毛細管氣相色譜法測定西瓜霜潤喉片中薄荷腦的含量

操江飛，簡國鳳，朱培杰

（肇慶學院 環境與化學工程學院，廣東 肇慶　526061）

西瓜霜潤喉片是由西瓜霜、火硝、冰片、薄荷素油、薄荷腦等成分加工而成的中藥片劑，是口喉中輕癥狀的主要用藥，對重癥具有一定的輔助治療作用.西瓜霜潤喉片具有清熱、解毒、消腫止痛、清音潤喉等作用，長期服用會產生一系列的不良反應,長期口含西瓜霜片的患者會對藥物形成精神依賴，停藥后會出現打哈欠、抑郁、厭食、呼吸加快、氣喘加重等癥狀.因此對西瓜霜潤喉片中成分含量進行檢測，提高藥片的質量非常重要.

該中藥片劑執行標準收載于《中國藥典》2010年版一部，目前尚未建立薄荷腦含量測定方法[1]，參考相關文獻[2-8]，通過設計L9（34）正交試驗考察了溶劑種類、溶劑用量及超聲時間3個因素對西瓜霜潤喉片中薄荷腦提取含量的影響，利用毛細管柱氣相色譜法測定西瓜霜潤喉片中薄荷腦含量，方法簡單，為準確測定西瓜霜潤喉片中薄荷腦含量提供方法.

1　實驗部分

1.1　實驗儀器

AG135電子天平（梅特勒-托利多科學儀器北京有限公司）；SK3310LHC超聲清洗機（上海科導超聲儀器有限公司）；GC-2010PLUS氣相色譜儀（島津集團）.

1.2　實驗材料及試劑

西瓜霜潤喉片（批號1211007、1209019、1209009，桂林三金藥業股份有限公司）；無水乙醇（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；環己烷（分析純，廣東光華科技股份有限公司）；乙酸乙酯（分析純，廣東光華科技股份有限公司）；萘(化學純，廣州新港化工廠)；薄荷腦（中國藥品生物制品檢定所）.

1.3　薄荷腦提取工藝優化

采用L9（34）正交試驗考察溶劑種類、溶劑用量及超聲時間3個因素對西瓜霜潤喉片中薄荷腦提取含量的影響.提取操作如下：取同批號的樣品10片，研細，準確稱取2.0 g，加入適量（5.0、10.0、15.0mL）提取溶劑（無水乙醇、乙酸乙酯、環己烷），進行超聲處理（10、20、30 min），冷卻至室溫，再精密稱定，用相應溶劑補足減失的重量.

1.4　色譜分析條件

色譜分析條件為：色譜柱為HP-INNOWAX(0.25 mm×30 m×0.25 μm)石英毛細管柱；以萘為內標物；進樣口溫度為165.0°C，檢測器溫度為195°C，柱溫135.0°C；載氣為高純氮氣（純度＞99.999%），流速為1.29mL/min；進樣量1μL；采用分流進樣，分流比為5.0.

1.5　標準儲備液的配置

準確稱量內標物萘、標準品薄荷腦，用無水乙醇超聲溶解，配制成標準儲備液.配制標準儲備液的濃度分別為：內標物萘溶液2.0 mg/mL，薄荷腦標準品溶液A4.0 mg/mL，薄荷腦標準品溶液B 2.0 mg/mL.

1.6　加標標準品的配置

準確吸取薄荷腦標準品溶液B 2.0 mL于20 mL的容量瓶中，加入2.0 mL內標溶液，用無水乙醇定容并搖勻，作為加標標準品溶液.

1.7　供試品溶液的配置

取同批號樣品10片，研細，準確稱量2.0 g，精密加入10.0mL無水乙醇，精密稱定，超聲處理20 min，冷卻至室溫.再精密稱定，用無水乙醇補足減失的重量，過濾后取濾液4.00 mL置于10 mL的容量瓶中，加入1.00 mL內標物萘溶液，用無水乙醇定容至刻度，并搖勻.

2　結果與討論

2.1　薄荷腦提取最佳工藝優化

提取溶劑的種類、用量以及超聲時間，均會在不同程度上影響薄荷腦的提取效率.文獻報道的薄荷腦提取溶劑主要是乙醇、乙酸乙酯和環己烷.本研究采用L9（34）正交試驗考察溶劑種類、溶劑用量及超聲時間3個因素對西瓜霜潤喉片中薄荷腦的提取含量的影響，試驗設計及結果分析見表1.

表1　正交試驗設計及結果分析

由表1可見，在試驗1條件下，從相同質量西瓜霜潤喉片中提取薄荷腦的質量最多；由極差分析得知，各因素的影響次序為：溶劑種類＞溶劑用量＞超聲時間.薄荷腦是一種飽和的環狀醇，分子極性比較大，根據相似相溶的原理，薄荷腦更易溶于極性比較大的無水乙醇中.此外，薄荷腦的提取效率隨著溶劑用量或超聲時間的增加沒有明顯提高.西瓜霜潤喉片中薄荷腦的提取最佳工藝條件為：溶劑為無水乙醇，溶劑用量為10.0mL，超聲處理時間為20min.

