ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌攜帶blaOXA-23-like轉座子的分析

周勇　林云萬　張晶　陶霞　侯水平　白志軍　吳新偉

鮑曼不動桿菌（Ab）是一種重要的機會致病菌，能引起住院患者呼吸機相關性肺炎、血流感染、腹腔感染以及軟組織感染等。尤其是在重癥監護病房（ICU），鮑曼不動桿菌常引起暴發流行，帶來極高的致病率和致死率。目前，碳青霉烯類抗生素是治療多重耐藥鮑曼不動桿菌的重要藥物，然而在全球范圍內關于耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌的報道正在逐年增加[1-3]。因此本研究擬對ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌攜帶的blaOXA-23-like轉座子進行檢測，同時使用PFGE分析ST195菌株同源性以了解和掌握ST195菌株傳播的特征。

1　材料和方法

1.1　菌株來源

46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌由本課題組在2012年5月—2013年11月從廣州市兩家三甲醫院ICU患者中分離得到，分別是31株ST195、11株ST365、3株ST381和1株ST75耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌，所有46株菌經PCR鑒定均攜帶blaOXA-23-like基因[4]。

1.2　攜帶blaOXA-23-like轉座子的檢測

經復蘇的菌株接種于血平板，37℃孵育18 h后挑取1環菌苔于50 μl滅菌純水中充分研磨，菌懸液于100℃水浴10 min后12 000 r/min離心3 min，上清作為PCR檢測模板。擴增攜帶 blaOXA-23-like的 轉 座 子 Tn2006、Tn2007、Tn2008和 Tn2009的引物以及擴增體系和條件參考相關文獻進行[5-6]。PCR產物經1.5%瓊脂糖凝膠電泳進行分析。陽性產物送廣州昊天生物科技有限公司測序，測序結果上傳NCBI網站比對分析。

1.3　脈沖場凝膠電泳（PFGE）

使用ApaI限制內切酶進行酶切，沙門菌H9812的基因組DNA經XbaI酶切后作為分子量標準。PFGE圖像用BioNumeric 6.6軟件進行非加權組平均法（UPGMA）以及通過Dice相似度系數（容忍值設為1.5%）對31株ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌進行聚類分析，1株ST17非耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌作為對照。

2　結果

2.1　blaOXA-23-like轉座子的擴增結果

46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌都檢出blaOXA-23-like轉座子，其中42株菌檢出Tn2006，4株菌攜帶Tn2009，未檢出Tn2007和Tn2008。31株ST195菌株都檢出Tn2006，其余11株有Tn2006的是ST365；3株ST381攜帶Tn2009，剩下1株Tn2009菌株為ST75。

2.2　PFGE分型結果

圖1　31株ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌PFGE聚類分析結果，1株ST17敏感菌作為對照，ND：未檢出

圖1顯示來自B醫院的9株ST195之間的相似度達到91.6%，而A醫院的21株菌以及來自B醫院的編號20131430菌株互相之間的相似度高達94.3%，兩家醫院的ST195菌株PFGE相似度達90.8%，根據文獻鮑曼不動桿菌PFGE譜型達到87%相似度的菌株可聚為一簇，表明兩家醫院的ST195菌株有相同遺傳背景。

3　討論

本課題組之前報道了在廣州市兩家三甲醫院ICU患者血液中分離到46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌，其中ST195菌株有31株。研究結果推測ST195菌株有可能是本地區的優勢菌株[4]。此后，多篇國內發表的論文發現ST195菌株不僅已成為廣州市醫院的優勢菌株，且在國內多個地區的醫院內廣泛傳播[7-8]。有關ST195菌株傳播速度加快的原因以及其獲得blaOXA-23-like基因的途徑尚不明確，特別是目前仍無對ST195菌株blaOXA-23-like基因周圍序列的報道。

blaOXA-23-like基因的周圍序列共有五種，包括：Tn2006、Tn2007、Tn2008、Tn2008B以及Tn2009。多個研究顯示轉座子Tn2008和Tn2009是我國多個地區碳青霉烯類耐藥分離株攜帶blaOXA-23-like的重要結構[5-6]。本研究結果顯示46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌中只有4株檢出Tn2009，其余42株全部攜帶Tn2006，主要是31株ST195。本研究利用PFGE對31株ST195菌進行了分析，結果顯示來自兩家醫院的31株菌可歸為一個聚類（相似度90.8%），這個結果說明這兩家醫院分離的ST195菌株很可能來自同一克隆。

綜上所述，研究結果表明ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌能在不同醫院間克隆傳播，而且之前研究結果發現此型菌株耐藥性很強，提示我們應加強ST195菌株的監測特別是院內環境中的監測，采取必要措施防止ST195菌株在院內和院間的傳播。

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