述，ProGRP （31-98）、NSE 在 SCLC 的診斷和鑒別中，ProGRP（31-98）優于 NSE，但由于部分腫瘤單指標的低表達，聯合應用可提高SCLC的早期診斷，電化學發光法的應用使本實驗結果更具信服力；同時在試驗前后應避免其他疾病和樣本處理對實驗結果的干擾。

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