“延胡索-冰片”藥對抗小鼠心肌缺血的作用

溫紅娟 李 娜 尚 坤 隋永鵬 石曉征 李曉華 孫 野 韓 冬 邱智東 謝艷彬 唐迎雪

(山東中醫藥大學，山東 濟南 250355)

心肌缺血是各類心臟疾病的誘因，主要由心臟血液灌注減少無法為心臟供給足夠的“養料”所引起〔1〕。近年來，中藥療法以中醫基礎理論為指導，臨床療效較顯著。“藥對”使中醫的方劑和中藥的性味歸經相結合，是歷代醫家臨床經驗的精華，不但可以在最大程度上優化中藥的配伍，還可以緩和藥物間毒性。而“延胡索-冰片”是針對心腦血管疾病的一個藥對〔2〕，尤其對心肌缺血導致的冠心病心絞痛等疾病具有良好的臨床療效。本研究以“延胡索-冰片”藥對為主要干預藥物，觀察不同劑量“延胡索-冰片”藥對對異丙腎上腺素(ISO)致小鼠急性心肌缺血血清丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)含量變化及其對心肌組織學的影響。

1 材料與方法

1.1實驗動物 特殊清潔級(SPF)C57BL/6小鼠，體重30～35 g，購自北京市維通利華實驗動物技術有限公司。

1.2主要試劑 “延胡索-冰片”藥對為棕褐色的粉末，氣香，長春中醫藥大學研發中心中藥藥劑實驗室自制。ISO由注射液(批號：100166-201004)由中國藥品生物制品檢定所生產。CAT測試盒(20111221)、SOD試劑盒(20120821；20121012)、MDA試劑盒(20120801；20121009)及NO檢測試劑盒(20120713)均購自南京建成生物工程研究所。

1.3動物分組及給藥 70只小鼠經適應性飼養1 w后，隨機分為空白對照組、模型組及“延胡索-冰片”藥對50.0、25.0、12.5、5.0和1.0 mg/kg給藥組，每組10只。“延胡索-冰片”藥對給藥組按上述劑量進行灌胃給藥，模型組、空白對照組給予等量蒸餾水，1次/d。自給藥第8天起，除空白對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射ISO 0.01 g/kg，1次/d，連續10 d。

1.4血清學指標檢測 最后1次給藥后麻醉，腹主動脈取血，分離血清，按照試劑盒說明書對CAT、NO、SOD及MDA的含量進行生化分析儀檢測。

1.5心肌組織蘇木素-伊紅(HE)染色 處死各組動物，取心室組織于4℃10%甲醛中固定24～72 h，通過石蠟包埋，制備成4 μm切片，HE染色，光鏡下觀察心肌組織形態。

1.6統計學處理 采用SPSS12.0軟件行方差分析。

2 結 果

2.1“延胡索-冰片”藥對對各組小鼠血清酶學水平的影響 與空白對照組比較，模型組小鼠血清中CAT、SOD、NO水平明顯降低而MDA水平顯著提高(P<0.05)；與模型組比較，“延胡索-冰片”藥對12.5和50.0 mg/kg體重給藥組血清CAT水平顯著提高(P<0.05)，“延胡索-冰片”藥對12.5、25.0和50.0 mg/kg體重給藥組血清SOD水平顯著提高(P<0.05)，“延胡索-冰片”藥對治療各劑量組血清NO、MDA水平差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 “延胡索-冰片”藥對對各組小鼠血清酶學水平的影響

與空白對照組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05

2.2“延胡索-冰片”藥對對急性心肌缺血小鼠心肌組織學改變的影響 空白對照組小鼠心肌纖維排列整齊，心肌間質未見炎細胞浸潤。模型組小鼠心肌可見境界清楚的灶狀壞死，部分壞死灶融合形成片狀，壞死灶內心肌細胞溶解，壞死組織周圍可見心肌纖維變性，心肌細胞間質水腫，壞死灶內及周圍較多炎細胞浸潤。“延胡索-冰片”藥對組心肌組織肌纖維變性、壞死、水腫程度明顯降低。見圖1。

