金銀花中綠原酸成份的提取方法分析研究

陳 茜

金銀花為常用中藥，具有清熱解毒，保肝利膽、涼風散熱，抗病毒等功能[1]。近年來研究表明，金銀花還具有抗人類免疫缺陷病毒、抗腫瘤的功效，具有廣闊的臨床應用前景。金銀花的主要成分包括綠原酸、肌醇、木犀草素、異綠原酸以及三萜皂苷等，其中，綠原酸是金銀花的抗菌有效成分，一般常用綠原酸的含量高低來評價金銀花質量的好壞[2]。綠原酸是一種有機酸，同時含有羧基和鄰二酚羥基，易溶于醇溶液、丙酮和水等溶劑。當前，從金銀花當中提取出綠原酸的常用提取方法包括傳統的水提法、乙醇提取法、酶提取法等。本文將對綠原酸的常用提取方法進行實驗和分析總結，并根據綠原酸的性質，設計出了水提取、純乙醇提取、50%乙醇提取、超聲波提取方法與醇提法對比實驗、水提法與超聲波提取方法對比實驗，對每種提取方法的優缺點進行了分析。

1 材料與方法

1.1 儀器和試藥 電子天平、燒杯若干、量筒、錐形瓶、漏斗、超聲波發生器（鄭州予華儀器制造有限公司）、離心機（江蘇天瑞儀器股份有限公司）、高效液相色譜儀（上海儀電分析儀器有限公司）。材料和試劑：純乙醇、50%乙醇、蒸餾水、金銀花粉末。

2 實驗方法

2.1 蒸餾水加熱回流提取綠原酸 將62.5 g金銀花粉末加入到1000 mL蒸餾水中，設置沙浴溫度為70℃，進行回流1.5 h。然后用紗布過濾沙浴回流后的溶液，將濾渣濾出，再量取350 mL溶液，然后用濾紙過濾，溶液顯示紅色，將其放置于棕色瓶中。本次實驗樣品標記為樣品A。

2.2 99%乙醇加熱回流提取綠原酸 稱取100 g金銀花粉末，分為4份，每次將1份金銀花粉末加入到400 mL 99%乙醇溶液中，設置沙浴溫度為70℃，在回流裝置中進行攪拌回流，每次回流2 h。每次回流后用紗布過濾，將濾渣除去，再用99%乙醇溶液補充溶液到400 mL，然后進行下一次的回流提取。當100 g金銀花粉末分4次反復回流后，用紗布過濾回流液，再用濾紙過濾，直至溶液為澄清的綠色，將其收集于棕色瓶中。本次實驗樣品標記為樣品B。

2.3 50%的乙醇浸泡提取綠原酸 稱取25 g金銀花粉末，加入400 mL 50%的乙醇溶液中，攪拌充分后，靜置3天，直至溶液成為棕色，用紗布過濾，再用濾紙過濾，除去濾渣后，收集于棕色瓶中。本次實驗樣品標記為樣品C。

2.4 不同濃度醇提取法與超聲波提取法對比實驗

2.4.1 乙醇提取法 稱取干燥并且粉碎的金銀花粉末6.0 g，分裝成5份在5個錐形瓶中，分別用標簽標記，然后依次加入40%、50%、60%、70%、80%乙醇各100 mL，密封保存，將恒溫水浴溫度控制在60℃，加熱30 min，提取完畢后，分別依次進行過濾，再向濾渣中依次加入40%、50%、60%、70%、80%的乙醇各100 mL，然后重復一次前面所述操作，接著將濾液濃縮至20 mL，再分別進行抽濾，最后，將離心速度設置為4000 rpm，于離心機上離心10 min，將澄清的溶液放入冰箱待用。

2.4.2 超聲波加乙醇提取法 稱取干燥并且粉碎的金銀花粉末6.0 g，分成5份，分裝在5個錐形瓶中，分別用標簽標記，然后依次加入40%、50%、60%、70%，80%乙醇各100 mL，密封保存，放置于60℃超聲波中，進行超聲波提取30 min，提取完后，分別依次進行過濾，再向濾渣中依次加入40%、50%、60%、70%，80%的乙醇各100 mL，重復上述操作，然后也將濾液濃縮至20 mL，再分別進行抽濾，最后，于離心機上以4000 rpm的速度離心10 min，將澄清的溶液放入冰箱中待用。

2.5 水提取法與超聲波提取法對比實驗

2.5.1 水提取法實驗 稱取干燥、粉碎的金銀花粉末6.0 g，分成3份，分裝在3個燒杯中，再分別用標簽標記，將100 mL蒸餾水分別依次加入到3個被標記的燒杯中，放置于60℃恒溫水浴，進行加熱，第1份30 min，第2份50 min，第3份70 min，加熱完畢后，分別依次過濾，再分別向濾渣中加入100 mL蒸餾水，分別加熱提取，提取完畢后再進行過濾，除去濾渣，用旋轉蒸發儀對濾液進行濃縮，再把濃縮液定容至20 mL。再分別進行抽濾，最后，于離心機上以4 000 rpm的速度離心10 min，將澄清的溶液放入冰箱中待用。

