三磷酸腺苷二鈉氯化鎂對宮內窘迫胎鼠腎保護作用的研究

張陳彥，都治香，祁美玉，張銘娜，趙敏英，張立新，安雪麗

(1. 河北省石家莊市第一醫院，河北 石家莊 050011；2. 河北醫科大學第一醫院，河北 石家莊 050000)

三磷酸腺苷二鈉氯化鎂對心肌、肺臟、肝臟及腸等缺血再灌注損傷具有明顯的保護作用，但對胎兒宮內缺氧缺血是否具有保護作用報道少見。胎兒宮內缺氧缺血多是由子宮胎盤缺血而造成，故本研究通過制作孕鼠的子宮胎盤缺血模型,探討了三磷酸腺苷二鈉氯化鎂是否對宮內窘迫胎鼠腎組織具有保護作用，從而為胎兒宮內窘迫的治療提供新思路及途徑。

1 實驗資料

1.1動物動物 成年雌性SD大鼠15只，體質量240～270 g，購自河北醫科大學動物實驗室，動物合格證號：2016-04-009。

1.2實驗方法 將SD孕鼠隨機分為缺氧缺血再灌注組、假手術組和干預組，每組5只。于妊娠第19天以3.5%水合氯醛(1 mL/100 g)腹腔注射麻醉，缺氧缺血再灌注組和干預組通過無損傷動脈鉗鉗夾雙側子宮、卵巢動脈建立缺氧缺血宮內窘迫模型，缺氧20 min后拆除動脈夾以恢復血供，并逐層關腹。假手術組只開關腹，不鉗夾子宮、卵巢動脈。干預組缺血前30 min給予三磷酸腺苷二鈉氯化鎂45 mg/kg腹腔注射，缺氧缺血再灌注組、假手術組于相同時間給予同等體積的0.9%氯化鈉注射液腹腔注射。

1.3觀測指標

1.3.1大體觀察 于術后24 h以3.5%水合氯醛對各組孕鼠行腹腔麻醉，開腹并暴露雙側子宮，觀察宮腔內的活胎數，剖出胎鼠并觀察存活新生鼠皮膚顏色、呼吸、四肢運動等情況，計算胎鼠死亡率。取胎鼠，斷頭處死，取出完整胎腎臟，于4%多聚甲醛固定48 h，經脫水透明后石蠟包埋切片，備用。

1.3.2腎組織中丙二醛(MDA)含量測定 在每組胎鼠中隨機抽取10只取腎臟，濾紙拭干，稱質量后，加入4 ℃的HEPES沖液中，其體積是腎組織塊質量的9倍，用玻璃勻漿器制成勻漿，勻漿液以3 000 r/min離心15 min，分裝于-70 ℃冰箱中保存備用。按試劑盒說明書，利用分光光度計檢測胎鼠腎組織中MDA含量。MDA試劑盒購于南京建成科技有限公司。

1.3.3腎組織學觀察 固定后的腎組織分置于40 g/L多聚甲醛中4 ℃固定，常規脫水，石蠟包埋后切片，脫蠟，行HE染色，光學顯微鏡下觀察腎組織形態學。

1.4統計學方法 所有數據采用SPSS 17.0統計軟件進行分析。計數資料比較行2檢驗；計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組胎鼠死亡率 假手術組胎鼠57只，均無死亡；缺氧缺血再灌注組胎鼠61只，死亡13只(23.31%)；干預組胎鼠60只，死亡9只(15.00%)。缺氧缺血再灌注組胎鼠死亡率明顯高于假手術組(P<0.05) ，干預組胎鼠死亡率明顯低于缺氧缺血再灌注組(P<0.05)。

2.2各組胎鼠腎組織中MDA含量 缺氧缺血再灌注組胎鼠腎組織中MDA含量為(7.37±0.92)nmol/mg，假手術組為(3.56±0.56)nmol/mg，干預組為(4.39±0.73)nmol/mg。缺氧缺血再灌注組胎鼠腎組織中MDA含量明顯高于假手術組(P<0.05)，干預組胎鼠腎組織中MDA含量明顯低于缺氧缺血再灌注組(P<0.05)。