圖1 HE染色觀察結果(×200)

3 討 論

冠狀動脈血流量降低、心肌氧供應減少均可引起心肌缺血。在中醫學的理論體系中，心肌缺血屬于心痛胸痹。心痛胸痹是以心脈痹阻不暢為主要癥狀的一種疾病〔3〕。現代藥理學研究表明，延胡索屬于活血、行氣、止痛藥，臨床上多應用于治療心痛、胸痹，改善心肌缺氧、缺血〔4〕。冰片具有“通諸竅、散郁火”的功效。將延胡索和冰片二味中藥配伍形成“藥對”是國內著名中醫藥專家施今墨教授多年治療心腦血管疾病的經驗結晶，經驗證尤其對心肌缺血導致的冠心病心絞痛等疾病具有良好的臨床療效〔5〕。

MDA是膜脂過氧化最重要的產物之一。CAT、NO、SOD大量存在于心肌細胞的胞質或線粒體中，當機體的心臟組織受到缺血影響而出現損傷時，心肌細胞中大量酶釋放入血，上述指標迅速升高。

作為調節心臟循環系統功能的重要因子，NO在抑制血小板的黏附和聚集、抑制白細胞的趨化激活、抗氧自由基過氧化損傷等方面有著優異的作用〔6，7〕。根據現代研究表明，NO還可以通過上調SOD的活性間接減少氧化損傷〔5〕。通常認為，NO與血管內皮素(ET)共同維持血管及血液內環境的平衡。當機體在急性心肌缺血的狀態下，缺血的心肌細胞與外周血中的內皮素含量均會不同程度升高，使內皮素與NO的釋放量失去平衡，提高高血壓等心血管疾病的發病率。研究表明，NO的生成起到抗心肌缺血的作用〔8〕。

現代研究通常將血清心肌酶學作為評價心肌缺血程度的指標之一，當心臟出現急性心肌缺血時，心肌細胞會很快出現凋亡，其最主要的形態學改變出現在心肌細胞的細胞核〔9〕。本研究結果表明，“延胡索-冰片”藥對25.0 mg·kg-1·d-1可明顯減輕小鼠急性心肌缺血程度，對由急性心肌缺血引發的心肌酶露出有明顯的改善作用。“延胡索-冰片”藥對相組合，行氣活血、化瘀止痛的臨床應用價值較高，能在一定程度上避免藥物間的相互作用，產生藥效，降低毒副作用，具有良好臨床療效。

1魯 端.臨床心肌缺血與心律失常〔J〕.醫師進修雜志(內科版)，2004；27(1)：52-4.

2尚 坤，于清華，石 光，等.穴位敷貼療法治療冠心病心絞痛76例〔J〕.吉林中醫藥，2014；34(5)：519-22.

3王永炎.中醫內科學〔M〕.上海：上海科學技術出版社，1998：108.

4魯春梅，張春森，姜立勇.延胡索化學成分及藥理作用研究進展〔J〕.中國現代藥物應用，2011；5(15)：126-7.

5陳林志.延胡索-冰片藥對對實驗性心肌損傷保護作用的研究〔D〕.長春：長春中醫藥大學，2015.

6Rubbo H，Radi R，Anselmi D，etal.Nitric oxide reaction with lipid peroxylradicals spares alpha-tocopherol during lipid peroxidation：greater oxidantprotection from the pair nitric oxide/alpha-tocopherol than alpha-tocopherol/ascorbate〔J〕.J Biol Chem，2000；275：10-2.

7孫帥軍，王新宇，黃小玲，等.丹酚酸 B 對大鼠缺血心肌組織溶酶體功能的影響〔J〕.中國老年學雜志，2016；36(8)：1789-91.

8陳俊林，吳偉康，韓玉蓮，等.鄧氏通冠膠囊改善缺血心肌供血的時效量效關系及NO機制研究〔J〕.廣州中醫藥大學學報，2007；24(4)：301-5.

9歐立娟，孫曉萍，劉啟德，等.干姜、陳皮提取物對大鼠心肌缺血的影響〔J〕.中藥材，2009；32(11)：1723.