不同牛奶體細胞數下牛奶體細胞分型及奶牛泌乳性能變化

汪 悅 蔣林樹* 熊本海

(1.北京農學院動物科學技術學院，奶牛營養學北京市重點實驗室，北京 102206；2.中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所，北京 100193)

對于奶牛乳腺炎癥，特別是亞臨床乳腺炎的診斷通常是基于體細胞數(SCC)和細菌學檢查。SCC是基于牛奶中細胞總數量對炎癥進行度量。細菌學檢查雖然可以指出感染的確切病因，但是耗時且需要經驗豐富的人員操作。現已經提出聚合酶鏈反應作為細菌學檢查的替代方法，檢測快速，但費用昂貴[1]。已有大量文獻對區分感染和未感染乳腺的幾種不同SCC臨界值進行了評估和討論[2]。歐盟規定奶牛健康乳腺的SCC<200 000個/mL，而德國獸醫協會(DVG)建議將SCC閾值定為100 000個/mL[3-4]。我國的生鮮奶收奶標準為SCC<400 000個/mL[5]。不同的地域環境、自然氣候對SCC影響較大，且SCC會因哺乳期的狀況、年齡、擠奶的時間和頻率，特別是乳腺感染狀態而隨時發生變化[6]。因此，需要更為敏感的炎癥指示物來加強奶牛場乳腺炎的管理。最近有幾項研究揭示了鑒別牛奶中免疫細胞在診斷奶牛乳腺炎癥中的優勢。Loken等[7]研究表明，除了SCC的確定外，體細胞的分型更有利于對奶牛乳腺的實際健康狀況進行更詳細的描述。在乳腺中，乳免疫細胞的數量和分布在乳腺內的炎癥反應中起重要作用。淋巴細胞調節免疫反應的誘導和抑制，通過入侵病原體的特異性生物膜受體識別抗原。巨噬細胞能夠攝取細菌、細胞碎片和殘留乳成分。多形核嗜中性白細胞(PMN)的主要任務是在急性炎癥過程開始時抵御入侵細菌。然而每種細胞類型的比例隨炎癥程度不同變化很大。Auldist等[8-9]研究表明，在健康牛奶中，巨噬細胞是主要的細胞類型，淋巴細胞是健康乳腺內的主要細胞群體。不同的細胞分型技術對體細胞分型結果會造成一定的影響。Bannerman等[10]研究了不同病原體感染以及不同感染過程中的細胞模式。結果表明，以金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)為主的病原體引起的急性炎癥乳腺中，PMN是主要的細胞類型，占乳腺總白細胞總數的90%。相比之下，在由凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)引起的慢性乳腺炎中，PMN數量甚至低于未感染乳區，而巨噬細胞數量較高。乳腺健康程度與泌乳性能有密切聯系，不同的病原體在乳腺中引起不同的免疫應答。根據病因，在SCC變化趨勢和乳成分中都能觀察到明顯差異。盡管有關SCC與乳成分間關聯的文獻很豐富，但很少有研究涉及乳腺炎特定病原體與乳成分變化之間的關系。因此，本試驗通過研究不同牛奶SCC下牛奶體細胞分型特點，進而對奶牛乳腺健康狀況以及奶牛泌乳性能做出更詳細的評估。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與樣品采集

本試驗采用的牛奶樣品采集自北京誠遠盛隆養殖有限責任公司的荷斯坦奶牛。排除具有明顯臨床癥狀的奶牛(例如子宮炎、臨床乳腺炎、腹部置換、子宮脫垂、乳熱、臨床酮癥)。選擇102頭臨床健康荷斯坦奶牛[胎次(2～3胎)、泌乳天數(152±27) d、產奶量(27±3) kg/d]，收集牛奶樣品。收集時間為2017年6月5日，共擠奶2次，分別為08:00和19：00。采集牛奶樣品前，對乳腺外部進行藥浴消毒，用單獨的毛巾擦拭清洗，然后再次用酒精清洗。棄去頭3把奶后，將約50 mL來自每頭奶牛4個乳區的牛奶樣品混合收集在無菌管中，隨后將牛奶樣品分裝成3個子樣品，分別用于牛奶體細胞分型、細菌學檢查及乳成分檢測，最后將所有樣品儲存于-80 ℃冰箱中。

1.2 試驗材料

1.2.1 主要儀器

流式細胞儀(NovoCyte 3130，美國ACEA公司)、微量加樣器和加樣頭、流式上樣管、15 mL離心管、離心機、乳……