2.3各組胎鼠腎組織病理學表現 假手術組腎組織結構基本正常，間質、微血管內皮細胞形態和結構亦大致正常。缺氧缺血再灌注組炎細胞浸潤明顯，腎小管上皮細胞明顯水腫樣變性，腎間質局部充血；干預組僅見部分腎小管上皮細胞輕度水腫樣變性。見圖1～3。

圖1 假手術組腎組織病理學表現

3 討 論

圖2 缺氧缺血再灌注組腎組織病理學表現

圖3 干預組腎組織病理學表現

妊娠期缺氧是影響胎兒發育和增加新生兒發病風險的常見原因[1]。而在妊娠期間，因代謝需要，組織氧氣消耗增加，加劇組織中的氧化應激和脂質氧化[2]。缺氧是宮內創傷中一種常見形式，如高海拔地區妊娠、妊娠合并貧血、胎盤功能不全、脊髓壓迫、先兆子癇、心臟疾病等均可導致宮內缺氧[3]。而缺氧缺血性損傷后磷酸肌酸或以三磷酸腺苷形式儲存的能量在幾秒鐘內耗盡，隨后發生的無氧酵解維持主要細胞的功能，但糖酵解不能維持組織的長久生存，代謝廢物的積累和細胞內pH值降低，因為缺乏分子氧和NAD+供給不足，線粒體ATP生成受阻，導致三羧酸循環停止功能[4]。而外源性的三磷酸腺苷二鈉氯化鎂能夠激活腺苷受體，減少心肌細胞能源消耗，可以直接對細胞內的Na+，K+-ATP酶以及Ca2+-ATP酶提供能量或能量底物維持細胞外和細胞內的離子平衡，減輕細胞內酸中毒和細胞腫脹[5]；還能夠改善微循環，修復膜的電壓，恢復正常膜的滲透性和改進細胞功能[6]；能夠提高第二信使cAMP和IP3的基礎水平，保護各種灌注損傷后細胞和器官的功能，改善器官血流量[7]，減弱線粒體的脂質過氧化損傷，達到清除氧自由基的功能[8]。本實驗結果顯示，缺氧缺血再灌注組胎鼠死亡率明顯高于假手術組，干預組胎鼠死亡率明顯低于缺氧缺血再灌注組，證實三磷酸腺苷二鈉氯化鎂可以降低宮內窘迫胎鼠死亡率；病理組織學結果顯示，缺氧缺血再灌注組炎細胞浸潤明顯，腎小管上皮細胞明顯水腫樣變性，腎間質局部充血伴水腫；干預組僅見部分腎小管上皮細胞輕度水腫樣變性，偶見管型，提示三磷酸腺苷二鈉氯化鎂對宮內窘迫胎鼠腎組織損傷有明顯的保護作用。

動物實驗研究證實，自由基參與宮內的急性缺氧缺血及再灌注損傷[9]。而組織中MDA水平是反映自由基損傷程度的重要指標[10]。本實驗結果顯示，缺氧缺血再灌注組胎鼠腎組織中MDA含量明顯高于假手術組，干預組胎鼠腎組織中MDA含量明顯低于缺氧缺血再灌注組。提示三磷酸腺苷二鈉氯化鎂能夠減少MDA生成，從而減輕組織的脂質過氧化損傷，減輕宮內窘迫胎鼠腎損傷。

綜上所述，宮內缺氧缺血會對胎鼠腎組織產生嚴重的氧化損傷，而三磷酸腺苷二鈉氯化鎂能夠減輕宮內窘迫胎鼠腎組織的損傷，可增強缺氧缺血胎鼠腎組織清除自由基的能力，對缺氧缺血腎細胞有保護作用，為臨床上應用三磷酸腺苷二鈉氯化鎂防治宮內缺血性腎損傷提供了實驗依據。

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