伊曲康唑膠囊近紅外定性鑒別模型的建立

1.云南省曲靖市食品藥品檢驗檢測中心，云南　曲靖　655000；2.云南省曲靖市婦幼保健院，云南　曲靖　655000

近紅外光譜(Near Infrared Spectroscopy, NIR)介于可見光譜與中紅外光譜區間的電磁波，波數范圍約為12000～4000 cm-1。主要是由O-H、N-H、C-H、S-H等含氫基團振動光譜的倍頻及合頻吸收產生，譜帶寬，重疊較嚴重，而且吸收信號弱，信息解析復雜。由于該技術方便快捷，樣品無需進行預處理，適用于在線分析及現場篩查等，在制藥過程控制、藥物分析、中藥分析及打擊假劣藥品中得到了廣泛的應用。

伊曲康唑膠囊，商品名稱為斯皮仁諾，是系統性抗真菌藥，對常見的真菌, 如念珠菌和曲霉菌口服有效，也是目前國內外臨床用于治療系統性真菌感染最重要的三唑類衍生物的抗真菌藥物，臨床用于皮膚科、婦科、眼科和系統性真菌感染，是治療“真菌感染”的良藥。由于該品種在全國的生產廠家較少，利潤空間較大，市場銷售價格較高。一些不法分子把目光盯在高附加值高科技含量的斯皮仁諾上，外包裝仿冒十分逼真，通過肉眼很難鑒別。近年以來，在市場上發現了多批次的假冒產品，筆者根據近年市場制假販假的特點，收集了該品種的近紅外光譜圖，根據正、偽品近紅外譜圖的不同對斯皮仁諾進行初步篩選，然后進行實驗室確認，以提高陽性率的檢出。

1　儀器與材料

1.1儀器Matrix-F傅里葉變換車載近紅外光譜儀(含手持光纖探頭，布魯克公司的OPUS5.0光譜處理軟件，德國布魯克公司)；LC-20A型高效液相色譜儀(島津)；電子天平(梅特勒AE100)。

1.2材料伊曲康唑對照品(規格：100 mg，含量為99.2%，批號：100631-201402，中國食品藥品檢定研究院)，乙腈為色譜純，其余所需試劑和試藥均為分析純。正品伊曲康唑膠囊(批號：170613161、170614162、170207070，西安楊森制藥有限公司)；偽品伊曲康唑膠囊(批號：160419389、170113171、160408510)由市食品藥品監督管理局稽查支隊提供，經協查函確認為假藥。

2　方法與結果

2.1結果驗證本品參照《中國藥典》(2015年版二部)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠(BDS 3μm或效能相當的色譜柱)為填充劑；以乙腈-0.02 mol/L硫酸氫四丁基銨溶液(40∶60)為流動相；檢測波長為225 nm，理論板數按伊曲康唑峰計算不低于3000，伊曲康唑峰與相鄰雜質峰之間的分離度應符合要求記錄色譜圖(如圖1所示)。

結果顯示，正品伊曲康唑膠囊(批號：170613161、170614162、170207070)，含量分別為101.5%、102.0%、102.3%，偽品伊曲康唑膠囊(批號：160419389、170113171、160408510)，含量均為0.0%，證明偽品中不含有效成分伊曲康唑，均判定為假藥。

2.2近紅外光譜采集測試條件：分辨率為8cm-1；樣品累積掃描次數為32 Scans；背景累積掃描次數為32 Scans；光譜范圍為12000～4000cm-1。每批次的6粒樣品測定6張光譜。測試方法為將光釬探頭頂住泡罩，隔鋁塑直接測定。環境條件為溫度20℃，濕度65%。

2.3光譜圖預處理方法的優化及不同差異利用OPUS軟件所提供的光譜圖預處理方法，以閾值(D)、標準偏差(Sdev)和平均光譜距離(MD)為指標，探索伊曲康唑膠囊模型參數經不同預處理方法所產生的影響后，將原始光譜和不同預處理的光譜圖進行比較發現，該品牌藥品采用一階導數+矢量歸一化法(平滑點17)的預處理方法較為合理。閾值(D)、標準偏差(Sdev)和平均光譜距離(MD)均較小，正品、偽品的區分度較高，對樣品的預測結果較其他預處理方法所得結果較為準確。

2.4定性模型的建立和驗證根據正品、偽品譜圖的區別，通過不斷優化譜段、分層處理、平滑點和因子選擇，采用Selectivity Report方式驗證，選擇性S值是用來考慮模型好壞的一個重要指標，要求最終模型的S均大于1。此模型驗證結果為S大于1，閾值大于匹配度，均能將所有品種全部區分，建立品牌伊曲康唑膠囊近紅外光譜定性模型。本研究方法建立的模型參數為一階導數+矢量歸一化的預處理方法，平滑點數為17，特征譜段為7745～4425cm-1，光譜距離計算采用標準化法。

3　討論

3.1建模條件的評價通過OPUS5.0光譜數據分析軟件，樣品在特征譜段為7745～4425cm-1范圍內，利用一階導數+矢量歸一化的預處理方法(平滑點數為17)進行處理后，逐一比較分析正品和偽品參比光譜的匹配值，待測樣品光譜與參比光譜不匹配。

3.2原輔料的改變對譜圖的影響藥品的近紅外圖譜是原料和輔料的疊加圖譜，不管是原料改變還是輔料改變，近紅外圖譜都將發生改變，由于工藝改變或原輔料變化、物料配比造成的樣本差異，可反映在近紅外圖譜上。不同廠家生產的樣品，因其生產工藝、原輔料等方面的不同，均會造成近紅外光譜存在著較大的差異；而同一廠家生產的樣品，在其生產工藝較穩定的前提下，則近紅外光譜具有明顯的同一性。

3.3模型的評價由于“一廠一品一規”的定性模型具有高專屬性和高靈敏度，同一品規的藥品，所建立的模型對所建模型的企業品種具有專屬性，若企業改變了生產工藝或原輔料，所建模型均會提示“不通過”，在打擊地下窩點的制假販假中起著關鍵作用，故筆者選取品牌廠家生產的品牌品種建立定性模型，能夠在很短時間內發現其仿冒藥品或藥品質量方面的顯著性差異，而對于如伊曲康唑顆粒、伊曲康唑分散片等相關的三氮唑類藥品沒有專屬性與適用性。

3.4模型的有效性根據正、偽品近紅外光譜存在的較大差異，利用近紅外光譜系統及OPUS數據分析軟件對伊曲康唑膠囊進行篩查，再對篩查為不合格的樣品進行實驗室驗證，證明利用近紅外光譜系統快速鑒別伊曲康唑膠囊真偽的方法切實可行。

綜上，通過對特定廠家的品牌藥品的正品掃描，確定其近紅外圖譜，通過比較同源藥品近紅外光譜特征譜段存在的差異，可以現場篩查發現可疑藥品，拓展了近紅外光譜藥品快速鑒別技術的應用范圍，在基層藥品打假中發揮了重要作用。該定性模型鑒別方法直觀、操作簡單、快速有效、實用，可彌補近紅外模型的不足，為近紅外快速鑒別技術的推廣應用提供新思路，將藥品的行政監督和技術監督有機融為一體，為執法人員提供合理有效的技術支持，節約檢驗成本，更好地保障人民群眾的用藥安全。

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