2.2　系統適應性試驗

取適量內標物萘溶液（無水乙醇稀釋），加標標準品溶液，供試品溶液，按“1.4”所述的色譜條件進行測定，考察其系統的適應性，結果如圖1所示.由圖1可知：無水乙醇、內標物萘對樣品中薄荷腦測定沒有產生干擾，樣品中薄荷腦峰與其它成分及內標物萘的峰完全分離，內標物萘的保留時間約為7.30 min，薄荷腦的保留時間約為4.96 min.

圖1　實驗色譜圖

2.3　重復性試驗

取同批號供試品6份，按照“1.7”操作方法配制供試品溶液，并按“1.4”色譜條件進行測定，記錄薄荷腦和內標物萘的峰面積，并計算兩者比值，結果如表2所示，在該條件下供試品溶液具有良好的重復性.

表2　同批號6份供試品溶液中薄荷腦和萘的峰面積測定結果

2.4　精密度試驗

取適量加標標準品溶液，按“1.4”色譜條件進行重復測定6次，記錄薄荷腦和內標物萘的峰面積，并計算兩者比值，結果如表3所示.表3數據說明本方法具有較好的精密度.

表3　加標標準品溶液重復測定結果

2.5　線性關系考察

精密量取薄荷腦標準品溶液A 0.5、1、2、4、10 mL，分別置于20 mL容量瓶中，然后分別精密加入2.0 mL內標物萘溶液，再用無水乙醇定容至刻度并搖勻.按“1.4”色譜條件進行測定各稀釋后薄荷腦標準品溶液，計算薄荷腦與內標物萘峰面積比值，結果如表4所示.并以其兩者比值為縱坐標(Y)，以薄荷腦濃度為橫坐標(X)，進行線性回歸，如圖2所示.結果表明，薄荷腦濃度在0.1～2.0 mg/mL范圍內具有良好線性關系，回歸方程為Y=4.4493X-0.0849，r=0.9999.

表4　線性關系考察結果

圖2　線性回歸曲線圖

2.6　穩定性試驗

按“1.7”方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、3、4、5、6 h取樣測定，結果如表5所示.由表5可知，薄荷腦與內標物萘峰面積之比的RSD%為0.2491%(n=7)，表明供試品溶液在6 h內穩定.

表5　供試品溶液6 h內測定結果

2.7　加標回收試驗

準確稱取同批號的西瓜霜潤喉片2.0 g 9份，分別加入適量薄荷腦標準品，精密加入10.0 mL無水乙醇，精密稱定，超聲處理20 min，冷卻至室溫，再精密稱定，用無水乙醇補足減失的重量，過濾后取濾液4.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入1.00 mL內標溶液，再用無水乙醇定容，并搖勻.按“1.4”色譜條件進行測定，結果如表6所示.由表6可見，加標回收率在97.79%～100.11%之間，相對標準偏差(RSD)為0.8851%，表明該測定方法滿足定量分析需要.

表6　加標回收試驗結果

2.8　樣品含量的測定

取3種不同批號的西瓜霜潤喉片各10片，按“1.7”方法制備供試品溶液，按“1.4”色譜條件進行測定，結果如表7所示.結果表明，不同批號的西瓜霜潤喉片中薄荷腦的含量有較大差異.

表7　不同批號的西瓜霜潤喉片中薄荷腦含量測定結果

2.9　與其他氣相色譜法的比較

通過與其他氣相色譜法的比較（如表8所示），本研究分析方法同樣具有良好的回收率和RSD值，可以準確測定西瓜霜潤喉片中薄荷腦的含量.

表8　不同分析方法檢測薄荷腦含量

3　結論

通過正交試驗考察了溶劑種類、溶劑用量及超聲時間等因素對西瓜霜潤喉片中薄荷腦提取含量影響，優化結果為：溶劑為無水乙醇，溶劑用量為10mL，超聲處理時間為20min，各因素影響次序為：溶劑種類＞溶劑用量＞超聲時間.

采用毛細管柱氣相色譜法對西瓜霜潤喉片中薄荷腦的含量進行測定.結果表明：薄荷腦在線性范圍0.1～2.0 mg/mL內表現良好(r=0.9999)；加標回收率為99.01%，相對標準偏差值(RSD%)為0.8851%.本試驗方法操作簡單，準確，靈敏度高，重現性好，為準確測定西瓜霜潤喉片中薄荷腦的含量提供方法.

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社.2010：680.

[2]劉瑞江,張業旺,聞崇煒.正交試驗設計和分析方法研究[J].實驗技術與管理,2010,27(9)：52-55.

[3]翁雪萍,李惠教,年文煒.氣相色譜法測定西瓜霜潤喉片中冰片和薄荷腦的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2001,12(5)：366-367.

[4]胡艷鵬,云筠筠,韓世偉，等.毛細管氣相色譜法測定西瓜霜潤喉片中冰片和薄荷腦的含量[J].湖南師范大學學報(醫學版),2007,4(3)：27-30.

[5]鄒節明,劉江林,伍德久，等.氣相色譜法測定桂林西瓜霜中冰片及薄荷腦的含量[J].中草藥,1997,28(6)：343-345.

[6]劉宇,程璐.氣相色譜法測定檀香通脈膠囊中冰片與薄荷腦含量[J].醫藥導報,2012,31(4)：497-499.

[7]王梅娟,曹海.氣相色譜法測定胃刻寧片中薄荷腦含量[J].中國藥業,2013,22(12)：94-95.

[8]劉鈺華,梁健欽.氣相色譜法測定清火片中薄荷腦的含量[J].廣西醫學,2010,32(10)：1273-1275.