新生豬源沙門氏菌耐藥性及耐藥基因的研究

沈陽工學院生命工程學院 113122

1 材料與方法

（1）材料。菌株來源：2017年6月～2017年10月抽取某養殖場150份新生豬豬肉樣品；藥敏質控菌沙門氏菌C79-13及陽性對照菌株。試劑：PCR試劑（北京百泰生物技術有限公司），實驗所需引物系自主合成，藥敏紙片（北京蘭博瑞生物技術有限公司），具體包含慶大霉素、復方新諾明、鏈霉素、環丙沙星、氯霉素、壯觀霉素、四環素、諾氟沙星、阿米卡星以及萘啶酸共10種。儀器：DYY-70型號電泳儀、TGL-16G臺式離心機、DHP-9048型號恒溫培養箱等。

（2）方法。將采集的150份新生豬豬肉樣本逐一置于滅菌袋內，加入培養基共同保存。新生豬豬肉樣本保存時間不得超出12小時。

細菌分離方法。將樣本置于含BPW培養液的無菌密封袋內保存，于37℃條件下搖床過夜。第二天，吸取1mL BPW前增菌液至改良肉湯半固體培養基表面，置于42℃恒溫箱內持續培養24小時。培養后從培養基中挑取白色可疑菌落，采用三區劃線法進行處理，于37℃條件下繼續培養24小時。采用PCR鑒定法鑒定疑似沙門氏菌，以Stn的核苷酸序列設引物。PCR反應條件為：94℃5min預變性處理，保持溫度不變，預變性45s后轉為55℃條件，持續退火45s；調整至72℃延伸30s，經過30個循環。最后于72℃條件下持續延伸10min。電泳方法選用瓊脂糖凝膠，電泳后回收DNA膠，所得產物用于DNA測序。標本血清型鑒定選用玻片凝集法，新生豬源沙門氏菌的藥敏試驗采用K-B法進行。

2 結果

（1）新生豬源沙門氏菌鑒定結果。本組150份新生豬豬肉樣本經改良肉湯半固體培養基、XL74培養基兩輪篩選后，分離出24株可疑沙門氏菌（表面可見黑色中心，而且周圍可見透明暈環菌落）。經PCR鑒定（Stn基因）及電泳產物回收測序后，確定21株沙門氏菌。新生豬源沙門氏菌的分離率為14.00%。

（2）新生豬源沙門氏菌的血清型鑒定結果。21株新生豬源沙門氏菌中，共鑒定出6種血清型，其中腸炎沙門氏菌分離率最高，占比25.14%，其他優勢血清型包含徳爾卑血清型（21.25%）和里森沙門菌（13.62%）。

（3）新生豬源沙門氏菌的耐藥性。21株新生豬源沙門氏菌的10種抗生素藥敏分析結果顯示，分離菌對10種抗菌藥物的耐藥性各不相同：新生豬源沙門氏菌對氯霉素（72.45%）、慶大霉素（68.26%）和壯觀霉素（65.28%）的敏感性較高，而對環丙沙星（98.75%）、鏈霉素（94.23%）和阿米卡星（87.69%）表現為高耐藥。其中，3株新生豬源沙門氏菌僅耐1種藥物，而18株新生源沙門氏菌耐2種以上抗生素。

（4）新生豬源沙門氏菌的耐藥基因。本組10種耐藥基因中，有5種經PCR擴增出相應大小的目的片段。其中，磺胺類耐藥基因包含sulII和sulI兩種，后者檢出率最高，為45.62%；喹諾酮類耐藥基因以parC為主，檢出率為97.46%；氯霉素耐藥基因floR為47.26%。

3 討論

沙門氏菌抗原性復雜，耐藥性強，沙門氏菌感染為豬安全養殖及食物污染控制帶來諸多不便。為了評估新生豬源沙門氏菌的耐藥性及耐藥基因，本研究將150份新生豬豬肉標本作為研究對象，結果表明：150份豬肉樣本中共分離出21株沙門氏菌，分離率為14.00%。新生豬源沙門氏菌對不同抗生素的耐藥程度各不相同，其中高耐藥主要包含環丙沙星（98.75%）、鏈霉素（94.23%）和阿米卡星（87.69%），而3株新生豬源沙門氏菌僅耐1種藥物，其余18株新生源沙門氏菌耐2種以上抗生素。這一結果表明新生豬源沙門氏菌的耐藥現象較為明顯。

PCR結果顯示：磺胺類耐藥基因sulII、sulI（45.62%），喹諾酮類耐藥基因parC （97.46%），氯霉素floR（47.26%）。通過對耐藥性及耐藥基因的對比發現，新生豬源沙門氏菌的耐藥性與耐藥基因存在密切關聯。

4 結論

綜上所述，新生豬源沙門氏菌耐藥現象較為明顯，而且對環丙沙星、鏈霉素及阿米卡星的耐藥性較高。因此，對新生豬的沙門氏菌感染治療中應慎用上述抗生素。此外，養殖場應加強沙門氏菌的感染預防，一旦發生感染，應遵循交叉用藥原則，避免因抗生素濫用導致沙門氏菌耐藥率持續增長。