電化學發光免疫法定量檢測乙肝病毒的臨床應用

陸正賢，倪沈玨，曹利華

（江蘇啟東市人民醫院檢驗科，江蘇 南通 226200）

乙型病毒性肝炎在我國發病率比較高，我國總人口中，約有10%的人口為乙肝病毒攜帶者，且肝癌患者中，90%左右患者均存在乙型肝炎感染史；全球范圍內約有3億人攜帶有乙型肝炎病毒，也是肝硬化、慢性肝炎誘發的主要原因，所以在乙型肝炎防治中，早期診斷可為及時治療提供依據[1-2]。在乙肝病毒感染檢測中，乙肝病毒標志物是直接依據，所以能夠對乙型肝炎病毒標志物結果準確反映出來的檢測方法的應用至關重要?，F階段，在乙肝病毒標志物檢測中，臨床中主要采用酶聯免疫吸附法與電化學發光免疫法[3]。本組研究針對本院29 239例疑似乙型肝炎患者進行研究，對電化學發光免疫法檢測的臨床應用價值進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2016年1月～2016年12月期間29 239例疑似乙型肝炎患者進行研究，其中男15 374例，女13 865例，年齡1～100歲，平均（51.7±12.6）歲。本組研究經本院倫理委員會批準，所有患者及家屬均對本次研究知情，且簽署了知情同意書；排除精神精病者、有出血傾向者、凝血功能障礙者及本次研究依從性差者。

1.2 方法 電化學發光免疫法：儀器E601型全自動電化學發光分析儀，試劑為原裝配套試劑盒。清晨抽取患者空腹靜脈血，在4℃條件下以4 000 r/min離心速率離心6 min，將血清分離出后，用電化學發光分析儀定量檢測，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。HBsAg定值參比血清由衛生部臨床檢驗中心提供，批號200203；分別取濃度為0.1ng/ml、0.3 ng/ml、0.7 ng/ml的HBsAg定值參比血清，倍比稀釋用陰性血清，按照1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32的比例用陰性血清對定值血清進行稀釋后，用電化學發光免疫法進行檢測。

1.3 觀察指標 用電化學發光免疫法檢測方法對乙肝病毒五種標志物的陽性檢出率和不同濃度HBsAg定值參比血清的最低稀釋濃度進行觀察。五種標志物分別為乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗體（抗-HBs）、乙肝e抗體（抗-HBe）、乙肝核心抗體（抗-HBc）。

2 結果

2.1 電化學發光免疫法檢測中，HBsAg陽性檢出數為17 933例，陽性率61.33%（17 933/29 239）；抗-HBe陽性檢出數為7 024例，陽性率24.02%（7 024/29 239）；抗-HBs陽性檢出數為14 620例，陽性率50.00%（14 620/29 239）；HBeAg陽性檢出數為12 876例，陽性率44.04%（12 876/29 239）；抗-HBc陽性檢出數為18 908例，陽性率64.67%（18 908/29 239）。

2.2 電化學發光免疫法檢測中，不同濃度（0.1 ng/ml、0.3 ng/ml、0.7 ng/ml）的HBsAg定值參比血清稀釋后檢測的最低濃度分別為0.13 ng/ml、0.19 ng/ml、0.63 ng/ml。

3 討論

乙型肝炎病毒是誘發乙型病毒性感染的根本原因，乙型病毒性肝炎屬于世界性疾病，且在我國，該病的發病率比較高[4]。發病早期，該病癥狀并不明顯，所以在診斷時容易出現誤診、漏診的情況，往往在癥狀明顯時才能診斷出，但此時病情已發展至中晚期，需要給予患者持續性治療，加重患者精神負擔、經濟負擔及身體負擔[5-6]。在對乙型病毒性肝炎檢測中，乙肝病毒標志物檢測是關鍵，用于乙肝病毒早期檢查與鑒別，有利于乙型病毒性肝炎的早期診斷，為及時治療及避免病情惡化提供了依據[7]。且隨著HBV病毒新變異株的不斷出現，在檢測方法方面也需要不斷的改進，所以在乙肝五項指標檢測模式上也必呈現出多樣化的發展趨勢。

臨床中對乙型病毒性肝炎診斷時，酶聯免疫吸附法是傳統檢測方法，可實現機體對HBV感染免疫反應狀態的檢測，具有方便、快捷、價格低等優勢，在大批量乙型病毒性肝炎篩查中比較適用[8]。但是該檢查方法在檢測中應用只能進行定性分析，且對部分弱陽性患者復查時可能出現陰性情況，且人為因素對酶聯免疫吸附法應用于乙肝病毒血清標志物檢測時，影響較大，例如終止反應后延時比色時間、加樣后酶結合物間隔時間、反應溫度及洗板次數等，導致檢查結果失準[9]，出現漏診情況，因無法定量檢測，所以對檢測真實濃度無法得知，對低水平HBV感染指標無法檢出，也無法實現對HBV感染進行動態觀察。而電化學發光免疫法是以電化學發光劑標記抗原（抗體），以三丙胺為電子供體，在電場中因電子轉移而發生特異性化學發光反應，是化學發光與電化學的結合應用實現對乙肝病毒標志物的檢測[10]。繼放射免疫、熒光免疫、酶免疫、化學發光免疫后，電化學發光免疫分析技術成為新一代標記免疫測定技術，該技術不使用放射性物質，即可在快速檢測、自動化及靈敏性等方面表現出巨大的潛能與優勢，在生物醫學領域內已經得到廣泛應用，尤其是臨床醫學領域內，使醫學診斷水平得到極大的提升。目前，在標記免疫測定方面，電化學發光免疫法屬于比較先進的技術，具有重復性好、檢測靈敏度高、安全無毒等優勢[11]。在實際檢測中，該檢測技術采用的固相載體為順磁性微粒，具有較大的比表面積，所以反應面積也相應增大，加之標志物循環利用，發光強度大、時間長，因此檢測靈敏度比較高[12]。諸多研究結果顯示，電化學發光免疫法定量檢測乙肝病毒的優勢在于高度敏感、測試范圍寬、特異性強、重復性好，試劑穩定、無毒無害、無污染、有效期長，操作簡單、易于自動化、耗時短等方面。在乙肝五項指標檢測中，電化學發光免疫法定量對HBsAg檢測中，HBV感染后HBsAg最早出現于血液循環中，以高濃度長時間存在，屬于最常用的標志物；抗-HBs為保護性抗體，其存在表明乙肝的恢復以及曾經接種過乙肝疫苗；對HBeAg定量檢測中，HBV傳染性高及復制性強可通過該指標來判斷；對抗-HBe定量檢測中，該指標可反映出HBeAg的濃度，即可作為乙肝治療效果的評價指標；對抗-HBc定量檢測，該指標反應的是HBV既往感染情況，是HBV感染后最早出現的抗體。從本組研究結果看，陽性檢出率方面，電化學發光免疫法檢出HBsAg、抗-HBe、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc為61.33%、24.02%、50.00%、44.04%、64.67%，提示該檢測方法在乙肝病毒五項檢測指標中，陽性檢出率均比較高。

綜上所述，在乙肝病毒定量檢測中，電化學發光免疫法對乙肝病毒標志物的高檢出率和高靈敏度，為乙型病毒性肝炎的臨床診治提供了可靠的依據。