IL-1β、TLR3、NF-κB在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變中的表達及相關性研究*

謝 偉

武漢市東西湖區人民醫院(武漢430040)

宮頸癌是臨床常見生殖系統惡性腫瘤，其發病率呈上升趨勢，且逐漸年輕化，是導致女性死亡的重要原因[1]。宮頸癌發生與多種因素有關，其中持續性人類乳頭狀瘤病毒(Papillomavirus，HPV)感染是致癌的重要因素，且宮頸上皮內瘤變(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)的發生率隨HPV感染的增加而不斷升高，治療不及時可形成浸潤癌，最終達到宮頸癌發生，因而早期診斷和治療宮頸癌具有重要意義[2]。HPV感染可降低機體免疫系統，并產生大量炎癥因子，導致機體發生炎癥反應，從而造成組織損傷，其與白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)表達存在密切聯系。核轉錄因子-κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)能夠促進細胞增殖，并參與細胞凋亡，其具有免疫激活功能，在炎癥反應中起著重要作用。Toll 樣受體(Toll-like receptors，TLRs)能夠有效調控免疫反應，并能維持組織穩定性，其與炎癥反應、宮頸癌發展均存在密切聯系[3]。本研究通過探討不同宮頸組織中IL-1β、TLR3、NF-κB的表達以及相關性，旨在為宮頸癌治療方案選擇提供參考依據。

資料與方法

1 一般資料 選取2015年10月至2016年10月我院保留的106例婦科手術標本作為研究對象，納入標準：①符合宮頸癌或CIN診斷標準，并經病理組織檢查確診；②年齡35～60歲。排除標準：①合并其它炎癥疾病；②術前行放射治療或化療者。宮頸癌標準分期參照國際婦產科聯盟制定的標準進行判定。入選的106例患者中，宮頸癌、CIN、正常宮頸分別為45例、35例、26例，其中正常宮頸組織來源于因子宮肌瘤行全子宮切除術且術后病理證實為慢性宮頸炎的患者。宮頸癌分期：Ⅰ期、Ⅱ期分別為31例、14例；分化程度：低-中分化、高分化分別為29例、16例；淋巴結：轉移、未轉移分別為13例、32例。手術標本相關病理資料保存完整，且由專業醫師于顯微鏡下對標本切片進行觀察和確診。

2 檢測方法 使用甲醛溶液對標本組織進行固定，采用石蠟包埋后將其連續切片備用，切片時盡量避開壞死區，厚度以4 μm為宜。將切片置于載玻片上并烘干，采用HE染色進行核實診斷。分別采用二甲苯、遞減梯度酒精對切片實施脫蠟和脫水處理，采用高壓熱修復后進行PBS沖洗。采用免疫組織化學技術對IL-1β、TLR3NF-κB表達進行檢測，嚴格按照試劑盒說明進行操作，其中兔抗人IL-1β、TLR3、NF-κB多克隆抗體均由上海優維寧生物科技有限公司提供，免疫組織化學法試劑盒則由北京中杉金橋提供。分別將已知陽性宮頸癌組織、PBS緩沖液代替一抗作為陽性和陰性對照。胞質或胞核內均存在IL-1β、TLR3、NF-κB表達，其表達呈棕黃色顆粒。隨機觀察切片，根據細胞染色強度、陽性細胞在同類細胞中的百分比對結果進行綜合判定。其中染色強度：無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別記為0分、1分、2分、3分。陽性細胞在同類細胞中所占百分比：陽性細胞無表達或≤5%、6%～25%、26%～75%、>75%分別記為0分、1分、2分、3分、4分。將染色強度與陽性細胞在同類細胞中所占百分比分值相乘，0分、1～4分、5～8分、9～12分分別記為-、+、、，其中-或+均視為陰性，其余視為陽性。

結 果

1 宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β、TLR3、NF-κB表達 見表1。宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β陽性表達率分別為91.11%、71.43%、3.85%；TLR3陽性表達率分別為26.67%、74.29%、84.62%；NF-kB陽性表達率分別為93.33%、62.86%、3.85%。宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β、TLR3、NF-κB表達兩兩比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。

2 宮頸癌組織中IL-1β、TLR3、NF-κB表達與病理特征關系 見表2。IL-1β、NF-κB表達與病理分級、腫瘤分期、淋巴結轉移相關(P<0.05)，TLR3與腫瘤分期相關(P<0.05)。

