口腔癌患者手術前后細胞免疫功能的變化及臨床意義

李天客 包 陽 陳 中 張素欣 尹 克

(河北醫科大學第四醫院口腔科，河北 石家莊 050071)

既往研究顯示〔1〕，在腫瘤患者發病初期、中期或晚期，機體免疫功能均出現不同程度的下降?？谇话┗颊卟∏榈倪M展與機體的免疫系統存在密切關系，機體免疫系統能夠識別癌細胞表面抗原，激活免疫效應細胞，釋放相關效應分子發揮免疫應答作用，攻擊并殺傷癌細胞〔2〕。Mehta等〔3〕研究發現，T細胞中CD4+CD25+調節性T細胞是具有降低腫瘤免疫抑制反應的亞群，CD4+CD25+調節性T細胞功能異常與人類某些疾病的發生、發展存在緊密關系。隨著分子生物學技術及免疫學的不斷發展，多項研究證實〔4，5〕，在乳腺癌、卵巢癌、口腔癌、肺癌及消化道腫瘤患者外周血T淋巴細胞表型及相關輔助性T淋巴細胞因子均發生相應變化，且能夠反映腫瘤復發或轉移的危險。本研究旨在探討口腔癌患者手術前后細胞免疫功能變化及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2013年9月至2016年1月收治的口腔癌患者為研究對象，納入標準：①被確診為口腔癌；②在納入研究前未進行其他任何抗腫瘤治療。排除標準：①合并免疫系統疾病、嚴重心肝腎疾病及其他惡性腫瘤；②合并意識障礙、精神疾病及中途退出者。共收集口腔癌患者30例作為觀察組，男18例，女12例；年齡27～58〔平均(42.38±5.38)〕歲；發病部位：頰8例，舌6例，牙齦12例，口底4例；臨床分期：Ⅲ期21例，Ⅳ期9例。同期健康體檢者30例作為對照組，男15例，女15例，年齡24～56〔平均(41.47±6.74)〕歲。兩組性別、年齡差異均無統計學意義(P>0.05)。本研究經醫院倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1儀器 采用Epics-XL型流式細胞儀，購于美國Beckman Coulter公司；紅細胞裂解液及單克隆抗體均購于美國Beckman Coulter公司。

1.2.2檢查指標 兩組研究對象在納入研究24 h內抽取空腹肘靜脈血3 ml，觀察組在手術結束1 w后再次抽取空腹肘靜脈血3 ml。將所有收集樣本加入肝素進行抗凝處理，然后置于-80℃保存待檢。

1.2.2.1T細胞表型測定 取收集樣本做成4份100 μl樣本，每份均加入10 μl異硫氰酸熒光素標記血液CD3單克隆抗體與CD4單克隆抗體；10 μl藻紅蛋白標記血液CD8單克隆抗體與CD56單克隆抗體；置于25℃避光孵育1 h后，加入紅細胞裂解液10 min后，離心，取上清液加入1 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)，采用流式細胞儀檢測血清T細胞各亞型百分比及CD4+/CD8+比值。

1.2.2.2T細胞內γ干擾素(INF-γ)、白介素(IL)-2水平測定 取收集樣本做成4份100 μl樣本，每份中分別加入藻紅蛋白標記的IL-2單克隆抗體，異硫氰酸熒光素標記的血液CD4單克隆抗體，藻紅蛋白標記的INF-γ單克隆抗體，藻紅蛋白標記的INF-γ與異硫氰酸熒光素標記的CD4單克隆抗體，置于25℃避光孵育1 h，加入紅細胞裂解液10 min后，離心，取上清液加入1 ml PBS后，采用流式細胞儀檢測IL-2陽性，INF-γ陽性，INF-γ、CD4雙陽性，IL-2、CD4雙陽性T細胞占總細胞的比例。

1.3統計學方法 應用SPSS20.0軟件，多組計量資料間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用t檢驗。

2 結 果

2.1手術前后兩組T細胞亞群比較 觀察組在手術前CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平顯著低于對照組，CD8+、CD56+水平均高于對照組(P<0.05)；手術后，觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均顯著上升，CD8+、CD56+水平顯著降低(P<0.05)，但觀察組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于對照組，且CD8+、CD56+水平顯著高于對照組(P<0.05)，見表1。

2.2兩組手術前后T細胞內細胞因子水平比較 手術前觀察組IL-2陽性、IL-2、CD4雙陽性及INF-γ、CD4雙陽性水平均顯著低于對照組，INF-γ陽性水平顯著高于對照組(P<0.05)；手術后，觀察組IL-2陽性、IL-2、CD4雙陽性及INF-γ、CD4雙陽性水平顯著升高，INF-γ陽性水平顯著降低(P<0.05)，且手術后觀察組各項指標與對照組比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 手術前后兩組T細胞亞群比較

與對照組比較：1)P<0.05；與手術前比較：2)P<0.05；下表同

表2 兩組手術前后T細胞內細胞因子水平比較

3 討 論

口腔癌是嚴重影響人們健康的惡性腫瘤之一，發病率居癌癥發病順位第六位，口腔癌以鱗狀細胞癌為主，約占80%以上〔6〕。由于口腔癌發病部位特殊，一方面影響患者的飲食，另一方面影響患者美觀，患者常常出現營養不良或心理障礙。既往報道〔7〕，腫瘤常常導致機體免疫功能下降，對疾病的進展、轉歸均具有重要的影響。目前，口腔癌主要以手術治療為主，但在手術治療的基礎上給予免疫治療對患者的康復具有促進作用，而掌握口腔癌患者手術治療對機體免疫系統的影響，對開展免疫治療具有重要的指導意義。

T細胞是機體抗腫瘤過程中重要的免疫細胞，依據表面分子標志物的差異可分為不同的亞群，在抗腫瘤過程中分別扮演著抑制腫瘤發生、進展的作用，如CD3+細胞數量可以反映細胞免疫功能，CD4+細胞能夠輔助機體抵御腫癌細胞，CD8+細胞反映機體免疫抑制的強度，而CD4+/CD8+比值降低可以反映疾病出現進展，且預后不良〔8〕；而CD56+表達標志著癌癥的進展。此外，T淋巴細胞在抗腫瘤過程中除可以直接殺傷癌細胞外，還可以分泌細胞因子發揮免疫調節作用，如IL-2、INF-γ等〔9，10〕。本研究顯示，腫瘤患者免疫功能出現嚴重下降；手術治療能夠提升患者免疫功能，但仍未恢復到健康水平，其原因：一方面，手術清除腫瘤負荷，改善患者機體免疫功能；另一方面，手術能夠誘發機體創傷修復的免疫應答反應，對免疫系統具有正向的促進作用。機體內細胞因子水平可以反映機體抗腫瘤反應狀態，有研究顯示〔11〕，腫瘤患者外周血中細胞因子水平發生變化，如IL-2、INF-γ等細胞因子水平降低。本研究顯示，腫瘤可導致機體內細胞因子下降，與既往研究一致〔12〕。手術患者細胞免疫調節功能得到改善，其原因一方面由于IL-2、INF-γ抑制自身免疫反應，誘導對腫瘤細胞的免疫耐受，阻止抗腫瘤免疫反應的發生；另一方面，IL-2、INF-γ能夠抑制CD8+、CD56+等細胞的增殖，促進CD4+等細胞增殖，提高機體免疫力。

綜上所述，口腔癌患者機體抗免疫抑制功能下降，手術治療能夠改善患者免疫水平及免疫調節功能，改善患者病情。

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