獼猴桃皮中黃酮的提取及優(yōu)化

(棗莊學(xué)院　山東　棗莊　277000)

一、前言

(一)獼猴桃簡介

獼猴桃是山茶亞目，獼猴桃中蘊含比較多的肽形式存在的活性物質(zhì)，主要為抗氧化物質(zhì)、抗突變成分谷胱甘肽、精氨酸、天然糖醇類物質(zhì)肌醇、VC、VE、VK多種維生素、葉酸、葉黃素等多種化學(xué)成分。尤其以黃酮類物質(zhì)蘊含豐富。而且Vc儲量高以外，被稱為果中之王。具有降低兩高，降低血壓，降低血糖，延緩衰老，抗氧化，延緩炎癥引起的疼痛，抗腫瘤等作用。

1.黃酮介紹。黃酮類化合物又稱生物類或植物類黃酮，屬植物次級代謝產(chǎn)物，于各種植物和龐大真菌中廣泛存在,是天然植物成分.屬于低分子類。黃酮化合物具有多種藥理作用因其特別的理化特性如抵抗癌癥，抵抗腫瘤、抵抗衰老、抵抗心腦血管疾病、美容養(yǎng)顏等較多功效,而在當(dāng)前醫(yī)學(xué)方面，它在人類體內(nèi)系統(tǒng)循環(huán)，防治心腦血管疾病如降低血管脆性、提高通透性，抗腫瘤方面的作用日益明顯。并且有的已經(jīng)作為藥品治療改善人體健康狀況。

2.國內(nèi)外研究黃酮。近年來，國內(nèi)外研究者對獼猴桃葉、根和果實中的黃酮研討較多，如王倩等研究超聲波輔助提取法對狗棗獼猴桃葉黃酮的提取，采用了乙醇作為提取劑，獲得了黃銅提取最優(yōu)工藝，黃酮得率達(dá)9.996%；王菲等利用黃酮體外抗氧化活性得出了黃酮具有較強革除DPPH自由基的能力和還原力，可有效抑制脂質(zhì)過氧化，而他們研究的正是軟棗獼猴桃的總黃酮。Ercan Bursal等更是以總酚和總黃酮的含量研究了獼猴桃的水提取物，并且研究了他們的抗氧化能力。大量實踐表明，獼猴桃水提取物對DPPH、ABTS、DMPD和自由基有很好的清除作用，這主要和含有的多酚物質(zhì)及黃酮有關(guān)。Miyuki SHIROSAKI等對小鼠的降血糖功能的研究也是以獼猴桃葉為原料，研究表明，能顯著降低小鼠口服淀粉或蔗糖后的血糖水平和獼猴桃葉甲醇提取物有密切聯(lián)系，其作用機制可能與提取物對淀粉酶和葡萄糖苷酶的抑制作用有關(guān)。研究獼猴桃皮中黃酮提取和優(yōu)化也是在很多前輩的基礎(chǔ)上更上一步。

(二)研究目的及意義

作者認(rèn)為獼猴桃皮作為獼猴桃的副產(chǎn)物也是對于研究具有重大意義。一方面隨著人們生活水平的提高，人們對于保健更加重視，致力于提高生活品質(zhì)，黃酮類化合物作為天然生物活性成分具有很大的潛力與價值。另一方面獼猴桃作為一種資源物質(zhì)可以讓人們更加認(rèn)識到資源的生物科技利用價值。對于鮮有報道的獼猴桃皮提取黃酮的最佳工藝，采用了單因素和正交試驗來優(yōu)化了總黃酮的提取工藝，開創(chuàng)了獼猴桃活性黃酮物質(zhì)的提取也具有進步意義。

