37℃恒溫狀態下多型疫苗熱敏標簽失效時間比較性研究△

周春寧，溫長康

（江蘇省疾病預防控制中心總務科，江蘇 南京 210009）

疫苗熱敏標簽（簡稱VVM）采用新型溫度監測技術，使疫苗接種管理人員無需借助其他工具即可判斷疫苗有效性［1］，在高溫暴露等突發事件發生后直接將失效疫苗從有效疫苗中分離出去，減少有效疫苗報廢情形，節約接種成本［2，3］。目前，某國產公司可根據不同類型疫苗耐熱穩定性針對性地研制對應VVM，提高VVM冷鏈監測的精準性。本文旨在研究37℃恒溫狀態下OPV、滅活甲肝、減毒乙腦等第一類疫苗與對應VVM失效變化情況，評價上述VVM的可靠性。

1 材料與方法

1.1 樣品

VVM由蘇州華實熱敏科技有限公司生產提供，型號分別為QM5D37A（OPV疫苗）、QM9D37CA（滅活甲肝疫苗）、QM9D37CA（減毒乙腦疫苗），樣本份數80份，采用隨機數字表法從不同批次中抽樣得到。VVM對應疫苗由國產疫苗企業生產提供，樣本份數80份，用隨機數字表法從不同批次中抽樣得到。

VVM主要包含參照圓圈和活性區域。參照圓圈顏色固定不變，為活性區域提供參照；活性區域起始為白色，顏色隨高溫暴露不可逆地逐漸加深。當活性區域顏色加深至參照圓圈顏色時，VVM提示疫苗失效。

1.2 熱敏標簽顏色變化測量方法

采用隨機數字表法，將VVM置于水浴恒溫箱中，定期測量活性區域顏色。該顏色采用CIELAB色彩空間描述［4］，空間坐標包含L*（代表亮度，L*=0生成黑色而L*=100指示白色），a*（代表色度，a*負值指示綠色而正值指示品紅）和b*（代表色度，b*負值指示藍色而正值指示黃色），把活性區域顏色與參照圓圈顏色分別處理為L*a*b*三維空間的兩個點，并計算在它們之間的歐幾里得距離ΔE。當ΔE=0時，活性區域顏色與參照圓圈顏色相同，標簽提示失效。

1.3 疫苗有效性測量方法

1.3.1 OPV滴度變化測量方法。以人喉癌細胞（Hep-2細胞）作為病毒生長的細胞基質，將OPV作10倍系列稀釋，并接種人喉癌細胞，置二氧化碳培養箱35～36℃培養7天，觀察和記錄細胞病變，以發生50%細胞病變的最高稀釋度為滴定終點，按Kar?ber法計算結果。進行分型病毒滴定時脊髓灰質炎抗血清完全中和其中一型，用微量法滴定第二型。

1.3.2 滅活甲肝疫苗有效性測量方法。采用體外相對效力檢查法，即以酶聯免疫法測試供試品甲肝病毒抗原含量，并以參比疫苗為標準，計算樣本疫苗的相對效力，應不低于0.75。

1.3.3 減毒乙腦疫苗滴度變化測量方法。取樣本作10倍系列稀釋，至少取3個稀釋度的病毒液，分別接種BHK21細胞，用蝕斑法進行滴定，疫苗病毒滴度應不低于應5.7 LgPFU/ml，病毒滴度下降應不高于1.0 Lg PFU/ml。

1.4 VVM可靠性評價

根據實驗數據繪制VVM顏色和對應疫苗有效性變化擬合曲線圖與統計表，橫坐標為測量時間，縱坐標為失效VVM與疫苗例數。根據擬合曲線圖計算VVM和對應疫苗失效時間范圍，如VVM最晚失效時間早于疫苗最早失效時間，標簽具有可靠性。兩者時間越接近，VVM可靠性越高。

2 結果

37℃下疫苗滴度變化情況及對應樣本標簽失效情況：（1）OPV失效時間范圍為4～5.5 d，對應標簽失效時間范圍為3.1～4 d（詳見表1）；（2）滅活甲肝疫苗失效的時間范圍為15～29 d，對應標簽失效時間范圍為10～12 d（詳見表2）；（3）減毒乙腦疫苗失效的時間范圍為14～26 d，對應標簽失效時間范圍為10～12 d（詳見表3）。綜上，所有標簽最晚失效時間均早于疫苗最早失效時間，均具有可靠性。

表1 37℃下OPV樣本疫苗與QM5D37A樣本標簽失效情況表

表2 37℃下滅活甲肝樣本疫苗與對應樣本標簽失效情況表

表3 37℃下減毒乙腦樣本疫苗與對應樣本標簽失效表

3 討 論

疫苗失效時，標簽是否已失效是評價VVM可靠性的方法。疫苗失效而標簽未失效，VVM不可靠。VVM與對應疫苗失效速率不可能完全相同，VVM失效時間均須短于對應疫苗失效時間，才能確保標簽可靠。由于VVM之間、疫苗之間失效速率均存在一定誤差，兩者失效時間有一定范圍。因此，只有VVM最小失效速率（標簽最晚失效時間）大于疫苗最大失效速率（疫苗最早失效時間），VVM才完全具備可靠性，兩者時間越接近，可靠性越高。

所有疫苗的效價都會隨著時間衰減，溫度升高會加速效價的衰減。不同的疫苗品種對于溫度的敏感性不同，不同廠家生產的產品也有著不同的熱穩定性。OPV疫苗、減毒乙腦等減毒類疫苗熱穩定性與選育的菌毒種類型、原液與半成品病毒滴度、儲存溫度、制造水平等因素有關，滅活甲肝等滅活類疫苗熱穩定性與抗原類型、純化工藝、實際抗原含量、儲存溫度等因素有關［5，6］。根據疫苗熱穩定實驗得知，37℃下OPV、滅活甲肝、減毒乙腦疫苗最早失效時間分別為4、15、14天，熱穩定性遠高于國家藥典標準。根據VVM熱穩定實驗得知，37℃對應樣本標簽最晚失效時間分別為4、12、12天，標簽均于疫苗失效前到達終點，具有可靠性；OPV熱敏標簽與疫苗失效時間最接近，可靠性最高；減毒乙腦熱敏標簽與疫苗失效時間相差2天，可靠性較高；滅活甲肝熱敏標簽與疫苗失效時間相差3天，可靠性最低。

目前，國家通過條例政策鼓勵疫苗產品使用熱敏標簽，VVM的普及是當前疫苗冷鏈管理工作的一大趨勢，VVM的正確應用將有助于提高大規模疫苗接種的安全性［7-9］。

［1］方國良，馬 波，沈 峰，等.VVM標簽在A群C群腦膜炎球菌多糖結合疫苗上的應用［J］.中國生物制品學雜志，2015，28（9）：897-901.

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