表1 宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β、TLR3、NF-κB表達

表2 宮頸癌組織中IL-1β、TLR3、NF-κB表達與病理特征關系

討 論

TLRs受體在健康細胞中具有穩定組織、調節生存以及參與細胞凋亡等多種功能，TLRs-NF-κB信號通路不僅參與機體免疫應答和炎癥反應，同時參與癌變[4]。TLR3能夠有效介導病原體，從而促使機體發生免疫防衛，有資料顯示[5]，TLR3處于高表達時能夠有效清除腫瘤細胞。推測其作用機制為由于宮頸發生病變，促使TLR3表達增加，通過激活髓系分化因子88進行信號轉導通路，進而誘導腫瘤壞死因子、IL-1β等炎癥因子和Ⅰ型干擾素，通過激活免疫細胞，對病毒感染進行殺傷，并轉化細胞。當TLR3無法大量表達或水平異常時，導致其不能有效激活免疫應答，進而無法清除異常和病毒感染細胞，最終導致宮頸癌發生病變[6]。此外TLR3能夠激活NF-κB，在細胞凋亡、炎性反應中均發揮重要作用，并能為癌細胞逃避免疫應答提供便利。

NF-κB存在于細胞胞漿中，當其結合位點受到活化因素刺激時才能被激活。作為核轉錄因子，其介導多種細胞內信號傳導。此外NF-κB與多種基因轉錄有關，并參與宮頸癌發展。有資料顯示[7]，在宮頸癌組織中，NF-κB呈活化表達狀態。活性NF-κB過度表達能夠加速癌細胞分化和增殖，抑制癌細胞凋亡并促使其向惡性轉化，通過浸潤轉移逐漸形成腫瘤血管。IL-1β屬于淋巴細胞活化因子，同時在NF-κB信號通路中具有重要作用，其不僅參與炎癥反應，同時參與抗腫瘤過程，能夠有效調節細胞免疫激活。作為NF-κB的下游因子，其表達缺失可改變炎癥病理環境，在抗感染過程中缺失對免疫的監視，同時導致炎癥慢性化。

目前臨床普遍認為宮頸癌發生的病理基礎是持續性HPV感染，而病毒逃逸可促使HPV病毒大量復制，TLR3處于低表達狀態時，可造成HPV損傷，為持續感染提供便利，同時促使宮頸癌發展。有研究表明[8]，正常宮頸、CIN、宮頸癌中TLR3呈逐漸降低表達狀態。本研究結果顯示：在宮頸癌、CIN、正常宮頸組織中TLR3表達強度呈上升趨勢，且與腫瘤分期具有相關性，與上述研究結果基本一致。有資料顯示[9]，在HPV感染的女性中，TLR3表達增加，則病毒清除更為明顯。另有研究表明[10]，在正常宮頸、CIN、宮頸癌中TLR3表達無明顯差異，與本研究結果不一致，推測與TLR3檢測方法、研究樣本數量等因素有關。有資料顯示[11]，在宮頸癌和CIN發展中NF-κB異常表達起著重要作用。另有研究表明[12]，在宮頸癌和CIN中NF-κB表達高于正常宮頸。本研究結果顯示：在宮頸癌、CIN、正常宮頸組織中NF-κB表達呈逐漸降低趨勢，且與腫瘤分期、病理分級、淋巴結轉移存在密切相關，與上述研究結果基本一致，提示NF-κB與宮頸癌發生聯系密切，且在癌細胞轉移過程發揮作用。有研究表明[13]，宮頸癌發生與IL-1β存在密切聯系。另有研究表明[14]，正常宮頸組織中IL-1β表達低于宮頸癌和CIN組織。本研究結果顯示：宮頸癌、CIN、正常宮頸中IL-1β表達呈下降趨勢，且與腫瘤分期、病理分級以及淋巴結轉移存在密切聯系，與上述研究結果基本一致，提示癌細胞通過分泌IL-1β能夠有效激活炎癥反應，從而增強癌細胞侵襲能力，并加重損傷機體免疫系統。

綜上所述，在宮頸癌組織中，NF-κB、IL-1β均處于高表達狀態，與腫瘤分期、病理分級以及淋巴結轉移存在相關性，TLR3處于低表達狀態，與腫瘤分期存在相關性，研究IL-1β、TLR3、NF-κB在宮頸癌和CIN中表達，能夠為臨床治療提供參考依據。

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