急性喉炎患兒T淋巴細胞亞群差異性分析

隋麗麗，孟 娟，孫 平

(山東省高密市婦幼保健院兒二科，山東 高密 261500)

小兒喉炎是小兒常見病之一，分急性與慢性兩種，是一種咽喉黏膜與淋巴組織的炎性病變，一般反應較為劇烈[1]。該病常見于嬰幼兒，高發年齡段為1～3歲、有春冬季節高發的特點，臨床表現為聲音嘶啞、干咳，“空空”樣咳嗽，似犬吠狀，多數患兒伴有不同程度發熱，其中輕中度發熱占大多數，高熱則較為少見[2-3]。小兒發生喉炎后，因其喉腔狹小，喉部黏膜組織松弛，黏膜淋巴管豐富，極易發生水腫阻塞咽喉，導致呼吸困難，所以患兒常伴有焦躁不安，情緒波動較大，敏感易怒，夜晚病情加重等特點。另外，小兒急性喉炎多伴有免疫功能低下，但有關方面研究不足，有待進一步探討。T淋巴細胞亞群指標和紅細胞免疫指標可以反映患兒的免疫狀態，而痰液炎性因子的表達水平則可較為準確地反映患兒局部炎性反應嚴重程度，具有較高的研究價值。因此本次實驗對小兒急性喉炎患兒與同年齡段健康兒童的免疫功能相關指標進行對比分析，探究患兒體內T淋巴細胞亞群、紅細胞免疫指標和痰液相關炎性分子表達水平的變化情況，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年2月至2017年2月山東省高密市婦幼保健院兒科收治的急性喉炎患兒56例為實驗組。納入標準：根據《實用兒科學》[4]中有關小兒急性喉炎診斷的相關標準確診；患兒呼吸困難、體溫升高；咽喉腫痛、吞咽困難。排除標準：患有其他免疫功能疾病者；患其他呼吸道疾病者；伴隨嚴重器質性病變者。實驗組患兒男28例，女28例；年齡為0.9～12歲，平均3.98±0.21歲；病程3～15天，平均7.29±4.56天。另選體檢中心健康兒童56例為對照組，其中男29例，女27例；年齡0.8～12歲，平均3.88±0.16歲；兩組小兒性別、年齡一般情況比較差異均無統計學意義(均P>0.05)，具有可比性。本次實驗小兒監護人已簽署自愿同意書，且獲我院倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1 T淋巴細胞亞群指標的檢測

采集兩組小兒上午10時前的空腹靜脈血4mL于肝素管內。利用試劑(購自USA BD)對血液樣本進行處理，采用流式細胞儀[賽默飛世爾科技(中國)有限公司生產，型號：Attune NxT]檢測小兒外周血中T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+和CD8+細胞含量，并計算CD4+/CD8+比值。

1.2.2紅細胞免疫指標的檢測

采集兩組小兒靜脈血4mL于肝素管內。利用補體致敏和未致敏的酵母多糖凍干試劑(購自北京大學人民醫院免疫研究室)對血液樣本進行處理，采用酵母群紅細胞花環實驗改良法檢測紅細胞免疫指標，包括：酵母菌紅細胞花環率(RBC·C3bRR)，紅細胞免疫復合花環率(RBC·ICR)，協同腫瘤紅細胞花環率(collaborative tumor erythrocyte rosette，ATER)、直向腫瘤紅細胞花環試驗(erythrocyte rosette test，DTER)、腫瘤紅細胞花環率(erythrocyte rosette rate，ETER)、免疫黏附促進因子(immune adhesion promoting factor，FEER)、免疫黏附抑制因子(immune adhesion inhibitory factor，FEIR)。

1.2.3炎癥因子的檢測

所有小兒在就診2小時內用無菌棉簽采集咽喉部分泌物。痰液取樣方法：用彎壓舌板向后壓舌，用棉拭子伸入咽部，小兒因壓舌刺激咳嗽時，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上，獲得痰液樣本，在采樣時應用力適度，注意擦拭咽喉后壁與兩側扁桃體。采樣后迅速將樣品放入1.0mL的生理鹽水中充分搖勻，用于痰液相關炎性因子的檢測。

采用酶聯免疫吸附法(ELISA)法檢測痰液相關免疫因子，包括：白細胞介素(interleukin，IL)-5、IL-8、IL-10、C反應蛋白(C-reactionprotein，CRP)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)-α，試劑盒由深圳子科生物科技有限公司生產。

1.3統計學方法

2結果

2.1兩組T淋巴細胞亞群分析

實驗組患兒CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+指標均顯著低于對照組小兒，經比較差異均有統計學意義(均P<0.05)，見表1。

表1 兩組T淋巴細胞亞群指標比較結果Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets

2.2兩組紅細胞免疫指標分析

實驗組患兒的ATER、DTER、ETER、FEER、RBC·C3bRR均顯著低于對照組小兒，實驗組患兒FEIR和RBC·ICR顯著高于對照組小兒，兩組比較差異均有統計學意義(均P<0.05)，見表2。

