結直腸癌患者脾多肽聯合FOLFOX4方案治療效果觀察

陳愛霞，杜杏坤，吳春曉，王梅青，薛思思

(1河北省中醫院,石家莊056006；2滄州醫學高等專科學校)

結直腸癌是一種常見的胃腸道惡性腫瘤[1]。臨床FOLFOX4化療方案是目前治療結直腸癌的最有效方案，但化療對機體有較大的毒性作用，尤其是對患者免疫系統有顯著影響。研究表明，化療聯合脾多肽注射液可保護患者細胞免疫功能，并促進其恢復[2]。脾多肽注射液是一種免疫調節藥物，可有效改變免疫功能紊亂，促進T淋巴細胞逐漸成熟，觸發并增強機體的抗感染能力。微小RNA(miRNA)是近年來發現的一類內源性、進化上高度保守的非編碼單鏈小RNA，與胚胎發育、細胞周期調控、細胞分化增殖與凋亡等生命進程緊密相關。目前，人體內的內源性非編碼miRNA會調節人體內約30%的基因表達，與腫瘤發展密切相關[3]。miR-21、miR-103、miR-200b均是miRNA家族成員，臨床實踐證明，它們作為腫瘤特異性標志物，會通過干擾基因的轉錄或翻譯等方式參與腫瘤的發展過程，在結直腸癌中表達異常[4]。目前，有關脾多肽注射液聯合FOLFOX4化療對結直腸癌患者血清miR-21、miR-103、miR-200b影響的研究較少。2014年1月～2016年12月，我們觀察了結直腸癌患者脾多肽注射聯合FOLFOX4方案化療的治療效果。現報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取2014年1月～2016年12月河北省中醫院收治的120例結直腸癌患者，男66例、女52例，年齡25～73(44.3±7.2)歲。結腸癌62例，直腸癌58例；TNM分期：Ⅱ期30例，Ⅲ期52例，Ⅳ期38例。采用隨機數字表法將患者分為觀察組與對照組各60例。兩組年齡、病理類型、病理分期等一般資料具有可比性(P均>0.05)。納入標準：①患者均符合結直腸癌的診斷標準[5]；②預期生存時間不低于6個月；③KPS評分均超過70分。排除標準：①心臟、肝、腎等重要臟器功能出現嚴重不全者；②處于妊娠、哺乳期孕婦；③接受其他免疫治療或化療者；④血常規出現異常者；⑤難以配合者。本研究經河北省中醫院倫理委員會批準。入選者均知情同意并簽訂知情同意書。

1.2治療方法對照組采取FOLFOX4方案進行全身化療。第1天：以劑量為85 mg/m2的奧沙利鉑(深圳海王藥業有限公司，國藥準字H20031048)進行靜滴，時間2 h。第1～2天，以劑量為200 mg/m2的亞葉酸鈣(江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，國藥準字H20000584)進行靜滴，時間2 h，并以400 mg/m2的氟尿嘧啶(沈陽藥大藥業有限責任公司，國藥準字H21021858)進行靜脈推注，再以600 mg/m25-氟尿嘧啶持續微量化療泵滴注22 h結束本次療程，間隔2周后再次進行化療，連續3個月。觀察組在對照組基礎上聯合脾多肽注射液進行全身化療，將0.9%氯化鈉注射液250 mL、脾多肽注射液(吉林豐生制藥有限公司，每支2 mL)6 mL進行靜滴，1次/d，連續10 d，14 d為1個周期，連續3個月。化療前與化療3個月后檢查血常規1次，每2周進行X射線鋇餐攝片1次，定期進行心臟、肝、腎等重要臟器功能檢查，注意患者的用藥反應，出現不良反應時采取相應治療措施。

1.3觀察指標①臨床療效:化療結束3個月后，依據RECIST指南[6]對患者療效進行評價,分為完全緩解、部分緩解、穩定和進展。有效率=(完全緩解+部分緩解)例數/患者總例數×100%。②免疫功能:患者在治療前與治療后3個月抽取外周靜脈血，以流式細胞儀(美國BD公司)檢測淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+)和NK細胞百分比。③血清miR-21、miR-103、miR-200b水平:于治療前與治療后3個月采集清晨空腹外周靜脈血，體積約10 mL。靜置30 min，2 000 r/min離心，時間15 min，放入Ependoff管，按照說明書步驟提取總RNA，miRNA-21(正向引物：5′-GAA ATG CCTCAC AGC TAT CGT-3，反向引物：5′-CCT CCACAA AGA GCC ACC-3′)擴增條件：95 ℃ 10 min，95 ℃15 s，60 ℃1 min，40個循環)；miRNA-103(設計莖環序列為5′-ACACTCCAGCTGGGAGCAGCATTGTACAG -3′)擴增條件：95 ℃ 10 min；95 ℃15 s，60 ℃1 min，40個循環)；miRNA-200b(正向引物：5′-UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA-3′，反向引物5′-AUCAUUACCAGGCAGUAUAAAU-3′)擴增條件：95 ℃10 min，94 ℃30 s，56 ℃20 s，70 ℃15 s，38個循環，內參選擇U6。每個獨立樣本重復3次，采用2-ΔΔCt法計算目的基因相對表達量。④不良反應：比較兩組不良反應(骨髓抑制、神經毒性、肝功能損傷、惡心嘔吐、口腔黏膜炎)發生情況。

