紫景天對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織病理作用的研究

王曉峰，王 偉，王會(huì)俞，張 楚，張?zhí)旆?，何金婷

(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 1.口腔科；2.神經(jīng)內(nèi)一科,吉林 長(zhǎng)春130033)

牙周炎 (CP) 是一種慢性炎癥性疾病,是由齦下微生物和宿主防御之間的穩(wěn)態(tài)破壞引起[1],當(dāng)牙周組織被破壞時(shí),牙周袋內(nèi)的微生物負(fù)荷壓倒系統(tǒng)的主動(dòng)防御機(jī)制[2]。針對(duì)此種狀況，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)牙周炎的藥物治療主要是牙周袋內(nèi)用藥，而此類藥物主要以抗生素為主，近幾年研究顯示抗生素的長(zhǎng)期使用可加快細(xì)菌的進(jìn)化，出現(xiàn)耐藥菌株，也可破壞人體內(nèi)正常菌群，造成菌群失調(diào)等副作用。因此，我們進(jìn)行了紫景天總黃酮凝膠對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織病理作用的相關(guān)研究。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

二甲苯(北京化工廠，批號(hào)：110315)；冰醋酸(西隴化工股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：120302)；磨牙機(jī)(吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院口腔科提供)；Wistar大鼠，體重180-230 g，雌雄各半(吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。

1.2 樣品的純度、來(lái)源

濃度分別為1.0%、0.5%、0.25%的紫景天總黃酮凝膠；基質(zhì)16%泊洛沙姆407(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室，批號(hào)：20120725)以及陽(yáng)性對(duì)照組藥物：復(fù)方牙痛酊(貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，批號(hào)：20120102)。

1.3 絲線結(jié)扎加牙齦卟啉菌感染復(fù)合法建立大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型

取Wistar大鼠60只，雌雄各半，分籠圈養(yǎng)，隨機(jī)取出50只大鼠，用牙齦卟啉單胞菌的鹽水預(yù)處理2小時(shí)后的4號(hào)無(wú)菌絲線若干，雙股在同一位置打結(jié)3次后，再穿過(guò)大鼠的第一和第二磨牙之間的間隙，再將絲線環(huán)繞過(guò)第一磨牙，于其腭側(cè)間隙結(jié)扎，然后打結(jié)3次，將打好的結(jié)頭埋入牙齦組織下，以便使線結(jié)持續(xù)刺激到牙齦組織。在第3，5，7天將等量牙齦卟啉單胞菌的鹽水注射到大鼠頰腭側(cè)埋有絲線結(jié)頭的齦下，于處理大鼠后的第3周通過(guò)國(guó)際通用標(biāo)準(zhǔn)和觀察牙齦癥狀評(píng)價(jià)牙齦指數(shù)并記錄牙齦指數(shù)。第4周隨機(jī)取動(dòng)物2只，通過(guò)獲取打結(jié)部位的上頜磨牙及其牙周組織進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，以確認(rèn)實(shí)驗(yàn)組大鼠模型的成立。

1.4 紫景天總黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎的治療作用

1) 未處理的10只大鼠為正常對(duì)照組(A 組)：對(duì)牙齦不做任何處理，其他方面同模型組大鼠。將上述大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型動(dòng)物隨機(jī)的分成4組：模型對(duì)照組(B 組)以及陽(yáng)性對(duì)照藥復(fù)方牙痛酊組(C組)。根據(jù)紫景天總黃酮給藥的劑量的不同濃度分為實(shí)驗(yàn)D 組(給予1.0%紫景天總黃酮)，實(shí)驗(yàn)E 組(給予0.5%紫景天總黃酮)及實(shí)驗(yàn) F組(給予0.25%紫景天總黃酮)，D 、E和F組分別牙齦涂擦紫景天總黃酮，每日2次，0.5 ml/次/只，次間隔8 h，連續(xù)涂藥14天。C組牙齦涂擦復(fù)方牙痛酊，方法同紫景天藥物實(shí)驗(yàn)組。

2)牙齦指數(shù)(GI)和齦溝出血指數(shù)(SBI)：于給藥后第15天，以3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉，觀察并記錄藥后牙齦指數(shù)及齦溝出血指數(shù)，然后腹主動(dòng)脈取血，測(cè)量血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH)、丙二醛含量(MDA)。

3)牙周組織病理學(xué)觀察：在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后的第5周處死各組大鼠進(jìn)行觀察，首先將獲取的上頜骨標(biāo)本，經(jīng) PBS(pH=7.2)溶液清洗2遍后，用 10%甲醛固定上頜骨標(biāo)本24 h，將標(biāo)本浸泡在70%乙醇溶液中，將組織修正后，通過(guò)脫鈣、梯度脫水、石蠟包埋技術(shù)處理組織，然后將牙齒進(jìn)行平行于牙長(zhǎng)軸的近遠(yuǎn)中方向切片處理，獲取牙體牙周聯(lián)合切片，厚度約為5 μm。將切片進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色，通過(guò)光鏡組織學(xué)觀察并記錄組織學(xué)變化，分析結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 外部行為觀察和組織病理學(xué)檢查