表2 兩組紅細胞免疫指標比較結果Table 2 Comparison of red blood cell immune indexes between two

2.3兩組痰液炎性因子分析

實驗組患兒痰液中IL-5、IL-8、IL-10、CRP和TNF-α均顯著高于對照組小兒，經比較差異均有統計學意義(均P<0.05)，見表3。

表3 兩組炎性細胞因子比較結果Table 3 Comparison of inflammatory cytokines between two

3討論

3.1兒童急性喉炎臨床治療的研究意義

隨著抗生素的濫用和生態環境的改變，兒童健康受到嚴重威脅，其中急性呼吸道疾病是其中之一。有流行病學研究顯示，5歲以下兒童急性上呼吸道感染的發病率高達20%[5]。在入院就醫的兒童中，喉炎、支氣管炎、扁桃體炎約占整體的15.8%[6]。兒童是祖國的未來，家庭的希望，疾病帶來的不僅是身體上的傷害，還有巨大的經濟負擔和嚴重的心理負擔。兒童急性喉炎的發病機制尚未完全明確，經過國內外兒科醫學專家的長期探索發現：在病毒感染的基礎上合并細菌感染是最清晰合理的一種途徑[7]。由于小兒自身免疫力較成人低下，所以合并性感染極易導致患兒營養不良、變態反應體質，合并上呼吸道慢性病灶如化膿性扁桃體炎、慢性鼻炎、腺樣體肥大、鼻分泌物增多等，最終誘發急性喉炎。小兒急性喉炎也可伴隨一些急性傳染病出現，常見的如：急性腮腺炎、水痘、蕁麻疹、小兒猩紅熱等。小兒急性喉炎一般起病危急，具有白天緩解、夜間加重的特點，癥狀以喉痙攣為主，根據患兒自身條件不同，可表現為嘴唇發紺、情緒煩躁不安、面色虛弱蒼白、犬吠樣咳嗽等，因此在搶救患兒時要爭分奪秒，及時確診并實施正確有效的治療手段至關重要。

3.2 T淋巴細胞亞群因子與免疫因子在小兒急性喉炎中的水平調節作用

本研究通過測定外周血中T細胞亞群反映患兒體內的T細胞免疫狀態。CD3+代表總T細胞數，CD4+是輔助T細胞表面上的一種標記，CD8+是抑制性T細胞表面的一種標記，CD4+/CD8+則是反應免疫功能的指標[8-10]。ATER、DTER及ETER可反映患者體內紅細胞免疫狀態，FEER和FEIR則是一對反映紅細胞黏附功能的指標。本研究結果顯示：實驗組CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指標均顯著低于對照組(均P<0.05)，ATER、DTER、ETER、FEER、RBC·C3bRR均顯著低于對照組(均P<0.05)；FEIR和RBC·ICR顯著高于對照組(均P<0.05)，說明小兒急性喉炎對其T細胞亞群免疫功能、紅細胞免疫功能和紅細胞黏附功能可產生巨大的影響。急性喉炎可降低患兒免疫功能，抑制紅細胞免疫黏附功能。其原因可能是CD8+細胞水平降低時，細胞毒性因子水平降低，機體對抗原殺傷能力降低；CD4+作為輔助T細胞表面的抗體水平降低，說明T細胞在增殖、分化、提呈抗原、殺傷細胞的過程中輔助的細胞因子均降低，從而患兒機體免疫力降低；CD4+/CD8+比值也印證了患兒免疫力的確低于同年齡段健康兒童的免疫力。紅細胞免疫抑制因子是一種存在于血清中的糖蛋白，在許多理化性質上與腫瘤免疫抑制因子具有相同的特征，因此利用腫瘤免疫因子反映紅細胞免疫抑制因子水平具有合理性和可行性。紅細胞免疫抑制主要抑制紅細胞C3b受體的活性，具有賴氨酸的結合位點，可與補體受體(complement receptor，CR)結合，降低紅細胞黏附攜帶免疫復合物(immune complex，IC)的能力，大量循環免疫復合物(circulating immune complexes，CIC)覆蓋RBC·C3b受體空位，使C3b活性下降，且腫瘤疾病時RBC·C3b受體活性下降，腫瘤抗原-抗體復合物增多，致使RBC·C3bRR顯著低下[11]，提示在治療中，應該加強對患兒的免疫調節，增強其自身免疫功能。

3.3 IL-5和TNF-α等炎癥因子在小兒急性喉炎中的水平調節作用

本研究通過測定小兒急性喉炎痰液中的IL-5、IL-8、IL-10、CRP、TNF-α濃度，反映患兒體內的炎癥反應情況。IL-5可增加嗜酸性粒細胞數量和提高嗜堿性粒細胞活性，是炎癥反應中重要的淋巴因子[12]；IL-8是一種淋巴因子，由成纖維細胞和T細胞產生，可加重炎癥發應；IL-10可促進B細胞增殖與分化，在抗體生成過程中起著重要作用，可誘發炎癥反應。CRP是機體受到微生物入侵或組織損傷等炎癥性刺激時肝細胞合成的非特異性急性時相蛋白，可反映炎癥組織的大小或活動性[13]。TNF-α主要是由巨噬細胞分泌的多肽調節因子，具有廣泛的生物活性，與免疫炎癥反應有著密切的關系[14]。本研究結果顯示：實驗組痰液中IL-5、IL-8、IL-10、CRP和TNF-α均顯著高于對照組(均P<0.05)，說明急性喉炎可誘發患兒炎癥反應，進一步加重患者癥狀。對患兒炎癥因子的檢測可以為小兒急性喉炎的早期診斷和預后提供依據，具有重大的診斷價值。但在治療中，應找出病因，消除炎癥，緩解患兒炎性反應癥狀。

綜上所述，急性喉炎患兒的免疫功能較差，炎性反應嚴重，患兒體內T淋巴細胞亞群、紅細胞免疫指標和痰液相關炎性分子表達水平均具有較高的診斷價值。

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[專業責任編輯：吳紅艷]