心房顫動SD大鼠清道夫受體-B1表達及其與動脈粥樣硬化病變的相關性

高明強 申 捷 顧彩鋒

(復旦大學附屬金山醫院急危重病中心，上海 201508)

心房顫動(AF)是急診科常見疾病之一，其發病率隨增齡而增高，流行病學調查結果表明年齡超過75歲老年人中，發病率高達5%～15%〔1,2〕。動脈粥樣硬化(AS)是引起心血管疾病的一個重要的病理生理基礎，AS的存在明顯增加心血管疾病的風險〔3～5〕。高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的抗AS作用已經廣為人知，清道夫受體(SR)-B1是已經公認的HDL-C的受體，廣泛表達于肝臟、產類固醇組織、小腸刷狀緣、AS病變部位，通過參與膽固醇和膽固醇酯的轉運和吸收，參與HDL-C的代謝，影響AS的形成，且多種影響AS形成的因素也影響其各部位表達及活性〔6,7〕。到目前為止，在AS合并AF中左心耳部位SR-B1的表達和活性改變還未見報道。本課題組前期研究發現SR-B1在AF SD大鼠左心耳的表達水平明顯升高，聯系其為HDL-C受體，因此分析其可能與AS的發生有關。本研究探討AF大鼠的SR-B1表達及其與AS病變的相關性。

1 材料與方法

1.1實驗動物與試劑 SD大鼠80只，雌雄各半，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，體質量18～22 g。氯化乙酰膽堿，無水氯化鈣，氯化鈉注射液，戊巴比妥鈉，乙醇，冰醋酸，總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑盒，丙二醛(MDA)測試盒，腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒均購自博士德生物科技有限公司。

1.2SD大鼠分組及處理 對照組：未經處理的20只SD大鼠(C組)，喂以正常鼠食含4%脂肪、24%蛋白、4.5%粗纖維；AS組：未經處理的SD大鼠，喂以致AS食物〔含15%脂肪(共占總熱量的58%，主要是可可油)、1.25%膽固醇和0.5%膽酸鈉〕，制成AS模型，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)較C組明顯升高，HDL-C較C組明顯降低，視為AS模型構建成功；AF組：C57BL/6JSD大鼠，乙酞膽堿-氯化鈣(Ach-CaCl2)藥物經尾靜脈注射制備AF模型；AF-AS組：C57BL/6JSD大鼠首先進行AF造模，心電圖監測結果表明造模成功后喂以AS食物，制成AF-AS模型。每組20只。

1.3觀察指標及方法 ①血脂：造模成功后，禁食12 h，腹腔注射10%水合氯醛(4 ml/kg體重)麻醉動物，尾靜脈取血法采血，分離血清，采用日本東芝 TBA-40FR全自動生化分析儀，分別測定三酰甘油(TG)、LDL-C、血清總膽固醇(TC)、HDL-C；②MDA、SOD與TNF-α水平測定：在造模成功后，采集各組SD大鼠血清，采用全自動生化分析儀測定MDA和SOD水平，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定TNF-α水平；③心電圖：腹腔注射10%水合氯醛(4 ml/kg)麻醉動物，使用上海嘉龍教儀廠SMUP-A型生物信號處理系統，將記錄電極插入四肢皮下，記錄標準Ⅱ導聯體表心電圖；④SR-B1受體檢測：分別在造模成功后采集左心耳，組織勻漿后，加Trizol，提取RNA，之后采用BIO.RAD熒光定量PCR儀(CFX96 TOUCH)以及半定量PCR測定SR-B1 mRNA表達量，以GADPH為內參計算相對表達量。引物經Primer5.0設計，上游5′-AATCCGGAGCCAAGAGAAAT-3′， 下游5′-TCCCTGAGTGTCTGCACAAG-3′，擴增產物長度為354 bp。 GAPDH的引物序列：上游5′-CCAATATGATTCCACCCATG-3′，下游5′-AGGTCCACCACTGA-CACGTT-3′。擴增產物片段長段600 bp。

1.4統計學方法 采用SPSS22.0軟件進行t及χ2檢驗。

2 結 果

2.1各組造模情況 AF組有16只SD大鼠成功造模；AS組12只成功造模。AF-AS組有14只成功造模。

2.2各組血脂水平比較 LDL-C、TC、TG水平從低至高依次為C組，AF組，AS組，AF-AS組，各組間差異有統計學意義(P<0.05)。HDL-C水平從高至低依次為C組，AF組，AS組，AF-AS組，各組間差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血脂、MDA、SOD及TNF-α水平比較