由圖1結(jié)果所見(jiàn)，肉眼觀察：正常對(duì)照組動(dòng)物(如圖A組)牙齦色粉紅，質(zhì)韌，菲薄且緊貼牙面；模型組動(dòng)物可見(jiàn)牙面上有大量牙石菌斑，且牙齦色暗紅質(zhì)地疏松，探之易出血，牙周袋形成。第4周處死兩只動(dòng)物，取牙及牙周組織進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，確認(rèn)“牙周炎模型” 復(fù)制成功。第5周開(kāi)始給藥，此時(shí)模型組動(dòng)物組，牙周袋可見(jiàn)進(jìn)一步加深，內(nèi)有食物殘?jiān)奂例l組織出血、糜爛、溢膿等癥狀加重；給藥兩周后觀察可見(jiàn)模型對(duì)照組(B 組)癥狀加重，紫景天藥物實(shí)驗(yàn)組(D、E、F組)及陽(yáng)性對(duì)照藥復(fù)方牙痛酊組(C 組)動(dòng)物牙齦顏色變淺，出血減少，牙周袋變淺。

正常對(duì)照組動(dòng)物(A組)牙周軟組織細(xì)胞大小、形態(tài)及分布正常，鏡下可見(jiàn)大鼠的牙周膜的附著點(diǎn)位于其牙齒的釉牙骨質(zhì)界處，牙槽骨的骨小梁排列致密，且不可見(jiàn)牙槽骨吸收破壞等變化。模型組對(duì)照組(B組)牙周組織可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞；溝內(nèi)上皮出現(xiàn)糜爛潰瘍，上皮部分向根方向增生，牙周膜附著位于釉牙骨質(zhì)界下方，可見(jiàn)深牙周袋形成；牙槽骨內(nèi)發(fā)現(xiàn)骨吸收陷窩，判斷出現(xiàn)破骨細(xì)胞性骨吸收，并可見(jiàn)中重度牙周炎的組織病變。陽(yáng)性對(duì)照復(fù)方牙痛酊組(C組)大鼠的牙周組織雖然依然有炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，但是其數(shù)量明顯減少。C組病理變化與陽(yáng)性藥相似；F組大鼠的軟組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)可見(jiàn)明顯減輕，牙槽骨吸收狀態(tài)處于靜止期，可見(jiàn)牙槽骨中的破骨細(xì)胞有明顯減少，且牙槽骨周圍可見(jiàn)大量的成骨細(xì)胞增生，并且有新生纖維結(jié)締組織大量生成，牙周袋的變化顯示變淺或消失，D組炎性病變明顯大于E組，而E組變化明顯大于F組，但是D、E、F組炎性變化明顯小于B組，這些顯示牙周組織正處于修復(fù)階段。

圖1 紫景天對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織的組織病理學(xué)改變

2.2 對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠牙齦指數(shù)、齦溝出血指數(shù)的影響

由圖2、3結(jié)果可見(jiàn)，紫景天總黃酮1.0%和復(fù)方牙痛酊均可明顯降低牙齦指數(shù)及齦溝出血指數(shù)，明顯減輕牙周炎損傷程度，與模型對(duì)照組比較均有顯著差異，對(duì)大鼠“實(shí)驗(yàn)性牙周炎”有明顯的治療作用。

2.3 對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎大鼠血清中SOD、GSH、MDA的影響

由圖4、5結(jié)果可見(jiàn)，模型組血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶比對(duì)照組明顯降低，丙二醛含量明顯升高，紫景天總黃酮1.0%、0.5%和復(fù)方牙痛酊均可明顯升高大鼠血清中超氧化物歧化酶(P<0.01)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(P<0.05)，降低丙二醛含量。表明紫景天總黃酮及復(fù)方牙痛酊均可明顯減輕對(duì)大鼠“實(shí)驗(yàn)性牙周炎”的損傷程度，對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎具有顯著的治療作用。

與治療前比較 *P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

與治療前比較 **P<0.01；***P<0.001。

3 討論

盡管在目前的醫(yī)學(xué)和整體健康教育方面有了長(zhǎng)足的進(jìn)步,但是慢性牙周炎仍然是一種廣泛的疾病，失去牙齒是這種特殊疾病最嚴(yán)重的并發(fā)癥[3]，該病的特點(diǎn)是由于牙周韌帶和相鄰支撐骨的破壞而失去臨床附著。它普遍存在于成人之中[4]，它的主要病理變化為牙槽骨的病理性吸收。現(xiàn)如今對(duì)牙周炎治療的藥物，主要著力于控制或消除炎癥并且進(jìn)一步促進(jìn)牙周組織的再生成。臨床上主要應(yīng)用藥物是用于控制炎癥并且阻斷牙槽骨吸收和促進(jìn)骨再生。目前臨床上牙周炎的藥物治療主要是針對(duì)牙菌斑細(xì)菌的抗生素的治療方法，此類治療藥物對(duì)于治療牙周炎有較好的療效，但是如果長(zhǎng)期使用易導(dǎo)致耐藥細(xì)菌的增多，從而導(dǎo)致口腔內(nèi)菌群的失調(diào)，某些藥物也可同時(shí)引起胃腸道刺激性等毒副作用。因此需研究并且開(kāi)發(fā)高效低毒的牙周炎治療的藥物以應(yīng)用在臨床治療中。因此我們進(jìn)行了紫景天對(duì)實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙周組織的病理作用的研究，以給相關(guān)研究提供相應(yīng)證據(jù)。

通過(guò)本研究，我們發(fā)現(xiàn)紫景天總黃酮可以減輕牙周炎的病理性損傷，抑制牙周炎中的牙槽骨吸收。在大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的觀察中可見(jiàn)對(duì)牙周炎有明顯的預(yù)防和治療作用。本研究可為眾多牙周病患者帶來(lái)福音，推動(dòng)長(zhǎng)白山野生藥材資源開(kāi)發(fā)，本研究成果應(yīng)用前景廣闊，將對(duì)提高社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益具有重要的意義。

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