2　結果

2.1兩組療效比較觀察組完全緩解4例，部分緩解28例，穩定20例，進展8例，有效率為53.3%(32/60)，對照組分別為0、20、28、12例，33.3%(20/60)，兩組有效率比較差異有統計學意義(χ2=4.887，P<0.05)。

2.2兩組治療前后免疫功能比較見表1。

表1　兩組患者治療前后免疫功能比較

注：與同組治療前相比，*P<0.05；與對照組治療后相比，△P<0.05。

2.3兩組治療前后血清miR-21、miR-103、miR-200b水平比較見表2。

表2　兩組治療前后血清miR-21、miR-103、miR-200b水平比較

注：與同組治療前相比，*P<0.05；與對照組治療后相比，△P<0.05。

2.4兩組不良反應比較觀察組出現骨髓抑制2例(3.3%)，神經毒性22例(36.7%)，肝功能損傷2例(3.3%)，惡心嘔吐44例(73.3%)，口腔黏膜炎0例，對照組分別為5(8.3%)、24(40.0%)、4(6.6%)、48(80.0%)、3例(5.0%)，兩組骨髓抑制發生率比較，差異有統計學意義(χ2=36.936，P<0.05)，其他不良反應發生率比較，差異無統計學意義。對兩組不良反應對癥處理后，患者均可耐受，未影響化療。

3　討論

近年來，結直腸癌的發生率及病死率明顯升高，大部分患者治療主要以化療為主。FOLFOX4方案是目前臨床最常用的化療方案之一，包括奧沙利鉑、亞葉酸鈣與5-氟尿嘧啶三種化療藥物。奧沙利鉑將DNA作為靶點，鉑原子可與DNA鏈進行互相交聯，阻礙DNA復制及轉錄[7]。奧沙利鉑與順鉑并無交叉耐藥性，與5-氟尿嘧啶聯用后療效良好。與傳統單用化療藥物相比，該方案可顯著延長患者無癥狀生存時間。有研究報道，化療在殺傷腫瘤細胞時，人體內還會形成不良反應，將會明顯抑制細胞免疫功能，還可能引起消化道反應、肝腎功能損傷[8]。

脾多肽是從正常、健康小牛的脾臟內提取制成，可調節機體的免疫功能，促進T淋巴細胞成熟，提高免疫功能，促進NK細胞的細胞毒活性，調節巨噬細胞功能。本研究結果顯示，與對照組相比，觀察組治療有效率高于對照組，差異有統計學意義，且觀察組化療前后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK等免疫功能指標差異無統計學意義，而對照組化療后免疫功能指標均低于治療前，差異有統計學意義。表明脾多肽與FOLFOX4方案聯合治療能一定程度改善患者免疫功能，提高結直腸癌近期療效，阻止病情進展，與劉曉玲等[9]關于大腸癌的研究結果相似。腫瘤患者由于腫瘤消耗、手術化療、精神壓力等原因，免疫功能常處于較低水平，而患者的免疫功能與腫瘤發生發展關系密切。脾多肽對患者免疫功能有顯著改善作用，能有效糾正免疫系統紊亂，促進T細胞成熟，加強對感染的抵抗能力。同時，脾多肽還能阻礙細胞糖酵解，切斷腫瘤的能量來源，使腫瘤細胞的生長發生停滯，停留于G0～G1期，從而加強化療的臨床效果。

隨著分子生物學技術的不斷發展，人們對miRNA的研究逐漸深入。多種miRNA在腫瘤中均出現異常表達，如結直腸癌的miR-145表達降低、胃癌中miR-155表達降低[10,11]，表明miRNA可能會參與癌基因的抑制過程，在腫瘤發展中有重要意義。miR-21是一種被廣泛研究的miRNA，在眾多胃癌、肝癌等腫瘤細胞中的表達均出現明顯上升。miR-103在多種腫瘤中表達異常，Zhang等[12]研究結果表明，miR-103可下調胃癌中小凹蛋白-1表達，提高胃癌耐藥性。直腸癌組織中miR-21、miR-103表達明顯高于癌旁組織，且miR-21表達與TNM分期等有關[13]。有研究表明，與正常人相比，miR-200b在結直腸癌患者血清中的水平顯著下調，且與組織分化程度、淋巴結轉移及生存時間相關[14]。本研究中，治療后兩組外周血miR-21、miR-103水平均明顯降低，而miR-200b明顯升高，且觀察組miR-21、miR-103水平更低，miR-200b水平更高，差異有統計學意義，說明脾多肽注射液聯合FOLFOX4化療可減弱結直腸癌患者miR-21、miR-103、miR-200b表達異常，推測脾多肽可能通過miRNA調節抑癌基因，抑制癌細胞的增殖與分化，防止病情惡化。部分化療藥物如奧沙利鉑等可改變大腸癌細胞中miRNAs表達，脾多肽注射液聯合FOLFOX4化療可提高結直腸癌患者腫瘤細胞的殺傷能力，進而改變miRNAs分子表達，提高治療有效率。本研究中不良反應經對癥處理后患者均可耐受，未影響化療。觀察組骨髓抑制發生率低于對照組，差異有統計學意義，表明觀察組治療方案安全性較高，能明顯降低不良反應，提高患者耐受能力及生活質量。

綜上所述，脾多肽注射液聯合FOLFOX4化療不僅可提高患者的免疫功能，增加對腫瘤細胞的殺傷能力，還能降低血清miR-21、miR-103水平，升高miR-200b水平，抑制癌細胞的增殖與分化。

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