術前結直腸癌活檢組織中TrkB和BDNF表達的臨床意義

李林海，劉 輝，江明萬，鄧天偉，于 雙（重慶三峽中心醫院消化內科，重慶404000）

結直腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤之一，近年來，其發病率有明顯的上升趨勢。酪氨酸受體激酶B（TrkB）是腦源性神經營養因子（BDNF）的特異性受體。研究發現，TrkB及BDNF在多種腫瘤中存在高表達，且與其侵襲、轉移相關。本研究旨在通過檢測術前結直腸癌鏡下活檢標本的TrkB和BDNF表達，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年3月至2015年5月在本院普外科行結直腸癌根治術患者共60例，所有患者術前均在本院內鏡中心結腸鏡檢查取得標本，并經病理證實。所得標本均進行常規固定、包埋、切片。60例患者中男32例，女28例；年齡28～72歲，平均58.6歲；其中有淋巴結轉移26例，無淋巴結轉移34例。TrkB兔抗人多克隆抗體、BDNF兔抗人多克隆抗體均購自武漢博士德生物工程有限公司，免疫組織化學SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.2 方法 免疫組織化學染色采用SP法，操作步驟嚴格按說明書進行。對每張切片陽性細胞的陽性強度按無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色分別記0、1、2、3分，著色面積按無著色及著色小于1/3、1/3～2/3、＞2/3分別記 0、1、2、3分，然后根據兩項記分之和判斷其結果：＜3 分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 統計學處理 采用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計數資料以率或構成比表示，比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman分析，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 TrkB和BDNF在結直腸癌中的表達 60例結直腸癌患者術前標本中，TrkB主要表達于結直腸癌的細胞質，其中陽性表達33例，陽性表達率為55.0%。BDNF主要表達于結直腸癌的細胞質和細胞膜，其中陽性表達37例，陽性表達率為61.7%。

2.2 TrkB和BDNF的表達與結直腸癌臨床病理因素的關系 TrkB的陽性表達率在臨床Ⅲ期（67.6%，23/34）明顯高于在臨床Ⅰ、Ⅱ期（38.5%，10/26），有淋巴轉移的陽性表達率（67.6%，23/34）明顯高于無淋巴轉移（38.5%，10/26），差異均有統計學意義（P＜0.05）；BDNF的陽性表達率在臨床Ⅲ期（73.5%，25/34）明顯高于在臨床Ⅰ、Ⅱ期（46.2%，12/26），有淋巴轉移的陽性表達率（73.5%，25/34）明顯高于無淋巴轉移（46.2%，12/26），差異均有統計學意義（P＜0.05）；但TrkB和BDNF的表達與患者的性別、年齡、分化程度、浸潤程度無關（P＞0.05）。見表1。

表1 TrkB和BDNF的表達與結直腸癌臨床病理因素的關系（n）

2.3 TrkB和BDNF表達的相關性 經Spearman相關性分析發現，TrkB與BDNF在術前結直腸癌患者的結腸鏡活檢標本中的表達呈正相關（r=0.389，P=0.002）。見表2。

表2 結直腸癌中TrkB與BDNF表達的相關性分析（n）

3 討 論

結直腸癌是消化系統常見的惡性腫瘤，結腸鏡檢查是發現結直腸癌的最直接方法，TrkB主要與BDNF結合，通過激活MAPK/ERK信號轉導途徑，導致腫瘤發生發展。

有研究發現，TrkB和BDNF在多種腫瘤中表達上調，郭大偉等[1]發現，TrkB和BDNF可能對肝細胞癌（HCC）細胞的存活和侵襲具有重要的支持作用，并促進HCC的發展演變。本研究發現，在結直腸癌術前標本中，侵潤深度T4期的TrkB陽性表達率高于T2、T3期，但差異無統計學意義（P＞0.05），可能與本研究中T2、T3期病例數較少有關，而BDNF的表達在T2、T3期和T4期相差不大。

在決定結腸癌預后的眾多因素中，淋巴轉移是其中重要的一個因素。早期結腸癌患者往往無癥狀或癥狀不明顯，易被忽視。手術干預作為現今治療結腸癌的主要手段，其術前評估的準確率、手術方案的符合率一直是臨床工作者關注的重心。由于多層螺旋CT等技術的發展，對結腸癌術前評估已有了極大的提高，特別是在腫瘤浸潤、遠處轉移上的準確率已得到廣泛認可，但其對淋巴結轉移的判斷上卻有一定的局限性[2-3]。SASAHIRA等[4]研究發現，TrkB的陽性表達與口腔鱗狀細胞癌的淋巴轉移相關。趙梅莘等[5]通過對術前胃鏡下胃癌活檢組織標本的檢測發現，TrkB的免疫組織化學表達與胃癌的淋巴結轉移相關。PATANI等[6]發現，BDNF陽性表達與乳腺癌的淋巴轉移相關。本研究選取結直腸癌術前標本，通過免疫組織化學的方法檢測TrkB和BDNF的表達，結果發現，有淋巴轉移的TrkB和BDNF陽性表達率明顯高于無淋巴轉移，且臨床分期越晚，TrkB和BDNF陽性表達率越高，提示TrkB和BDNF的表達與結直腸癌的淋巴轉移相關。

SASAHIRA等[7]發現，VEGF-A和VEGF-C能顯著誘導微血管和淋巴管的生成，從而促進腫瘤的進展和淋巴轉移。YU等[8]的研究結果顯示，TrkB可能促進了新生淋巴管形成。有研究發現，BDNF與TrkB結合后，通過誘導VEGF-A和VEGF-C的表達升高，從而導致血管和淋巴管生成增加，促進了腫瘤的侵襲及淋巴轉移[9-11]。郭大偉等[1]發現，在晚期原發性肝癌中BDNF與TrkB的表達較高，與臨床病理分期呈正相關。本研究結果發現，術前結腸鏡下結直腸癌活檢組織中BDNF與TrkB 的表達呈正相關（r=0.389，P=0.002），提示 BDNF與TrkB可能通過自分泌途徑，誘導新生血管和淋巴管生成增加，促進腫瘤的侵襲和淋巴轉移。

綜上所述，聯合檢測術前結直腸癌患者的結腸鏡病檢標本TrkB和BDNF表達，有利于判斷結直腸癌的臨床分期及淋巴轉移，為病情的評估、治療方案的擬定提供客觀依據。

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[5]趙梅莘，丁士剛，劉琳娜，等．術前胃鏡下胃黏膜活檢組織TrkB、TRIM29表達對胃癌淋巴結轉移的預測價值[J]．中華醫學雜志，2012，92（6）：376-379．

[6]PATANI N，JIANG WG，MOKBEL K.Brain-derived neurotrophic factor expression predicts adverse pathological&clinical outcomes in human breast cancer[J].Cancer Cell Int，2011，11（1）：23.

[7]SASAHIRA T，KIRITA T，KURIHARA MA，et al.MIA-dependent angiogenesis and lymphangiogenesis are closely associated with progression，nodal metastasis and poor prognosis in tongue squamous cell carcinoma[J].Eur J Cancer，2010，46（12）：2285-2294.

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[11]SASAHIRA T，UEDA N，YAMAMOTO K，et al.Trks are novel oncogenes involved in the induction of neovascularization，tumor progression，and nodal metastasis in oral squamous cell carcinoma[J].Clin Exp Metastasis，2013，30（2）：165-176.