二、試驗方法

(一)工藝流程和操作要點

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。精確稱取20mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，以50% 乙醇定容至100ml。搖勻，制得 0.2mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液.分別取3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5、0ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于25ml比色管內(nèi)。再加入30%乙醇定容至10ml，加入1ml質(zhì)量濃度為5%的NaNO2，搖勻，靜置6min。加入1ml質(zhì)量濃度為10%的Al(NO3)3，搖勻，靜置6min。加入10 ml10%NaOH，以30%乙醇定容至25ml，靜置15min后在510nm波長處測定吸光度A。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以吸光度為縱坐標(biāo)，以蘆丁溶液濃度(mg/g)為橫坐標(biāo)，得回歸方程A=0.0020x+ 0.0004，R2=0.9995。

2.黃酮的提取流程。獼猴桃皮處理→干燥箱烘干至恒重→粉粹至60目→乙醇混合→超聲波輔助提取→過濾定容

3.操作要點

(1)黃酮的提取在高于80℃時，有效成分會被破壞。所以在實驗過程中要嚴(yán)格控制溫度。

(2)熱水通常在黃酮提取過程中不宜使用，因為熱水提取率較低而且提取時雜質(zhì)較多。

(3)作者探究食品級黃酮的提取工藝，在提取過程中會有部分黃酮類物質(zhì)溶出，當(dāng)然食品級黃酮允許部分雜質(zhì)存在，且黃酮酚的特征紫外吸收波長為280nm，對測定黃酮含量無明顯影響。所以可以進行試驗。

(二)單因素試驗方法

1.黃酮提取率依照不同乙醇濃度計算。準(zhǔn)確稱取干燥獼猴桃皮2.0g，分別用30%、40%、50%、60%的乙醇溶液，以料液比為1∶30在50℃下超聲提取30min后過濾，定容。測定吸光度，通過上面的回歸方程計算提取率，黃酮提取率在不同條件有一定趨勢，可確定最優(yōu)的乙醇濃度。

2.黃酮提取率依照不同料液比計算。準(zhǔn)確稱取獼猴桃皮2.0g，分別以1:10、1:20、1:30、1:40的料液比，用50%的乙醇溶液，在50℃下超聲提取30 min后過濾，定容。測定吸光度，通過上面的回歸方程計算提取率，黃酮提取率在不同條件有一定趨勢，可確定最優(yōu)的料液比。

3.黃酮提取率依照不同超聲溫度計算。準(zhǔn)確稱取獼猴桃皮2.0g，用50%的乙醇溶液，以料液比為1∶30，分別在30℃、40℃、50℃、60℃下超聲提取30min后過濾，定容。測定吸光度，通過上面的回歸方程計算提取率，黃酮提取率在不同條件有一定趨勢，可確定最優(yōu)的超聲溫度。

4.黃酮提取率依照不同超聲時間計算。準(zhǔn)確稱取獼猴皮2.0g，用50%的乙醇溶液，以料液比為1∶30，在50℃下分別超聲提取10 min、20min、30min、40min后過濾，定容。測定吸光度，通過上面的回歸方程計算提取率，黃酮提取率在不同條件有一定趨勢，可確定最優(yōu)的超聲波時間。

四、驗證試驗結(jié)果

可知，在乙醇濃度為50%，料液比為1:30，50℃下超聲提取30min，獼猴桃皮中黃酮提取率達(dá)到26.77%，高于正交試驗中提取率最大的優(yōu)化條件。通過正交試驗得出提取獼猴桃皮中黃酮的最佳工藝條件為：乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%，提取時間30min，料液比為1:30(g/mL)，超聲波溫度50℃。在最佳工藝條件下對獼猴桃皮中黃酮平行提取3次。

五、結(jié)論

本文采用超聲波輔助提取獼猴桃皮中黃酮，利用紫外可見分光光度法測定吸光度并計算提取率，優(yōu)化黃酮的最佳提取工藝。以乙醇濃度、超聲波時間、提取溫度、料液比等單因素為基礎(chǔ)設(shè)計正交試驗得出最優(yōu)提取工藝。即在1:30的料液比，加入50%乙醇，在50℃下超聲提取30min，黃酮的提取率達(dá)到26.77%。