1)與C組比較，2)與AF組比較，3)與AS組比較：P<0.05

2.3各組MDA、SOD及TNF-α水平比較 各組SOD水平從低至高依次為AF-AS組，AF組，AS組和C組，各組間差異有統計學意義(P<0.05)；MDA、TNF-α水平從低至高依次為C組，AS組，AF組，AF-AS組，各組間差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.4各組SR-B1 mRNA表達比較 各組左心耳SR-B1表達水平見圖1，從低至高依次為C組，AF組，AS組和AF-AS組，各組間差異有統計學意義(P<0.05)。

圖1 各組左心耳SR-B1表達

3 討 論

AF是臨床常見的心血管高發病，在老年人群尤其是超過64歲以上的老年人群發病率較高，盡管隨著醫療技術的提高，能夠在一定程度上控制病情。但臨床治療措施主要集中于控制心率、室率，主要治療目標為轉復心律。AS是多種心血管疾病的主要病理生理因素，且有研究表明AS在AF患者中的發生率顯著高于非AF患者〔8〕。HDL-C作為抗AS的重要物質，能夠通過參與或調節機體的多種生理過程，如白細胞在內皮的黏附、補體活化、血小板活化、內皮細胞和平滑肌細胞的增殖，而發揮抗炎、抗聚集及促進纖溶等作用，使其抗AS功能得以實現〔9〕。目前很多研究分析SR-B1在AS患者體內的表達水平〔10，11〕。

本研究在構建AF模型后進行AS模型構建的成功率更高，這提示AF可能會增加AS發生的風險。其原因可能是AF多伴有氧化應激、微炎癥，進而發生脂質過氧化，從而增加AS的發生風險，且有研究表明LDL-C經氧化修飾后具有更強的導致AS的作用，能夠被巨噬細胞的SR-B1識別，從而導致泡沫細胞生成，而泡沫細胞即為粥樣斑塊的前體〔12〕。

本研究顯示，LDL-C水平是在AS組的水平高于C組，HDL-C在AS組水平低于C組，這與相關研究報道的LDL-C、TC、TG是AS的危險因素，HDL-C是AS發生的負風險因素基本一致〔13〕。HDL-C具有抗氧化作用，從而可避免LDL-C被氧化，進而避免了氧化后的LDL-C形成血垢進而導致AS。此外HDL-C能夠穿透動脈內膜，將沉積在動脈內膜內側的脂質斑塊破碎并攜帶出血管壁，并且可修復已經破損的血管內膜破損，使AS斑塊消退。

MDA是細胞膜上的磷脂被氧自由基氧化形成的脂質過氧化物，在一定程度上反映了機體的脂質過氧化程度。TNF-α是一種促炎蛋白，能誘導多種炎癥因子分泌，損傷血管壁，增加AS風險，TNF-α還可以誘導心肌間質纖維化，導致AF〔14〕。SOD是體內的一種重要的抗氧化酶，能夠抑制機體的脂質過氧化反應，從而降低AS的發生風險。本研究結果提示在AF和AS造模后機體抗氧化能力降低，脂質過氧化程度均明顯加重，這提示AF可能會增加AS發生的風險。

SR-B1可以結合多種配體修飾的脂蛋白、糖基化終末產物、陰離子磷脂及HDL-C、LDL-C，還可以介導磷脂、TG等多種脂質的吸收，與脂代謝密切相關，而AF、AS的發生又與脂代謝異常相關〔15〕。由于脂質代謝調節復雜，各部位SR-B1的膽固醇/膽固醇酯轉運方向不同，對HDL-C和膽固醇代謝的影響不同，HDL-C和膽固醇對AS的影響又不同。本研究結果提示SR-B1與AS發生風險呈正相關，其原因可能是HDL-C水平降低，機體脂質過氧化程度加重，產生MDA等代謝物，導致炎癥因子TNF-α濃度上升，機體為抑制脂質過氧化水平，代償性地表達SR-B1，但由于HDL-C水平降低，仍然難以發揮作用，因此SR-B1表達水平一直較高。

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