微粒子化學發光技術檢測核心抗體臨床意義的探討

楊森，局軍，張興旺，郭瑞

(甘肅省人民醫院臨床檢驗中心，甘肅 蘭州730000)

CMIA技術具有靈敏度高、線性寬、檢測快速等優點已應用于對乙肝病毒血清學感染指標的檢測，并以S/CO值半定量的方式作為結果。在檢測核心抗體方面使用原倍血清，其陽性率相比稀釋之后的檢測方法存在一定的差異[1-3]。國內目前多采用ELISA 1：30倍稀釋方法檢測HBcAb，其結果具備一定的臨床診斷參考價值[4-6]。在表面抗原陰性模式中CMIA方法所檢測的陽性核心抗體是否都具備臨床意義？本研究根據CMIA方法所測HBcAb陽性標本利用ELISA1：30倍稀釋方法分析比對，以期能尋找到CMIA檢測HBcAb具有臨床意義的S/CO值范圍。

1 材料與方法

1．1 研究對象 標本來源于2013年11月至2014年3月本院門診和住院患者，選擇CMIA方法所檢測的HBsAg陰性、HBcAb陽性標本。共收集標本654例，男性372例，占56．9%，女性282例，占43．1%。

1．2 儀器與試劑 美國雅培微粒子化學發光儀i2000SR及其配套的試劑，校準品及北京康切斯坦質控品。上海科華核心抗體ELISA方法檢測試劑盒。丹麥雷杜RT2100C酶標儀。

1．3 方法 根據雅培i2000SR微粒子化學發光儀所檢測乙肝五項指標結果，篩選HBsAg陰性、HB-cAb 陽性標本（HBsAg S/CO 值＜0．05IU/ml為陰性，HBcAb S/CO值≥1．0為陽性結果）。標本無明顯溶血及黃疸。符合條件即可收集標本血清約0．5ml于Eppendorf管中，密封保存于-20℃冰箱內，儀器的日常維護，質控管理，樣本測試均嚴格按照試劑說明書及相關的SOP文件執行。根據ELISA試劑盒說明書，采用酶標儀對所收集標本進行1：30倍生理鹽水稀釋檢測HbcAb。

1．4 統計學分析 采用SPSS 18．0統計軟件對所得數據進行統計分析。所收集標本采用四分位數描述其結果。利用ROC曲線分析評價CMIA法HB-cAb S/CO值對ELISA檢測結果的診斷價值，P＜0．05具有統計學意義。

2 結果

2．1 對ELISA三組數據的年齡和核心抗體S/CO值進行正態性分析，統計結果為右偏態分布 （表1）。偏度和峰度是以數學矩原理檢測得到的結果，當兩者都為0時才能滿足正態分布的要求。本文數據偏度為負數，表示數據分布偏右，峰度＞0表示數據分布曲線峰峭比較尖，＜0表示曲線比較平闊。

表1 HbcAb數據正態性檢驗表

2．2 本文HBcAb的S/CO值數據經正態性分析為偏態分布，故以P50(P25，P75)四分位數表示資料的分布情況。根據ELISA方法所檢測核心抗體的結果，將其分為ELISA陰性組和陽性組，見表2。

根據CMIA檢測HBcAb的S/CO值高低，將其分為三組， 低值組 （1．00～3．99）、 中值組 （4．00～6．99）、高值組（7．00～9．99），三組 ELISA 檢出 HB-cAb陽性標本的比例有明顯的差異見表3。

表2 HBcAb標本基本情況

表3 各組ELISA檢出HBcAb陽性率情況

2．3 利用ROC曲線分析并得到HBcAb S/CO值為7．79作為具有臨床診斷意義的臨界值其曲線下面積為 0．922，95%可信區間為（0．900，0．944），靈敏度為 79．2%， 特異度為 93．1%，Yunden 指數為 0．72，P=0．000，有統計學意義，見圖 1。

