紫杉醇注射液制備工藝研究以及質量控制

閆肅 孫曉雪

摘 要： 目的 建立紫杉醇注射液的制備工藝及質量控制標準。方法 將一定量的紫杉醇與PEG 400混合后，得到溶液A；然后將2份的大豆卵磷脂加入水中，接著加入1份泊洛沙姆，攪拌均勻后，形成B溶液，將溶液A緩慢滴加到溶液B中，邊滴加邊攪拌，攪拌均勻后過濾除菌得到溶液即為紫杉醇溶液。采用高效液相色譜法對紫杉醇注射液的主要成分紫杉醇的含量進行測定。結果 紫杉醇在0.4～4 μg范圍內與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系，平均回收率為99.54%，RSD值為0.51%。結論 采用本方法制備的紫杉醇溶液，操作簡單、工藝穩(wěn)定可靠，建立的高效液相色譜法檢測含量的方法靈敏、準確，可用于紫杉醇注射液的質量控制。

關鍵詞： 紫杉醇注射液；質量控制；制備工藝；高效液相色譜法

紫杉醇是一種具有抗腫瘤活性的天然產(chǎn)物，最初是從紅豆杉的樹皮中提取的粗提物，在對獲得粗提物進行活性篩選中，科學家發(fā)現(xiàn)這種粗提物能明顯抑制小鼠腫瘤細胞的生長，通過實驗手段，將這種活性物質得到分離，但由于天然產(chǎn)物中含量極低，一直到20世紀，最初這種活性物質的發(fā)現(xiàn)者才同美國Duke大學教授應用x-射線技術分析確定了該活性成份的化學結構為一種四環(huán)二萜類化合物，并把它命名成為紫杉醇（Paclitaxel）[1]。紫杉醇已經(jīng)得到廣泛使用，是近十幾年來臨床治療惡性腫瘤的重大突破之一[2-3]。本文采用HPLC法以紫杉醇含量為指標對紫杉醇注射液的質量進行控制。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

液相色譜儀（日本島津），C18色譜柱（150mm×4.6mm，日本島津）。乙腈為色譜純（sigma公司），水為超純水，其余試劑均為分析純。紫杉醇對照品（購自中國藥品生物制品檢定所），紫杉醇原料（南京道斯夫生物科技有限公司）。

1.2 紫杉醇注射液的制備

將100 mg的紫杉醇與一定量的PEG 400混合后，得到溶液A；然后將2份的大豆卵磷脂加入水中，接著加入1份泊洛沙姆，攪拌均勻后，形成B溶液，將溶液A緩慢滴加到溶液B中，邊滴加邊攪拌，攪拌均勻后過濾除菌得到溶液即為紫杉醇溶液，濃度為6mg/ml。

1.3色譜條件

高效液相色譜法，色譜條件為C18柱；檢測波長220 nm；流速1.0 mL/min；柱溫25℃；流動相為乙腈和水體積比為4：1，冰醋酸調pH值。

1.4繪制標準曲線

使用電子天平（梅特勒公司）精密稱取一定量的紫杉醇對照品，使用容量瓶配置成2mg/ml的對照品溶液。分別準確進樣2、5、10、15、20 μL。以峰面積為橫坐標，進樣量為縱坐標，得回歸方程。

1.5精密度

精密吸取紫杉醇注射液100 μL，轉移置10 mL量瓶內，用流動相稀釋至刻度，搖勻，重復四次。吸取等量對照品液進行檢測，進樣量20L，測5次，測量峰面積。計算得平均含量為標示量的99.54%，RSD=0.51%。

1.6穩(wěn)定性

取步驟1.5配置的紫杉醇供試品溶液，2 h進樣一次，共計5次，計算得RSD=1.19%，結果表明供試品溶液在10 h內穩(wěn)定。

1.7回收率

精密吸取6份紫杉醇注射液，100 μL/份，分別轉移置10 mL量瓶中，得到待測樣品6份，每瓶加入紫杉醇對照品0.3 mg，計算得平均回收率99.54%。

2 結果

2.1標準曲線

紫杉醇對照品溶液連續(xù)進樣5次，將獲得色譜峰比較并疊加得標準曲線。HPLC結果表明紫杉醇保留時間7.49min。

2.2樣品的含量測定

精密量取3批紫杉醇樣品各100 μL，置10mL容量瓶中，加流動相至所需刻度，搖勻。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液2 mL，進樣20μL，測得峰面積，計算紫杉醇含量。紫杉醇含量為標示量的97.54%。

3 討論

紫杉醇是臨床上重要的天然抗癌藥物，在多種腫瘤臨床上均有廣泛的應用，取得了較好的治療效果[4-5]。紫杉醇親脂性較高，難溶于水，血漿蛋白結合率約為93%，生物半衰期為5.3～17.4小時，代謝器官主要為肝臟，腎臟清除率僅為5 %。紫杉醇抗癌譜較為廣泛，主要適用于乳腺癌和卵巢癌，同時對于黑色素瘤、肺癌、淋巴瘤、大腸癌等均有一定療效，效果較為顯著[6-8]。本研究主要摸索了不同比例的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水系統(tǒng)作為流動相時色譜峰的峰形等，結果顯示，醇-水系統(tǒng)下，峰形拖尾較為嚴重，加少量冰醋酸亦不易調整。本實驗同時考察了甲醇-水、乙腈-水等流動相系統(tǒng)，乙腈-水、甲醇-乙腈-水系統(tǒng)下，峰形較好。理論塔板數(shù)至少可達5000，添加少量冰醋酸可以使色譜峰形美觀，當流動相冰醋酸-乙腈-水（1：400：100）時出峰時間較為合適，且峰形對稱性較好。

本實驗以含量為指標，采用的HPLC法可以準確地測定紫杉醇注射液中紫杉醇的含量，為提高和完善紫杉醇注射液的質量控制提供依據(jù)。

參考文獻

[1] Mcphail A T， Breen J J， Quin L D. X-ray analysis of 1-phenyl-4-phosphorinanone. Evidence for a chair conformation with an axial substituent[J]. Journal of the American Chemical Society， 1971， 93（10）： 2574-2575.

[2] Sandler A， Gray R， Perry M C， et al. Paclitaxel-carboplatin alone or with bevacizumab for non-small-cell lung cancer.[J]. New England Journal of Medicine， 2006， 355（24）：2542-2544.

[3] Miller K， Wang M， Gralow J， et al. Paclitaxel plus Bevacizumab versus Paclitaxel Alone for Metastatic Breast Cancer[J]. New England Journal of Medicine， 2007， 357（26）：2666-2667.

[4] 劉海霞. 紫杉醇聯(lián)合卡鉑化療同步放療治療中晚期宮頸癌近期療效觀察[J]. 山東醫(yī)藥， 2017， 57（6）：83-84.

[5] 吳開林， 林龍， 趙國棟. 表柔比星聯(lián)合紫杉醇治療三陰性乳腺癌的效果分析[J]. 實用臨床醫(yī)藥雜志， 2017， 21（15）：165-167.

[6] 李學明， 王永祿， 程曉丹，等. 紫杉醇納米混懸劑的制備及其在動物體內的藥動學與組織分布研究[C]// 2010施慧達杯全國青年藥學工作者最新科研成果交流會. 2010.

[7] 余修祥， 熊景輝， 方征遠，等. 一種紫杉醇注射液及其制備方法：， CN 104257607 A[P]. 2015.

[8] 潘鄰霖， 董敬， 王思玲，等. 紫杉醇注射液的制備及其物理穩(wěn)定性的初步評價[J]. 沈陽藥科大學學報， 2004， 21（2）：101-104.