男性不同類型染色體多態性對常規體外受精治療結局的影響

乜照燕 張 娜 甄秀麗 趙素英 張 軼 吳海峰

1.河北醫科大學第四醫院(石家莊，050011)；2.河北省胸科醫院

染色體多態性存在于不同人群個體之間，主要包括1、9、16 號染色體次縊痕增加或缺失，D/G組染色體隨體區變異，9號染色體臂間倒位以及Y染色體長臂長度等變異[1]。一般認為染色體多態性不會引起個體臨床表型變化，但近年研究表明染色體多態性可能導致某些臨床效應，如不孕不育、習慣性流產[2-3]等。在體外受精(IVF)過程中，不同類型的男性染色體多態性的臨床結局存在爭議。本文旨在探討男性染色體多態性與輔助生育結局的關系，為輔助生殖咨詢提供相關臨床依據。

1 資料和方法

1.1 研究對象

經醫院倫理委員會批準及患者知情同意選擇 2014年6月-2016年6月在本院接受常規IVF治療的夫婦198對，為排除女性年齡和不孕因素對卵子質量、受精、著床等因素的影響，女性配偶以年齡<35歲、單純輸卵管因素不孕、基礎卵泡生成素( FSH)水平≤8 U/L、基礎竇卵泡數≥8個、染色體正常、首次行新鮮周期胚胎移植、黃體期長方案為入組條件。根據男方染色體多態性分為4組，D/G隨體增加為A組21例，次溢痕增加( 包括1號、9 號、16號染色體)為B組20例，9號染色體臂間倒位者為C組17例，Y染色體變異( 包括大Y和小Y)為D組20例，男性染色體正常者120例作為對照組。

1.2 研究方法

1.2.1外周血淋巴細胞染色體核型分析于IVF-ET術前, 所有對象進行常規外周血淋巴細胞培養，染色體制備主要采用G顯帶技術進行染色，對至少30個分裂中期細胞進行分析，配對3個核型，顯帶分辨率在400～550條帶，按人類細胞學國際命名體制(ISCN2016)進行染色體核型分析。

1.2.2精液常規檢查取卵當日男方收集精液，精液液化后按照參考文獻[4]行精液常規檢查。精子形態學分析采用Diff-Quick快速染色方法染色，采用Kruger精子形態學標準，頭、頸、中段和尾部均正常的精子認定為正常，所有形態學處于臨界狀態的精子均列為異常。計數精子200條計算正常精子形態百分率(≥4%為正常)。精子存活率采用伊紅-苯胺黑染色(深圳華康生物醫學工程有限公司)，計算著色和不著色精子的比例。

1.2.3體外受精及妊娠結局采用黃體期長方案控制性促排卵，女方取卵同時男方收集精液，精液充分液化后，用Spermgrad 梯度離心處理精液，調整精子濃度為10×106/ml，取卵后3～4 h加入精子，16～20h觀察受精情況。72 h觀察胚胎發育情況，并評定胚胎質量，移植胚胎。優質胚胎標準：第3天胚胎細胞總數≥7個，碎片≤20%。取卵日開始每日肌注黃體酮60 mg支持黃體。胚胎移植后14d尿妊娠試驗或血β-hCG確定生化妊娠，移植后35d B超見孕囊診斷臨床妊娠，≤12周妊娠終止為早期流產。

1.3 統計學處理

采用SPSS 12.0統計軟件進行數據處理，計數資料采用χ2檢驗，多樣本率兩兩比較的χ2分割法，計量資料采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基本情況

男方年齡23～45歲，女方年齡27～34歲；不孕年限1～8年。5組對象在女方年齡、體質量指數、基礎性激素水平和卵泡數等比較無統計學差異(P>0.05)。

2.2 女方促排卵情況

5組對象女方促性腺激素(Gn)用量、Gn天數、人絨毛膜促性腺激素(hCG)日E2、hCG日內膜厚度、獲卵數比較差異均無統計學意義(P>0. 05)。

2.3 男方精液基本情況

5組精液量、精子濃度、前向運動精子百分率、精子存活率以及精子正常形態相比無差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組對象精液基本情況比較±s)

2.4 男方IVF結局情況

5組對象間正常受精率、總受精率、優質胚胎率、植入率、妊娠率、流產率差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組對象體外受精情況比較[%(例)]

3 討論

傳統醫學認為染色體多態性多是無意義重復序列，不引起臨床表型異常。但隨著分子細胞遺傳學檢測技術的發展和對非編碼基因研究的深入，越來越多的研究認為染色體的多態部分可能會在細胞分裂過程中造成同源染色體配對困難，導致染色體不分離，形成異常配子，胚胎發生染色體非整倍性改變引發流產、不育不孕及其它臨床效應[5-7]。此外，異染色質在著絲粒功能方面起著重要的作用，它是姐妹染色單體結合和分離所必需的[7]，染色體主縊痕區著絲粒-動粒復合體(CKC)是染色體運動和均等分離的結構和功能基礎。CKC形態發生變化，可能會干擾染色體正常運動和分離[8]。有研究認為染色體多態性可降低妊娠率增加流產率[9-12]。也有學者認為染色體多態性與生殖異常沒有直接關系，不影響生育[13-14]。染色體多態性對生殖功能的影響一直存在爭議。大部分關于多態性的研究都是針對所有多態性對結局的影響，對于不同類別多態性對助孕結局影響尚需進一步研究。

戴小凡等[15]研究發現染色體多態性與精液質量無明顯的相關性。本文資料顯示，不同類型的染色體多態性男性精液質量與對照組相比未見統計學差異。有研究稱在Y染色體上有一些與男性生殖相關的基因，Y染色體的結構多態性變異，可能會對這些功能區域產生影響，導致精子質量下降。由于本研究數量有限，且所選病例接受常規IVF助孕，一般都是精液正常或者精液質量稍差男性，故在本研究中未發現男性染色體多態對精液質量影響。

Bhasin等[16]對1978對行IVF不孕不育夫婦進行染色體多態性研究，認為染色體多態性對于IVF-ET的臨床妊娠率、早期流產率及活產率無明顯影響。高輝[17]報道染色體多態性對于IVF/ICSI-ET治療患者的胚胎種植率、臨床妊娠率和早期流產率均無明顯影響。而郭威等[18]研究認為男性染色體多態性可能導致ICSI-ET中多原核受精率上升，但對IVF/ICSI-ET結局均無明顯影響。本研究對象為常規IVF受精，未發現染色體多態性患者受精率有異常；不同類型多態性組與正常組相比，受精率、卵裂率、優胚率、胚胎種植率、臨床妊娠率及早期流產率均無差異；在染色體多態性組，流產率有增高趨勢但無統計學差異，可能與病例數較少有關。

本研究結果顯示，男性染色體多態并不影響IVF助孕治療的結局。未來可能需要通過分子遺傳學技術對特定的多態區域的關鍵基因進行檢測確診，以為臨床和遺傳咨詢提供更詳細的指導。