圖1 HBcAb S/CO值ROC曲線

3 討論

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染作為一種社會性疾病在世界范圍內分布廣泛，是常見的感染性疾病之一，據流行病學調查研究顯示目前全球HBV慢性感染患者已超過3．5億[7]，1992年流行病學調查顯示人群攜帶率約為10%，其中1-59歲年齡段攜帶率約為9．8%。此后由于國家推行乙型肝炎疫苗接種計劃，表面抗原攜帶率有所下降，根據2006年國家流行病學調查研究顯示1-59歲年齡段攜帶率約為7．2%，5歲以下兒童攜帶率已控制在 1．0%左右[8，9]。

本文根據ELISA復檢結果將其分為陽性組、陰性組。 陽性組四分位數 8．26（7．77，8．59）高于陰性組及總體標本。四分位數的意義是組內有n個變量＜PX，7．77 為較小四分位數 P25， 組內＜7．77 的數值占25%，＞7．77的數值占75%，表明ELISA陽性組內的標本多位于CMIA檢測核心抗體S/CO值較高的范圍之內。

經ROC曲線分析，本文選擇CMIA檢測核心抗體S/CO值7．79作為具有臨床診斷參考價值的界點，其靈敏度為 79．2%，特異度為 93．1%，Yunden指數為0．72；Yunden指數為判斷界點診斷效用的綜合指標，其取值范圍在-1～1之間，越接近1說明診斷的效用越好。而且7．79恰好位于ELISA陽性組四分位數 8．26 （7．77，8．59） 范 圍之 內， 接 近P257．77。

本文另收集ELISA手工方法一周內所檢測表面抗原陰性、HBcAb陽性標本，共100例（核心抗體均為1：30倍稀釋后檢測），利用CMIA技術對其分析，共檢出核心抗體陽性標本92例，其S/CO值的中位數（M）為 9．30，高于本文界定值 7．79，分析可能有以下三點原因，第一：由于654例標本的存儲時間較長等人為影響因素，可能導致本文所得結論相對偏低；第二：ELISA檢測核心抗體均為1：30倍稀釋后檢測，而雅培化學發光采用原倍濃度檢測，兩種方法檢測原理的不同也可能導致所得結果有所差異；第三：ELISA核心抗體檢測試劑盒為國產科華試劑，雅培化學發光所用試劑為美國進口，兩種試劑的不同，也可能造成結果之間有所差異。但兩種方法所得核心抗體結果的S/CO值都處在較高范圍內。并且92例陽性標本中S/CO值≥7．79的標本約占 77．2%，也證明 ELISA與CMIA這兩種方法在檢測HbcAb方面具有一定的一致性，在此條件下也反向說明本文所得結果CMIA技術檢測HbcAb的S/CO值≥7．79具有一定的臨床診斷參考價值。

CMIA方法所檢測HbcAb的S/CO較高值對于提示機體是否存有潛在的HBV復制或感染，一方面需要結合患者的臨床病史和其它相關抗原抗體的檢測情況；另一方面則需要觀察患者的HBVDNA檢測結果[10，11]。針對傳染性疾病，臨床醫生對患者疾病狀況的診斷以及在觀察治療效果期間，需要綜合分析相關檢測指標，而我們檢驗工作者對儀器的準確度，方法學的敏感性和特異性更要了然于心，陽性和陰性雖是一個字的差別，但它卻造成患者在精神和心理方面沉重的負擔[12]。本文也希望通過這些論證最終得到的結果能有益于臨床醫生和檢驗工作者，更希望我們臨床和醫技之間能多些溝通和交流，增加彼此的信任，以使更多患者受益，造福人類。

本文實驗尚有不足之處：本文所得結論與患者病情的相關資料未能做一比較，兩者如能聯系，可進一步完善本文的論證。在ELISA手工操作環節，檢測結果不能避免人為因素的影響。應當增加觀察標本數量進一步證實CMIA檢測HBcAb的臨床診斷界點，以映證本文所得結論。

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