2.5.2 超聲波加蒸餾水提取法 稱取干燥、粉碎的金銀花6.0 g，分裝成3份于3個錐形瓶中，貼上標簽進行標記，分別加入蒸餾水100 mL，放置于超聲波發生器中，于60℃下進行加熱，設置超聲波效率為100%，第1份金銀花加熱30 min，第2份加熱50 min，第3份加熱70 min，加熱提取完畢后過濾，再向濾渣當中加入蒸餾水100 mL，依次重復上述操作，也將濾液濃縮至20 mL，再分別進行抽濾，最后，于離心機上以4 000 rpm的速度離心10 min，將澄清的溶液放入冰箱待用。

2.6 實驗結果檢測及數據 將A、B、C、三個樣品均放置半個月后進行檢測，其檢測方法參照《中華人民共和國藥典》2010年版1部205頁，對金銀花中綠原酸含量的測定方法：高效液相色譜法。

表1 綠原酸含量測定

備注：樣品B是用400 mL的99%乙醇分4次回流100 g金銀花，金銀花與99%乙醇的重量/體積1∶4比例，所得的綠原酸的含量為1.09 mg/mL，若換算成其他幾組樣品制作時金銀花與溶劑的重量/體積1∶16比例，則綠原酸含量應為：0.2725 mg/mL。

表2 水提法與超聲波法對比實驗結果

表3 醇提法與超聲波法對比試驗結果

3 討論

提取綠原酸可通過浸漬，不需要加熱，50%的乙醇水溶液能夠通過細胞壁、細胞膜并且滲透進入細胞組織內，無機溶劑和有機溶劑的相互配合，使其在細胞間、細胞內部有較強的穿透力，水更有可能滲透進細胞內將細胞撐破，使細胞內的綠原酸不斷被溶出，然而如果沒有水溶劑細胞浸入，僅僅是單純的乙醇環境，即使加熱再久，也可能沒有破壞細胞，最終導致含量偏低。因此從提取效益和效果來看，50%的乙醇水溶液比純乙醇提取效果好。與傳統的水提法相比較，超聲波法提取的效果要更好。同時還可以得出，提取時間為30 min時，提取效果最佳，隨著提取時間的延長，可能導致提取出的綠原酸結構被破壞，使其含量減少。

通過對金銀花不同得提取工藝進行分析，我們可以得知，醇提取法要比水提法的效果更理想，綠原酸的提取率較高。隨著乙醇濃度的增加，提取綠原酸的濃度增加，到達最高后濃度隨著乙醇濃度增加，綠原酸的濃度呈逐漸降低的趨勢[6]。加入超聲波提取以后，提取效率變得更高，提取物綠原酸的含量也在增加。因此，選擇60%的乙醇溶液，并且用超聲波加熱提取30 min的提取工藝最好[3]。超聲波提取方法能夠將細胞壁擊碎，同時使細胞內的組分滲透到溶液當中，從而達到分離的目的。該方法的優點是綜合成本比較低，污染比較小，易過濾，而且沒有醇提法中因溶劑的使用帶來的不利，且產品產出率高。但考慮到金銀花的理化性質，用超聲波處理過后，金銀花易成粘稠糊狀，不利于接下來操作的進行。因此該方法僅限于實驗室中操作，不適合于工業化的生產[4]。

綠原酸作為金銀花的主要功能成分，其提取方法仍將倍受關注。水提法、醇提法簡單易行，特別是醇提取法，提取率較高，一段時間內仍將是最常用的基本提取方法[5]。相對于水提法，醇提取法提取效果更好，綠原酸的提取效率較高，加入超聲波后提取效率變得更高，提取物綠原酸的含量增加[6]。

[1]梁玉敏，王進美，李懷斌.金銀花中綠原酸提取工藝比較與優化探討[J].遼寧中醫雜志，2008，35(2)：262-264.

[2]范遠景，徐曉偉，余芳芳，等.分離純化金銀花綠原酸工藝研究[J].安徽農業科學，2010，38(24)：13052-13053.

[3]葉燕萍，萬雪芹，顏濤，等.GA3對巖溶石山金銀花的效應研究[J].中藥材，2010，33(8):1210-1212.

[4]聶凌鴻，岳森.金銀花中綠原酸提取工藝的優化[J].食品研究與開發，2008，29(1):51-55.

[5]王利，冉旭.金銀花中綠原酸醇提工藝的研究[J].飲料工業，2009，12(1):18-20.

[6]劉佳佳，趙國玲，王暉，等.Extractionprocess of chlorogenicacidinfloslonicerae byenzymatictreatment[J].中南大學學報(英文版)，2002，9(4):246-249.