HPLC法測定不同產地西洋參中人參皂苷Rb1、Re、Rg1的含量

張菊 陳茹 何鵬飛 李艷萍 郭世民

摘要：目的 采用高效液相色譜法測定不同產地西洋參中人參皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量，對比云南麗江西洋參與其他產地西洋參中人參皂苷Rb1、Re 、Rg1的含量差異。方法 C18柱為色譜柱，流動相采用乙腈-0.1%磷酸溶液為緩沖液，梯度洗脫，流速為1.1mL/min，檢測波長為203nm，柱溫為40℃。精密吸取溶液各10μL注入高效液相色譜儀中測定。 結果 人參皂苷Rb1、Re、Rg1在測定范圍內有良好的線性關系，它的平均回收率分別為99.70、101.19、100.27%，RSD分別為2.3、2.1、1.7%。結論 該方法準確可靠、便于操作且重現性好，應用性強。不同產地西洋參的化學成分大致相同，但各含量間卻存在顯著差異，其中吉林靖宇和云南麗江的三種單體皂苷總含量相對較高。

關鍵詞：HPLC 西洋參 人參皂苷Rb1、Re 、Rg1

中圖分類號：R927.2 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2018）02-0073-02

西洋參P.quinquefolium L.是多年生宿根名貴藥材，具有補氣養陰、清熱生津的功效，原產于北美洲東部的闊葉林帶，具有與中國人參較相似的生態環境，在生產過程中忌地性極強。上世紀50年代末，云南省麗江魯甸鄉引種東北人參成功，被植物學家稱之為“北參南移”的創舉，1984年又成功種植了西洋參[1]。目前，這里已經成為全中國黃河以南唯一、也是最大的人參、西洋參種植基地[2]。

本文采用高效液相色譜法對不同產地西洋參進行含量測定，對比西洋參含量差異，以期對引種30年后的云南麗江西洋參資源進行質量評價，為麗江西洋參資源的利用和開發提供理論基礎。

1 儀器與材料

戴安UltiMate3000高效液相色譜儀，精密電子天平BSA223S-CW（北京塞多利斯科學儀器有限公司），CQ250超聲波清洗器0030（上海超聲波儀器廠）。

人參皂苷 Rg1對照品、人參皂苷 Re對照品、人參皂苷Rb1對照品均購于中國藥品生物制品檢定所，乙腈為色譜純試劑，水為超純水，其他試劑均為分析純，麗江西洋參藥材采自麗江市玉龍縣魯甸鄉某參場，其它西洋參藥材為各產地市售。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Gemini 5u C18 110A，4.6×250mm；Phernomex C18保護柱，乙腈（A）和0.1%磷酸（B）為流動相，進行梯度洗脫，（0～25min，19%～20%A；25～60min，20%～32%A；60～90min，32%～50%A；90～105 min，50%～19%A），柱溫40℃，流速1.1mL/min，置于203nm波長處檢測。理論板數按人參皂苷 Rb1 計算應不低于 5 000。對照品和西洋參樣品圖譜見圖1、圖2。

2.2 對照品溶液的制備[3] 取人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含人參皂苷Rg1 0.1mg，人參皂苷Re 0.4mg，人參皂苷Rb1 1mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取西洋參粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇溶液50mL，稱定重量，置水浴中加熱回流提取90 min，放冷，再稱定重量，用水飽和的正丁醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25mL，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加50%甲醇適量使溶解，轉移至10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關系考察[4] 精密吸取“2.2”項下的混合對照品溶液各 8、10、12、14、16μL進樣，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，以各對照品的進樣量（μL）為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程分別為人參皂苷Rg1 Y=0.5165x-0.0249（R=0.9999）；人參皂苷Re Y=4.1656x+8.2318（R=1.000）；人參皂苷Rb1 Y=3.6627x-0.2893（R=1.000）。結果表明，人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1分別在0.08～0.16μg、0.32～0.64μg、0.8～1.6μg范圍內呈良好線性關系。

2.5 穩定性試驗 精密吸取同一供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10、12、24進樣，測定峰面積，結果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1峰面積的RSD值分別為0.15，0.20，0.42%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.6 精密度試驗 分別精密吸取混合對照品溶液10μL，在“2.1”項色譜條件下重復進樣6 次，測定峰面積，結果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1峰面積的RSD值分別為0.23，0.18，0.30%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復性實驗 取制備好的供試品溶液適量，平均分成6份，分別進樣，測定峰面積，結果人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1峰面積的RSD值分別為1.92，0.51，0.72%，表明該方法的重復性良好。

2.8 加樣回收實驗 取已知含量的西洋參藥材樣品約0.5g，平行6份，精密稱定，分別加入對照品溶液適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，進樣10μL，按“2.1”項下色譜條件進行測定，計算人參皂苷 Rg1、Re、Rb1的平均加樣回收率分別為99.70、101.19、100.27%，RSD分別為2.3、2.1、1.7%。

2.9 含量測定 取制備好的供試品溶液適量，按照“2.1”項下色譜條件進行測定，結果見表1。

3 結論

本文采用HPLC法對6個不同產地西洋參的主要有效成分人參皂甙Rg1、Re、Rb1進行含量測定，依據2015版《中國藥典》[3]要求，西洋參中含人參皂苷 Rg1、Re和 Rb1 的總量不得少于2.0%，結果顯示，6個產地樣品均符合《中國藥典》規定，不同產地西洋參的化學成分大致相同，但含量卻存在顯著差異，其中美國西洋參的Rg1含量最高，加拿大西洋參的Re含量最高，吉林靖宇西洋參的Rb1含量最高，吉林靖宇和云南麗江的三種單體皂苷總含量相對較高。由以上數據可知，云南麗江種植的西洋參質量極好，引種30年后西洋參質量并沒有發生質的變化[5]，為了更好的保護和利用西洋參資源，云南麗江有必要開展西洋參的育種工作，相關研究結果將為云南麗江西洋參的開發利用提供一定的參考數據。

參考文獻：

[1]陳宗蓮.西洋參在云南引種初報[J].云南植物研究，1984，（3）：35.

[2]華模，李秀春.云藥之鄉展風采[N].云南日報，2011，01（26）：11.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2015：131-132.

[4]張丹，吳蘭芳，王乾，等.不同產地西洋參藥材中8種皂苷類成分含量測定及指紋圖譜研究[J].中藥材雜志，2016，39（10）：2307-2310.

[5]魏曉雨，陳增松，田義新，等.不同產地西洋參總皂苷及單體皂苷Rb1、Re、Rg1的含量測定[J].人參研究，2016，（5）：40.