紫杉醇注射液制備工藝研究以及質(zhì)量控制

閆肅 孫曉雪

摘 要： 目的 建立紫杉醇注射液的制備工藝及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法 將一定量的紫杉醇與PEG 400混合后，得到溶液A；然后將2份的大豆卵磷脂加入水中，接著加入1份泊洛沙姆，攪拌均勻后，形成B溶液，將溶液A緩慢滴加到溶液B中，邊滴加邊攪拌，攪拌均勻后過濾除菌得到溶液即為紫杉醇溶液。采用高效液相色譜法對紫杉醇注射液的主要成分紫杉醇的含量進(jìn)行測定。結(jié)果 紫杉醇在0.4～4 μg范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.54%，RSD值為0.51%。結(jié)論 采用本方法制備的紫杉醇溶液，操作簡單、工藝穩(wěn)定可靠，建立的高效液相色譜法檢測含量的方法靈敏、準(zhǔn)確，可用于紫杉醇注射液的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞： 紫杉醇注射液；質(zhì)量控制；制備工藝；高效液相色譜法

紫杉醇是一種具有抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物，最初是從紅豆杉的樹皮中提取的粗提物，在對獲得粗提物進(jìn)行活性篩選中，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)這種粗提物能明顯抑制小鼠腫瘤細(xì)胞的生長，通過實(shí)驗(yàn)手段，將這種活性物質(zhì)得到分離，但由于天然產(chǎn)物中含量極低，一直到20世紀(jì)，最初這種活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)者才同美國Duke大學(xué)教授應(yīng)用x-射線技術(shù)分析確定了該活性成份的化學(xué)結(jié)構(gòu)為一種四環(huán)二萜類化合物，并把它命名成為紫杉醇（Paclitaxel）[1]。紫杉醇已經(jīng)得到廣泛使用，是近十幾年來臨床治療惡性腫瘤的重大突破之一[2-3]。本文采用HPLC法以紫杉醇含量為指標(biāo)對紫杉醇注射液的質(zhì)量進(jìn)行控制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

液相色譜儀（日本島津），C18色譜柱（150mm×4.6mm，日本島津）。乙腈為色譜純（sigma公司），水為超純水，其余試劑均為分析純。紫杉醇對照品（購自中國藥品生物制品檢定所），紫杉醇原料（南京道斯夫生物科技有限公司）。

1.2 紫杉醇注射液的制備

將100 mg的紫杉醇與一定量的PEG 400混合后，得到溶液A；然后將2份的大豆卵磷脂加入水中，接著加入1份泊洛沙姆，攪拌均勻后，形成B溶液，將溶液A緩慢滴加到溶液B中，邊滴加邊攪拌，攪拌均勻后過濾除菌得到溶液即為紫杉醇溶液，濃度為6mg/ml。

1.3色譜條件

高效液相色譜法，色譜條件為C18柱；檢測波長220 nm；流速1.0 mL/min；柱溫25℃；流動(dòng)相為乙腈和水體積比為4：1，冰醋酸調(diào)pH值。

1.4繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

使用電子天平（梅特勒公司）精密稱取一定量的紫杉醇對照品，使用容量瓶配置成2mg/ml的對照品溶液。分別準(zhǔn)確進(jìn)樣2、5、10、15、20 μL。以峰面積為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，得回歸方程。

1.5精密度

精密吸取紫杉醇注射液100 μL，轉(zhuǎn)移置10 mL量瓶內(nèi)，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，重復(fù)四次。吸取等量對照品液進(jìn)行檢測，進(jìn)樣量20L，測5次，測量峰面積。計(jì)算得平均含量為標(biāo)示量的99.54%，RSD=0.51%。

1.6穩(wěn)定性

取步驟1.5配置的紫杉醇供試品溶液，2 h進(jìn)樣一次，共計(jì)5次，計(jì)算得RSD=1.19%，結(jié)果表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.7回收率

精密吸取6份紫杉醇注射液，100 μL/份，分別轉(zhuǎn)移置10 mL量瓶中，得到待測樣品6份，每瓶加入紫杉醇對照品0.3 mg，計(jì)算得平均回收率99.54%。

2 結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

紫杉醇對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，將獲得色譜峰比較并疊加得標(biāo)準(zhǔn)曲線。HPLC結(jié)果表明紫杉醇保留時(shí)間7.49min。

2.2樣品的含量測定

精密量取3批紫杉醇樣品各100 μL，置10mL容量瓶中，加流動(dòng)相至所需刻度，搖勻。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液2 mL，進(jìn)樣20μL，測得峰面積，計(jì)算紫杉醇含量。紫杉醇含量為標(biāo)示量的97.54%。

3 討論

紫杉醇是臨床上重要的天然抗癌藥物，在多種腫瘤臨床上均有廣泛的應(yīng)用，取得了較好的治療效果[4-5]。紫杉醇親脂性較高，難溶于水，血漿蛋白結(jié)合率約為93%，生物半衰期為5.3～17.4小時(shí)，代謝器官主要為肝臟，腎臟清除率僅為5 %。紫杉醇抗癌譜較為廣泛，主要適用于乳腺癌和卵巢癌，同時(shí)對于黑色素瘤、肺癌、淋巴瘤、大腸癌等均有一定療效，效果較為顯著[6-8]。本研究主要摸索了不同比例的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水系統(tǒng)作為流動(dòng)相時(shí)色譜峰的峰形等，結(jié)果顯示，醇-水系統(tǒng)下，峰形拖尾較為嚴(yán)重，加少量冰醋酸亦不易調(diào)整。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)考察了甲醇-水、乙腈-水等流動(dòng)相系統(tǒng)，乙腈-水、甲醇-乙腈-水系統(tǒng)下，峰形較好。理論塔板數(shù)至少可達(dá)5000，添加少量冰醋酸可以使色譜峰形美觀，當(dāng)流動(dòng)相冰醋酸-乙腈-水（1：400：100）時(shí)出峰時(shí)間較為合適，且峰形對稱性較好。

本實(shí)驗(yàn)以含量為指標(biāo)，采用的HPLC法可以準(zhǔn)確地測定紫杉醇注射液中紫杉醇的含量，為提高和完善紫杉醇注射液的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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